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免疫相关基因在结核性肉芽组织中的表达变化分析
目的:研究免疫相关基因在结核性肉芽组织中的差异表达.方法应用基因芯片技术和生物信息学方法,采用多聚赖氨酸修饰玻璃载玻片进行接触式点样,制作包含626个人体免疫相关基因片段的cDNA芯片.
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媒介按蚊抗疟原虫感染的免疫相关基因研究进展
疟疾仍然是严重危害人类健康的传染性疾病之一,每年有300～500万人感染疟疾并导致100多万人死亡.按蚊是疟疾的传播媒介,由于按蚊对杀虫剂抗性的产生和扩散,目前尚无有效的防制措施.随着分子生物学技术的发展和疟疾防治的需要,世界卫生组织于20世纪 90 年代初提出一项基因操纵控制蚊媒新策略,即通过转基因手段,把蚊虫抵抗疟原虫感染的相关基因转入蚊基因组, 使其稳定遗传并在自然种群中扩散, 以期减少甚至阻断疟疾的传播.研究疟原虫感染引起蚊媒体内的生物学改变,特别是对按蚊中抑制疟原虫感染免疫相关基因的研究, 是实现这一策略的重要研究课题.目前的研究热点主要集中于三类基因:按蚊的模式识别受体、抗疟原虫感染的基因和效应调节基因.本文就这一方面的研究进展作一综述.
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HLA等免疫相关基因及MTHFR在新疆哈萨克族食管癌中的筛检效果评价
目的:评价免疫相关基因HLA-DRBl*0901、TAP2379、TAP1637及叶酸代谢基因MTHFRC677T作为新疆哈萨克族(简称哈族)食管癌人群筛检指标的作用和意义.方法:以胃镜+组织病理学检查为金标准,确定哈族食管癌125例,对照250例;采用PCR或PCR-RFLP技术对所有样本检测HLA-DRB1*0901,TAP2379、TAP1637及MTHFRC677T的基因型及基因频率,利用筛检实验的评价方法评价上述指标的真实性及可靠性.结果:HLA-DRB1*0901、TAP2379、TAP 1637及MTHFRC677T单独检测哈族食管癌的灵敏度分别为:24.0％,44.8％,58.4％,74.4％,特异度分别为:90.8％,77.2％,61.6％,45.6％;对这4个基因检测结果进行不同的组合后评价其真实性,结果显示,这4个基因联合检测的并联试验的灵敏度高,达91.2％；MTHFRC677T及TAP1637联合检测的并联试验,灵敏度为88.0％.结论:MTHFRC677T可作为新疆哈族食管癌的筛检指标;也可采用MTHFRC677T和TAP1637联合检测,能提高灵敏度l3.6％.
关键词： 食管癌 哈萨克族 筛检 免疫相关基因 亚甲基四氢叶酸还原酶 -
胃癌中医证型相关基因的表达谱
目的:寻找不同胃癌证型组织中的相关基因表达谱差异表达,对研究胃癌证型实质进行探讨、胃癌的中医证的基因诊断及指导临床用药有重大的意义.方法:我们运用含有4 096条人类全长基因的cDNA表达芯片技术,对胃癌中医证型邪热内蕴证和气滞血瘀证共4例,胃癌组织及胎胃正常组织基因表达进行了分析.结果:两证型都有免疫相关基因的下降,也有癌基因的上调,但热毒内蕴亚型基因表达提示了正气未虚,尚有防御能力,如nm23基因增高,p18基因表达增高;而气虚夹瘀亚型中则无此改变.结论:胃癌患者的基因表达既有相同表达改变,也有不同中医证型的基因谱表达改变也不相同,基因表达谱可为中医的证型提供科学依据.
