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10%姜黄酊治疗囊虫病56例
囊虫病是由猪带绦虫的幼虫猪囊尾蚴寄生于人体各部位所致的疾病.以皮下组织与肌肉多见,其次是脑、眼等.笔者在1990年10月~1999年2月用姜黄酊治疗56例囊虫病患者,取得较好的临床疗效,现报告如下.
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发育过程中的猪带绦虫囊尾蚴的组织学观察
目的系统地研究猪囊尾蚴发育过程中的组织结构变化. 方法仔猪感染猪带绦虫卵不同时间后剖杀,取囊尾蚴寄生部位作病理组织学检查. 结果同一宿主不同部位甚至同一宿主同一部位囊尾蚴的组织结构发育程度不同.感染后19 d在骨骼肌中即有幼年期囊尾蚴出现,组织学检查显示了头节的早期发育,其他组织器官内未发现有囊尾蚴寄生.感染后30 d骨骼肌内寄生的囊尾蚴出现小钩及吸盘的雏形.随着猪囊尾蚴体内发育时间的延长,头节区逐渐分化,出现吸盘及折叠.感染后60 d,骨骼肌内寄生的囊尾蚴头节区出现较大的吸盘和大量折叠.70 d以后的囊尾蚴在组织学结构上和60 d的囊尾蚴相似.在每一发育阶段均有退化变性的囊尾蚴出现.(本文图1~6,见封底) 结论猪囊尾蚴的早出现时间大约是感染后19 d,而成熟时间大约是感染后60 d.在猪囊尾蚴的组织结构发育过程中囊壁相当于暂时的胚胎,头节在囊壁的基础上分化而来.
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猪囊尾蚴cDNA文库的构建
从猪囊尾蚴内提取mRNA经反转录合成cDNA, 应用定向克隆的方法,将合成的cDNA片段重组到噬菌体载体Uni-ZAP XR的EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点之间.5 μg poly(A)+ RNA所构建的表达文库容量为0.98×106重组子.经含有IPTG和X-gal的颜色选择平皿测定,提示重组率达86 %.随机取6个噬菌斑做PCR,检查插入片断的长度在100~2 020 bp 之间.
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猪囊尾蚴膜联蛋白基因的原核表达和免疫学分析
目的 对猪囊尾蚴AF239799-1膜联蛋白基因进行高效原核表达,对表达产物进行免疫学分析. 方法 通过DNA自动合成仪,用固相亚磷酸酰胺法合成一段5'端有Nde Ⅰ内切酶位点,3'端有Xho Ⅰ内切酶位点的猪囊尾蚴AF239799-1基因序列,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,经测序、PCR及双酶切鉴定后,将其转入到宿主菌E.coli BL21 (DE3)中,用IPTG诱导表达,表达产物采用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化,纯化的重组蛋白用Western blot进行免疫学分析. 结果 该基因全长为1 250 bp,编码区为2~1 042 bp,编码346个氨基酸,理论分子质量、等电点分别为40.39 ku和6.80.经DNA测序、PCR及双酶切鉴定,pET28a(+)-AF239799-1重组质粒构建成功.重组质粒在E.coli BL21 (DE3)主要以包涵体形式表达,Westernblot显示重组蛋白可被猪带绦虫病猪血清识别. 结论 猪囊尾蚴AF239799-1基因可在原核表达系统中高效表达,表达产物具有免疫反应性.
关键词: 猪囊尾蚴 AF239799-1基因 原核表达 免疫反应性 -
猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA 3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的细胞免疫效应
目的 观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗pcDNA 3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的小鼠细胞免疫应答. 方法 将真核重组表达质粒pcDNA 3.1-TSO45-4B肌注小鼠,RT-PCR方法扩增出目的条带;ELISA方法检测小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4及IFN-γ含量. 结果 RT-PCR产物为单一条带,大小为456 bp,与TSO45-4B大小一致.免疫小鼠第2周细胞因子含量达到较高水平,第4周达到高水平,第8周开始下降. 结论 基于猪囊尾蚴保护性抗原TSO45-4B的DNA疫苗能在小鼠体内表达并有效诱导细胞免疫效应.
