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WU多瘤病毒-新发现的人类多瘤病毒的研究概况
随着人类多瘤病毒的不断被发现,人们对它的研究兴趣也越来越大.自2007年人类WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPyV)在呼吸道标本中被发现以来,世界各地陆续发表了发现WUPyV的报道.WUPyV在全世界广泛流行,可能在儿童时期获得感染,但大多数不表现临床症状.尽管WUPyV经常在呼吸道标本中发现,但是WUPyV是否为呼吸道疾病的病原还有争议.WUPyV的传播途径和流行性也有待进一步的研究.目前该病毒的流行病学资料主要来自PCR检测和血清学试验.本文现就WU多瘤病毒的研究进展作一综述.
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杭州市急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒感染的流行病学及基因特征分析
目的 了解杭州市急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPyV)流行特征和基因型别.方法 收集2011年3月至2013年6月间至浙江省儿童医院就诊的急性呼吸道感染患儿的鼻咽吸取物,用聚合酶链反应(PCR)法扩增VP2编码基因和VP2/1中间序列,测序后进行分型.选取代表性病毒株进行基因组测序.结果 收集的722份标本中,10份为WUPyV阳性,检出率为1.4％.WUPyV感染主要发生在夏季、秋季和冬季.患儿平均年龄为13.6月龄,男女性别比为9∶1,性别差异无统计学意义(P=0.09).WUPyV感染所致疾病为肺炎、喉炎和细支气管炎.WUPyV基因型别为Ⅰa型.代表性毒株HZ13024的基因组大小为5229 bp,与GenBank中WUPyV基因组序列相似性为99.8％～99.9％.结论 杭州市儿童急性呼吸系统疾病中存在WUPyV感染,感染率较我国其他地区低,基因型别为Ⅰa型.
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WU多瘤病毒在中国浙江地区的发现与鉴定
呼吸道病毒种类很多,大部分的病毒感染机体后可以导致大面积人群不同程度的发病,严重的可导致死亡[1].
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单纯WU多瘤病毒感染患儿的流行病学及临床特征分析
目的 探究呼吸道感染患儿中单纯WU多瘤病毒(WUpyV)的感染情况及临床特征,为呼吸道感染疾病的科学预防和治疗提供依据. 方法 收集2013年6月-2015年5月就诊于内蒙古医科大学附属医院儿科的1632例呼吸道感染患儿的临床资料,分析其流行病学及临床特征;应用多重PCR技术,对其进行病原学检测. 结果 在1632例呼吸道感染住院患儿中,病毒阳性检出1136例,阳性检出率69.61％,其中WUpyV感染46例,占2.82％.46例WUpyV感染患儿中,单纯WUpyV感染为22例(47.83％),合并其他病毒感染24例(52.18％).单纯WUpyV感染患儿的中位年龄为27.3个月,其中≤6个月8例(36.36％),6个月～4例(18.18％),2～岁6例(27.27％),3～岁2例(9.10％),≥5岁2例(9.10％);男性16例(72.73％),女性6例(27.27％).单纯WUpyV感染在春季呈现高峰(45.45％).单纯WUpyV感染患儿的临床症状多为发热、咳嗽和喘息,感染后主要被诊断为支气管肺炎. 结论 单纯WUpyV感染高发季为春季,患儿多为男性婴幼儿.单纯WUpyV感染的临床特征以发热、咳嗽和喘息为主,且多被诊断为支气管肺炎.
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深圳市急性呼吸道感染儿童WU多瘤病毒感染检测及临床特征分析
目的 了解深圳市急性呼吸道感染儿童WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPoyV)感染特点及临床特征.方法 收集深圳市两家医院急性呼吸道感染住院儿童咽拭子或鼻咽分泌物标本,采用PCR检测WUPoyV及9种常见呼吸道病毒,分析WUPoyV感染特点及临床表现. 结果 共收集2 025例患儿标本(年龄15 d～14岁),10种病毒至少1种阳性971例(阳性率为47.95％).检出 WUPoyV 39例,阳性率1.93％,其中26例(66.67％)为单纯WUPoyV感染,13例(33.33％)为WUPoyV与其他病毒混合感染,感染者平均年龄23.3月,92.31％的患儿＜4岁.WUPoyV感染全年均有发生,3～5月为发病高峰.WUPoyV感染症状主要表现为咳嗽、喘息、发热等,X线胸片检查主要为支气管肺炎或细支气管炎表现,临床症状和体征与其他呼吸道病毒感染相似;单纯感染与混合感染症状无明显差别. 结论 WUPoyV感染以＜4岁儿童组常见,全年均可发生;春末夏初多见,其临床表现与普通的支气管肺炎和支气管炎类似,深圳市小儿呼吸道感染可能部分与WUPoyV有关.