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甲泼尼龙和环磷酰胺冲击治疗及环孢素A对肾移植受者淋巴细胞免疫基因的影响
甲泼尼龙(MP)、环磷酰胺(CTX)冲击治疗是目前国内同种异体肾移植术术中及术后2 d主要的免疫抑制治疗,它同时还是临床逆转移植肾急性排斥的常用疗法.环孢素A(CsA)是目前同种异体肾移植术术后主要的免疫抑制药物,其免疫药理作用的研究集中于蛋白水平.本研究利用基因芯片技术分析MP+ CTX冲击治疗及CsA对移植肾受者淋巴细胞免疫相关基因的影响,从中筛选出差异表达基因,进行功能研究,从而揭示它们的作用靶基因,为临床更有效地用药提供新的理论和实验依据.
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右归丸调控老龄肾阳虚免疫相关基因表达水平的研究
目的:研究右归丸对老龄肾阳虚体质干预前后其免疫相关基因定量表达水平的差异,探讨右归丸调控的分子靶向.方法:基于课题组前期获得的老龄肾阳虚证差异基因表达谱,筛选免疫相关差异表达基因28条.纳入老龄肾阳虚体质者,给予右归丸治疗28 d,以肾阳虚半定量诊断标准进行疗效评价,采用RT-PCR技术检测右归丸对老龄肾阳虚干预前后28条免疫相关基因的定量表达水平差异.结果:28条免疫相关基因经右归丸干预前后有7条基因存在表达水平差异.结论:经PCR验证的老龄肾阳虚免疫相关差异表达基因集中反映了肾阳亏虚对免疫系统功能的影响,提示肾阳虚体质与肿瘤发生可能存在某种关联机制.
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小鼠胸膜问皮细胞免疫相关基因表达谱与中医藏象理论相关性研究
目的:研究小鼠胸膜间皮细胞(pleural mesothelial cellPMC)免疫相关基因表达谱的状况.从而探索用现代免疫及基因芯片技术评价解释中医藏象理论的新方法.方法:取8只BALB/c小鼠胸膜组织块剪切成碎块,提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图象采集与数据分析等过程获得基因表达谱.结果:共筛选出小鼠胸膜问皮细胞免疫相关表达基因204条.其中主要有免疫应答及调节基因56条;炎性反应基因32条;非特异性免疫基因14条;T细胞增殖、活化、调节等相关基因23条,B细胞活化、分化、调节等相关基因9条;急性反应期基因5条;抗原加工与提呈基因4务;Ⅱ型超敏反应正向调节基因5条.结论:胸膜间皮细胞既表达免疫相关的正向调节基因,亦表达负向免疫相关的调节基因.提示胸膜可能为一免疫协调器官,这对丰富中医藏象理论与肺气的实质将提供分子生物学的基础研究依据与新的思路.
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菌毒炎并治法对脓毒症大鼠免疫相关基因的影响
目的:观察菌毒炎并治对脓毒症大鼠免疫相关基因的影响,探讨其免疫调节机制.方法:将大鼠分为模型组、菌毒炎组、对照组.用盲肠结扎穿孔术复制脓毒症模型.菌毒炎组腹腔注射抗生素、血必净注射液,凉膈散煎剂灌胃;对照组和模型组腹腔注射生理盐水.杀死大鼠后用芯片检测肝基因,筛选差异基因,查询功能并分类.结果:检测到差异表达的已知基因48个,其中免疫相关基因7个.结论:菌毒炎并治法对于脓毒症大鼠的改善可能与其对免疫相关基因的调控有关.