关键词: 猪囊尾蚴 pcDNA3.1-TSO45-4B 疫苗 RT-PCR 细胞免疫 -
猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA 3.1-TSO45W在小鼠体内诱导的体液免疫效应
目的 观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗TSO45W诱导的小鼠体液免疫应答. 方法 碱裂解法大量制备重组质粒pcDNA3.1-TSO45W及对照质粒pcDNA3.1.将45只雌性昆明小鼠(4~6周)随机分为3组,每组15只.A组(生理盐水组):每只小鼠肌肉注射生理盐水100μl;B组(空质粒pcDNA3.1对照组):每只小鼠肌肉注射空质粒100 μg;C组(重组质粒pcDNA3.1-TSO45W组):每只小鼠肌肉注射重组质粒100 μg.分别于免疫后2、4、6、8、10周以ELISA方法检测小鼠血清免疫球蛋白IgG,IgM及IgA含量. 结果 pcDNA3.1-TSO45-4B免疫组小鼠血清IgG、IgM、IgA均于第4周开始升高,分别为(17.36±1.85)μg/ml、(9.25±1.78)μg/ml和(9.41±0.88)μg/ml,并分别于第8、第6、第8周达到高,含量分别为(24.26±2.52)μg/ml、(10.69±0.52)μg/ml和(11.22±1.23)μg/ml,与空质粒对照组(B组)和生理盐水对照组(A组)比较差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 猪囊尾蚴保护性抗原TSO45W DNA疫苗能在小鼠体内诱导体液免疫效应.
关键词: 猪囊尾蚴 pcDNA 3.1-TSO45W 疫苗 体液免疫 -
猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B3基因的原核表达、纯化以及免疫反应性分析
目的 将猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B3基因进行原核表达,分析重组蛋白的免疫反应性. 方法 根据Ts8B3基因序列设计引物,以囊尾蚴RNA反转录的cDNA为模板PCR扩增Ts8B3基因,扩增产物经BamH I /Xho I双酶切后连接至原核表达载体pGEX 4T-1,将重组质粒转化人大肠埃希菌DH5α(E.coli DH5α),PCR、双酶切筛选阳性质粒,测序确认后转化至E.coli BL21,用异丙基-βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表达产物.纯化重组蛋白,以囊虫病人血清为一抗,采用Western blot分析其免疫反应性.结果 PCR扩增Ts8B3基因片段为201 bp,双酶切和测序显示重组表达质粒构建成功.重组质粒转化BL21后经IPTG诱导4h,以包涵体的形式表达相对分子质量单位(Mr)为33×103的目的蛋白.纯化的重组蛋白能被囊虫病患者血清识别. 结论 成功构建Ts8B3基因重组质粒,表达的重组蛋白具有免疫反应性,为进一步研究该蛋白在抗体检测中的应用奠定了基础.
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吡喹酮治疗脑内猪囊尾蚴囊的透射电镜观察
用吡喹酮治疗脑囊虫病的临床报道较多,其用药剂量及疗程不尽一致.现将3例用吡喹酮治疗后不同时间,脑内猪囊尾蚴囊的透射电镜观察结果报告如下.
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囊虫病免疫诊断候选抗原研究进展
猪囊尾蚴免疫诊断抗原的研究是囊虫病免疫诊断的基础.猪囊尾蚴抗原成分复杂,特别是虫体粗抗原,与多种寄生虫存在明显的交叉抗原成分,影响检测的特异性.近年来随着分子生物学的发展,重组抗原制备简单,检测效果良好,已成为囊虫病免疫诊断研究的热点.本文对近年来囊虫病免疫诊断抗原的分子生物学研究进展进行了综述.