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WU多瘤病毒衣壳蛋白原核表达及初步分析
目的 获得WU多瘤病毒重组衣壳蛋白,分析其抗原性,筛选具有诊断价值的抗原.方法 采用PCR技术扩增WU多瘤病毒衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的基因片段,并将目的基因插入PGEX-20T表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达.用免疫印迹法对表达蛋白进行鉴定和分析并用临床样本进行初步验证.结果 重组质粒在BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导、SDS-PAGE和免疫印迹鉴定显示在相对分子质量(Mr) 69×103、63×103和56×103处出现清晰条带,重组质粒经双酶切鉴定,表达产物经GST标签鉴定均正确.16份呼吸道分泌物WU多瘤病毒核酸阳性血清标本和70份阴性标本免疫印迹分析表明,重组蛋白具有良好的抗原性.结论 成功构建了WU多瘤病毒衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的表达载体,表达的重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步研究提供了资料.
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小儿呼吸道WU多瘤病毒感染免疫致病机制的初步研究
目的 了解WU多瘤病毒(WUPyV)在小儿呼吸道感染时其急性期外周血细胞因子的变化,以探讨该病毒感染的免疫致病机制.方法 应用PCR技术对儿科急性呼吸道感染1 253例住院患儿的咽拭子及82例健康体检儿童咽拭子进行WUPyV核酸检测,并同时检测呼吸道合胞病毒(RSV)、人类博卡病毒(HBoV)、人偏肺病毒(hMPV)、腺病毒(ADV)、流感病毒A、B型(IFV)、副流感病毒1、3型(PIV)和鼻病毒(Rhv)共10种病毒.采用液相蛋白芯片技术同时对15例单纯WUPyV感染患儿、20例单纯RSV感染患儿、22例正常对照儿童外周血血清中12种细胞因子(IFN-γ、IL-1β、IL-1α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-12p40、IL-13、TNF-α)的含量进行检测.结果 1 253例患儿WUPyV阳性32例(占2.55%),其中单纯WUPyV感染15例(46.88%),合并其他病毒感染的有17例(53.13%),分别为RSV、RHV、IVA、ADV;RSV阳性158例(占12.61%),其中单纯RSV感染85例,合并感染73例,与另9种病毒均存在混合感染情况.82例健康体检儿童10种病毒的PCR检查均阴性.单纯WUPyV组患儿外周血IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、IL-12p40水平较正常对照组明显升高(P均<0.05),单纯RSV组患儿外周血IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、IL-12p40水平也较正常对照组明显升高(P均<0.01),单纯WUPy组此5种细胞因子较正常对照组升高的程度均较单纯RSV组稍低,但两病毒组间此5种细胞因子差异无统计学意义(P均>0.05).单纯WUPyV组及单纯RSV组患儿外周血IL-2、IL-4、IL-1α、INF-γ水平均稍高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).3组儿童外周血中几乎未检测到IL-10、IL-12p70、IL-13.结论 WUPyV感染可导致患儿免疫功能异常,其模式与RSV组感染导致的异常细胞因子改变类似但程度较轻.
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WU多瘤病毒实时荧光聚合酶链检测方法的建立与应用
目的 建立快速、准确、特异的检测WU多瘤病毒的实时荧光聚合酶链反应方法.方法 根据TaqMan探针技术荧光定量PCR原理,以WU多瘤病毒VP2基因为靶序列,设计并合成引物和荧光探针;优化PCR反应条件,评价实时荧光PCR方法的特异性、灵敏度、重复性;并对394例临床样本进行检测.结果 成功建立了WU多瘤病毒的荧光定量PCR检测方法;该试验所建立的实时荧光PCR方法可准确、特异的检测WU多瘤病毒;该方法可定量检测1.0×100～1.0×107拷贝范嗣的WU多瘤病毒;检测的批间和批内的变异系数均<5.0%;394例患儿痰标本中共检测出3例人WU多瘤病毒阳性,阳性率为0.76%.结论 所建立的WU多瘤病毒荧光定量PCR法敏感性较高,重复性、特异性良好,适合于临床标本检测及大样本量筛查,可为临床诊断及流行病学研究奠定方法学基础.