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基因芯片研究与衰老相关免疫基因的表达
目的:利用基因表达谱芯片,研究免疫相关基因在衰老过程中表达水平的改变.方法:分别提取20只20月龄SD大鼠和20只4月龄SD大鼠的脾脏mRNA,并通过逆转录制备成杂交探针;老年大鼠用Cy5d-UTP标记,青年大鼠用Cy3 d-UTp标记.将两种探针等量混合后与包含416个免疫相关基因的cDNA芯片进行杂交.通过扫描仪扫描芯片荧光信号和计算机分析,比较老年组和青年组大鼠脾脏的基因表达水平的差异.同步检测老年组大鼠和青年组大鼠的心、肝、肾和血液中的与自由基相关的生化指标.结果:生化指标检测证实20月龄老年大鼠与4月龄青年大鼠清除自由基的能力有显著的差异,说明其生理机能有显著差异,适用于芯片的研究.而芯片结果显示在所研究与免疫相关的基因中,13个基因在老年大鼠脾脏中表达下调,其中包括参与应激和免疫应答的基因,部分参与细胞增殖、分化的调节基因和参与DNA/RNA修复基因;只有1个基因,即编码良性肿瘤淀粉酶的基因在老年大鼠脾脏中表达特异增高.结论:运用基因表达谱芯片可以帮助我们了解免疫系统在衰老过程中的变化,深入理解衰老的发生和发展机制.
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应用基因芯片技术对Graves病免疫相关基因的研究
应用基因芯片技术研究Graves病(GD)和正常成人甲状腺组织免疫相关基因的差异表达.分别用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将GD组和对照组甲状腺组织的mRNA分别标记成探针,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交.通过扫描荧光强度,计算机软件分析,寻找两组差异表达基因.GD组和正常对照组之间共筛选出80条差异表达基因,其中表达增加的基因有31条(2.0倍以上),表达降低的基因有49条(0.5倍以下).基因表达谱芯片筛选GD与正常成人甲状腺组织差异表达基因具有样品用量少、高速度、高敏感、高通量等特性.通过筛选所得差异基因提示GD的发病涉及细胞因子、受体信号转导等多个方面,为进一步阐明GD的发病机制提供新线索.
关键词： Graves病(GD) 基因芯片 免疫相关基因 差异表达 -
按蚊免疫相关基因及其多态性研究进展
病原体感染媒介按蚊后,会引起一系列免疫反应,其过程涉及数量众多的免疫相关基因,包括病原体识别、信号调节、信号转导及效应反应等.初步研究表明按蚊免疫相关基因多态性与其易感性和进化相关.该文就近期按蚊免疫相关基因及其多态性研究进展进行综述.
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褪黑素对T淋巴细胞株免疫相关基因表达谱的作用
目的利用基因表达谱芯片研究T淋巴细胞株(HUT78)在褪黑素作用后免疫相关基因表达的差异性.方法用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将干预组和对照组的HUT78细胞的mRNA分别标记成两种探针,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交,通过扫描荧光强度,计算机软件分析,寻找经褪黑素作用后表达有差异的基因.结果 T淋巴细胞株受褪黑素作用24 h后,共筛选出42条差异表达基因,其中35条基因上调,7条基因下调.结论褪黑素激活的人淋巴细胞,是通过对一些基因的调控而发挥免疫调节作用.
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食管癌局部免疫相关基因的差异表达
应用微矩阵表达谱基因芯片研究3例食管癌及其对照癌旁组织(距病灶2cm以内)的局部免疫相关基因的变化.在所检测的3例临床标本中,共有的差异表达免疫相关基因8条,上调基因5条,下调基因3条,有多类基因,有免疫蛋白超家族、细胞因子、膜联蛋白等.食管癌和对照癌旁组织间存在差异表达的免疫相关基因,其与癌的发生、发展的不同有关.