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左上睑猪囊尾蚴误诊霰粒肿1例
患者,女,32岁.因左上睑无痛性肿物1年而于2000年10月8日来本站就诊.既往健康,体格检查无异常发现.眼部检查:左右眼视力各1.0,左上睑中央部可见黄豆大小肿物,可移动,双眼玻璃体及眼底均正常.临床诊断:左上睑霰粒肿.在局麻下行霰粒肿刮除术,术中见肿物约1.0 cm×0.6 cm,圆形、白色、半透明,触之柔软.术后病理诊断为左上睑猪囊尾蚴.
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以脑脊液嗜酸性粒细胞升高为主的脑囊虫病2例
例1,女,42岁,山东长清人.因癫痫发作于2001年12月23日来本院就诊.前期该患者头痛、呕吐、意识障碍,无其它异常体征.在当地医院诊断为"癫痫",给与对症处理,效果不佳,仍有抽搐发作而转来我院诊治.脑脊液检查:WBC计数偏高,嗜酸性粒细胞比例显著增高,占18%.以侯氏玻片法收集CSF,MGG染色后高倍镜镜检,嗜酸性粒细胞形态多为双叶核,胞浆中有较多的嗜酸性颗粒.取皮下结节进行活检,鉴定为猪囊尾蚴.血囊虫ELISA阳性.头部CT扫描:额叶、颞叶各有一小片状不规则低密度阴影,强化后为环状影,直径分别为1.7 cm和1.5 cm.结合实验室检查结果确诊为脑囊虫病.
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重症脑囊虫病致昏迷1例报告
患者,女,8岁,济南市仲宫镇桃村人.1999年8月始出现突发性昏迷,昏迷呈间歇性,间隔5~15 d不等,呈逐渐加重趋势.在当地镇医院抢救无效,于1999年12月10日转来我院.颅脑CT平扫显示脑白质弥漫性低密度水肿,灰白质分界模糊,并见弥漫性低密度小囊,脑室、脑沟和脑池变窄.脑脊液和脑电图检查无异常,眼底镜检查无异常.查体发现患儿有多个皮下结节,结节呈圆形或椭圆形,直径0.5~1 cm,硬度似软骨,与周围组织无粘连、无压痛,头部和躯干较多,四肢较少.取出结节活检证实为猪囊尾蚴.给予吡喹酮连用4 d,总剂量120 mg/kg,二氯甲双酚晨空腹口服4 g驱虫治疗及对症处理,病情有所缓解.因家庭经济条件极差,后拒绝治疗,自动出院.2000年4月因持续昏迷5 d再来我院,经抢救无效死亡.尸解发现患儿全身肌肉及大脑皮质、白质及脑室均有大量猪囊尾蚴寄生.
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乳腺猪囊尾蚴病2例
例1,女,36岁,工人,吉林市人。左乳腺组织内有1 cm×1.5 cm的肿块,触稍痛。市内医院以“乳腺纤维瘤”于1999年12月手术摘除。病理诊断为乳腺猪囊尾蚴。翌年5月因头痛、癫痫反复发作来我院。头部CT诊断:脑囊虫病。囊虫免疫检查:CAg、IHA及ELISA均(+)。综合诊断:脑合并乳腺囊虫病。经住院抗囊虫治疗,临床治愈出院。
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人IL-2真核表达质粒对副肌球蛋白核酸疫苗的免疫调节作用
目的观察IL-2表达质粒对副肌球蛋白(AgB)核酸疫苗的免疫调节作用.方法将人的IL-2全长cDNA插入到真核表达质粒pcDNA3中构建成pcDNA3-IL-2重组质粒;然后接种C57BI/6小鼠(分为pcDNA3组、AgB组、联合免疫组),ELISA法检测小鼠血清中的IgG和IgG2a的水平;用MrTT法检测小鼠脾细胞增殖反应,用ELISA法检测其分泌的IL-2和IL-4的水平.后在仔猪中进行攻击实验,观察pcDNA3-IL-2质粒的免疫刺激作用.结果注射疫苗后,pcDNA3-IL-2协同注射组增强了副肌球蛋白特异性的IgG和IgG2a的水平,增强了脾细胞的增殖反应,提高了其分泌IL-2的水平,但对IL-4的水平产生轻微影响.仔猪攻击实验中,共同注射IL-2基因组提高了仔猪的相对保护率.结论对于副肌球蛋白核酸疫苗而言,人的IL-2表达质粒是一种很好的免疫佐剂.