关键词： WU多瘤病毒 实时荧光聚合酶链反应 检测 -
WU多瘤病毒与呼吸道合胞病毒感染患儿临床特征比较
目的 探讨和比较WU多瘤病毒(WUPyV)以及呼吸道合胞病毒(RSV)所致呼吸道感染患儿的临床特征.方法 应用多重PCR技术,检测呼吸道感染住院患儿WUPyV、RSV等病毒感染情况,并收集WUPyV和RSV感染患儿的临床资料.结果 2008年1月至2010年9月,在1 701例呼吸道感染住院患儿的咽拭子标本中检测出WUPyV阳性46例(2.7%),RSV阳性 365例(21.5%);单纯WUPyV感染为22例(47.8%),单纯RSV感染为88例(24.1%).RSV感染患儿的合并感染率高于WUPyV感染患儿,两者差异有统计学意义(χ2 ＝11.723,P ＝ 0.001).WUPyV阳性检测率在春季呈现高峰,RSV则在冬季.WUPyV感染患儿的中位年龄为26.2个月,RSV感染患儿为14.9个月,两者差异有统计学意义(U ＝ 669.5,P ＜ 0.05).WUPyV感染患儿的临床表现和体征与RSV感染相似,咳嗽(χ2 ＝ 13.34,P ＜ 0.001)和喘息(χ2 ＝ 10.53,P ＜ 0.001)在RSV感染的患儿中更为多见.WUPyV感染后主要被诊断为支气管肺炎,而RSV感染后主要为毛细支气管炎.单纯RSV感染患儿更多需要激素治疗(χ2 ＝ 9.321 P ＝ 0.002).结论 部分患儿呼吸道感染与WUPyV感染有关,WUPyV感染的临床特征与RSV感染类似.
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天津地区KI和WU多瘤病毒在儿童急性呼吸道感染中的分子流行病学研究
目的 了解KI和WU多瘤病毒(KIPyV和WUPyV)与天津地区儿童急性呼吸道感染的关系.方法 采用PCR扩增方法对2011年1月至2013年12月收集的3730份来自天津地区的急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本进行KIPyV和WUPyV基因检测,同时所有标本均用直接免疫荧光法检测7种常见呼吸道病毒.选取部分KIPyV和WUPyV PCR阳性产物进行测序,利用测序序列与已知序列比对并绘制进化树.再从中选取两株KIPyV VP1基因克隆到T载体上,进行序列测定和分析,并将核苷酸序列提交GenBank.结果 3730份标本中,KIPyV阳性检出453份(12.14%),WUPyV阳性检出63份(1.69%).KIPyV平均感染率在6~7月明显偏高,WUPyV平均感染率在2~3月达到一个小高峰.两种多瘤病毒感染的阳性患儿年龄主要集中在3岁以内.KIPyV和WUPyV与其他7种呼吸道病毒存在混合感染,混合感染率为2.31%(86/3730);WUPyV和KIPyV混合感染9份.选取的35份KIPyV阳性PCR产物序列与GenBank已公布的KIPyV序列的同源性在94%~100%之间;选取的12份WUPyV阳性PCR产物序列与GenBank已公布的WUPyV序列的同源性在95%~100%之间.两株KIPyV VP1基因序列已被GenBank收录,登录号为KY465925和KY465926.结论 天津地区部分儿童的急性呼吸道感染可能与WUPyV和KIPyV感染相关.KIPyV感染多发于夏季,WUPyV感染多发于春季.KIPyV和WUPyV与国内外流行株间差异较小,基因组相对稳定.
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WU多瘤病毒的研究进展
下呼吸道感染是全世界范围内造成5岁以下儿童死亡的主要疾病,每年约有250万病人[10].尽管病毒感染是小儿下呼吸道感染的重要原因,但是据世界卫生组织统计,目前约有10%～39%小儿下呼吸道感染的病因未明[13],因此,呼吸道病原学的研究对于医学界仍是一个巨大的挑战.WU多瘤病毒(WU Polyomavirus,WUPyv)是新近发现的一种人类相关多瘤病毒,由于该病毒与儿童及婴幼儿的下呼吸道感染关系密切,虽然发现不久,却引起了各国研究者的注意.