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猪带绦虫六钩蚴TSO18基因的克隆和表达
囊虫和绦虫在中国大部分地区是一个重要的公共卫生问题,对人的健康危害很大.猪的囊尾蚴感染率也较高,每年造成的经济损失达20亿元.猪囊虫病的免疫预防是一个难度很大的课题.主要原因是抗原成分复杂且不能大量生产.随着分子生物学技术在寄生虫研究领域的应用,通过寻找免疫相关基因,在体外克隆并表达该基因,用表达产物作为抗原进行免疫和诊断无疑是一个新的研究方向和热点.澳大利亚学者Johnson[1] 用基因工程方法克隆并表达了羊绦虫六钩蚴45W抗原,用其制成的疫苗对羊的保护率达94%.这一突破性成功标志着用基因工程的方法研制猪囊虫疫苗是切实可行的.疫苗研究的另一策略是鉴定并克隆宿主保护性抗原的同源序列.分子生物学方法使这一策略可以快速实现,而且在牛囊虫证明是非常有效的.用编码羊绦虫18K保护性抗原的cDNA为探针,从牛绦虫mRNA中克隆了一个同源序列TSA18,其编码蛋白与T.ovis 18(To18)的同源性为80%,表达蛋白能诱导高水平的免疫保护,抵抗牛绦虫虫卵的攻击感染[2].六钩蚴18kD抗原所诱导的免疫保护力在抵抗几种带科绦虫方面也是有效的,有些基因的工程苗已用于实际的生产[3].为了验证TSO18在囊虫病预防中的作用,获得新的更有效的免疫原基因,我们进行了该项研究.
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猪带绦虫六钩蚴TS018基因的克隆和表达
囊虫和绦虫病在中国大部分地区是一个重要的公共卫生问题,对人的健康危害很大.猪囊尾蚴感染率也较高,每年造成的经济损失达20亿元.囊虫病的免疫诊断和预防是一个难度很大的课题.主要原因是抗原成分复杂且不能大量生产.通过寻找免疫相关基因,在体外克隆并表达该基因,用表达产物作为抗原进行免疫和诊断无疑是一个新的研究方向和热点.
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胶质瘤基因治疗的研究进展
脑胶质瘤是中枢神经系统常见的恶性肿瘤,因其浸润性生长且容易复发,手术、放疗、化疗等治疗措施疗效不十分理想.基因治疗的深入研究,为脑胶质瘤提供了一种新的治疗方法 和策略.现将胶质瘤基因治疗的研究进展情况综述如下.
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外源性B7-1基因诱导抗肺癌主动免疫的实验研究
我们通过构建了携带肿瘤免疫相关基因B7-1的重组腺病毒,并将其感染肺癌细胞,观察了转染基因的表达,同时检测了体外诱导自体外周血淋巴细胞生成肿瘤杀伤性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL).
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变应性鼻炎并发支气管哮喘患者免疫相关基因表达的研究
目的:探讨免疫相关基因在变应性鼻炎并发支气管哮喘患者体内的差异表达.方法:对变应性鼻炎并发支气管哮喘患者外周血单个核细胞进行总RNA抽提,纯化后的mRNA进行逆转录制备杂交探针,应用含有4000条人类全长互补DNA(cDNA)的免疫相关基因表达谱芯片对8例变应性鼻炎并发支气管哮喘患者(鼻炎组)和8例正常健康者(对照组)外周血单个核细胞进行差异表达谱分析.结果:在对基因表达谱原始数据进行标准化校正、聚类分析和统计学处理后,发现鼻炎组4000条免疫相关基因中差异表达基因351条,其中与细胞信号和传递蛋白相关基因16条,与代谢相关基因13条,与免疫相关基因8条,与DNA结合、转录、转录因子和蛋白翻译合成相关基因各7条,与原癌基因和抑癌基因相关基因6条,与离子通道和运输蛋白相关基因3条,与细胞周期蛋白类、细胞骨架和运动相关基因2条,与细胞凋亡相关蛋白、DNA合成和修复、重组蛋白、细胞受体相关基因各1条,其他未分类基因279条.有22条基因表达较对照组增高或降低4倍以上.结论:变应性鼻炎并发支气管哮喘患者免疫功能改变涉及到多个基因,rnf-8、il-8、ppat等免疫相关基因差异变化显著,可为变应性鼻炎并发支气管哮喘患者发病机制的研究提供新的思路.
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cDNA微矩技术用于脓毒症小鼠肺组织中差异性表达基因的检测
目的:本文在小鼠盲肠结扎一穿孔引起的混合感染性脓毒症模型上,首次采用了cD NA微矩阵 (基因芯片)检测技术,研究脓毒症中肺组织在脓毒症后早期(6 h)和晚期(12 h)的基因表达的改变,以期从基因水平上揭示脓毒症性急性肺损伤的发病机制并为进一步寻找其新的防治手段打下基础.方法:(1)小鼠混合感染性脓毒症的构建:以小鼠CLP ,构建混合感染性脓毒症模型.(2)CLP后肺组织中差异性表达基因的检测:小鼠分为脓毒症组(A组)及假手术对照组(B组):分别于CLP后6 h、12 h摘取全肺,-70℃保存待测;检测:采用上海联合基因公司提供的含2304个小鼠cDNA克隆杂交点的MCEG 20S型基因芯片;各组不同时点的肺组织标本经RNA提取、mRNA纯化后,经逆转录反应分别合成标记以Cy5(A组)或Cy3(B组)荧光素的cDNA探针;各时点的A、B两组探针混合后分别与上述基因芯片杂交,经严格洗脱后用Sc anArray 5000型激光共聚焦扫描仪:以两种不同波长分别对芯片进行扫描,得到芯片的荧光信号强度数据;以Image3.0软件分析各时点两组间的荧光值之比(R).R＞2.0为表达上调,R ＜ 0.5为表达下调.结果:(1)CLP后小鼠肺组织均出现典型的急性肺损伤的病理改变.24 h生存率为40%;48 h的生存率为7.5%;72 h的生存率为5%.(2)在CLP后6 h和12 h, 共筛选出80个与假手术对照组相比出现差异性表达的已知功能基因,其中表达上调和下调者各40个;CLP后6 h有23个已知基因出现差异性表达,其中上调者12个,下调者11个;CLP 后12 h,有75个已知基因出现差异性表达,其中表达上调者39个,下调者36个;(3)对以上差异性表达基因按其功能予以聚类分析,发现脓毒症引起的急性肺损伤涉及到肺组织中一系列功能基因的表达改变,其中包括免疫相关基因、急时相反应与热休克反应相关基因、抗氧化反应基因、细胞骨架相关基因以及多种细胞代谢和信息传递相关基因.它们对脓毒症的病理生理的演变,可能起了重要的作用.(4)通过对本试验所发现的差异性表达的基因的生物信息学分析,遴选出了具有进一步研究价值或潜在治疗作用的基因.结论:脓毒症中,一系列与炎性反应和细胞免疫相关的基因表达增高.同时热休克反应、抗氧化反应以及与细胞能量代谢和骨架结构相关的基因表达抑制,这可能是脓毒症病理生理改变进行性加重的原因 .利用基因芯片技术可高效率、大规模地检测脓毒症、AL和MODS时基因表达的改变,高通量筛选与脓毒症发生和发展相关的基因,有利于从分子水平上澄清脓毒症的病理生理机制,比较不同的干预治疗效果,寻找新的治疗目标和治疗药物.
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Cdx2基因过表达对胃癌细胞免疫相关基因表达的影响
目的 利用基因表达谱芯片技术筛选过表达Cdx2的胃癌MGC-803细胞与对照组间差异表达的免疫相关基因,探讨Cdx2对胃癌细胞免疫相关基因表达的影响.方法 分别抽取Cdx2转染组和对照组的细胞总RNA,分离纯化mRNA并逆转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记cDNA 探针,与含有21 522条人类22 K基因表达谱芯片进行杂交.采用LuxScan 10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种信号,应用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析. 结果在21 522条基因中,胃癌细胞间差异性表达基因为有551条,其中302条上调,249条下调.其中与免疫相关的基因共有7个,分别为HLA-E、RRAS、ULBP2、HLA-G、HLA-C、CTSB、CTSL,均表达上调.结论 Cdx2过表达上调了胃癌MGC-803细胞免疫相关基因的表达,这可能与胃癌细胞生物学行为的改变有关.