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猪囊尾蚴保护性抗原cC1的疫苗研究
囊虫病是由猪带绦虫幼虫-囊尾蚴寄生于人和猪体引起的人、畜共患病,在我国囊虫病也有广泛的流行区域.抗原cC1是以囊虫病患者、病猪血清为探针从猪囊尾蚴cDNA文库中筛选出的具有高度特异性的人、猪共同抗原[1].以抗原cC1为目的基因构建了含有全长cC1 cDNA的重组质粒p3-cC1,同时制备并纯化了重组抗原cC1,以p3-cC1为DNA疫苗,cC1蛋白加弗氏佐剂为抗原佐剂疫苗,用这两种不同形式的疫苗免疫接种小鼠观察免疫应答.
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儿童脑囊虫病15例分析
脑囊虫病是猪囊尾蚴寄生在人脑的一种疾病,多见于成人,儿童发病率低,但近年来有不少儿童脑囊虫病的报道,为提高对本病的认识,我们对我科1994-2002年收治的15例儿童脑囊虫病,进行了回顾总结,现分析如下.
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抗脑囊虫头节和囊壁鸡卵黄抗体的制备
鸡卵黄免疫球蛋白IgY(Yolk Immunoglobulin)是近几年研究的热点,本文把IgY用于对脑囊虫抗体的制备,为囊虫抗体的获取开辟了新思路.自新鲜病猪肉中摘取猪囊尾蚴,用TBS缓冲液浸洗并吸干水分.然后将头节和囊壁剥离,经离心及饱和硫酸铵溶液处理制成抗原.用分光光度法测定蛋白含量.将抗原与福氏完全佐剂混合制成乳浊液,免疫34周龄美国海兰特产蛋母鸡40只,分为2组,每组20只.分别进行头节和囊壁抗原的免疫,每只鸡以1ml抗原于左右背部和胸部多点注射.
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猪囊尾蚴rTS-CC18蛋白的原核表达、纯化及其抗原性分析
目的 制备猪带绦虫囊尾蚴rTS-CC18抗原并对其抗原性进行鉴定,为建立猪囊尾蚴检测技术提供诊断抗原.方法 用PCR方法从重组质粒pGEM-TS-CC18中扩增TS-CC18编码基因,构建pET30a-TS-CC18重组表达载体,转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导筛选高表达量菌株.采用Ni-FF亲和层析方法提纯表达蛋白.Western blotting及间接ELISA检测重组蛋白的反应活性.结果 Tricine-SDS-PAGE表明,重组菌经0.5 mmol/LIPTG诱导6 h,可稳定表达可溶性rTS-CC18蛋白,其相对分子质量约16×103.Western blotting检测诱导的蛋白能与猪囊尾蚴阳性血清发生特异性反应;间接EHSA检测血清抗体结果表明:纯化的rTS-CC18蛋白与全囊虫抗原的相对特异性达100.0%,相对敏感性达84.0%,总符合率为94.3%.结论 成功制备了猪囊尾蚴rTS-CC18抗原,其特异性、敏感性及稳定性良好,对诊断猪囊尾蚴病及开发诊断制剂具有潜在应用价值.
关键词: 猪囊尾蚴 rTS-CC18抗原 原核表达 纯化 抗原性 -
槟榔与白胡椒对猪囊尾蚴形态学改变的影响
目的观察研究中药槟榔、白胡椒对体外培养的猪囊尾蚴形态学改变的影响. 方法取经槟榔、白胡椒药液作用不同时间的囊尾蚴进行大体形态及扫描电镜观察. 结果经槟榔、白胡椒分别作用30 min, 1 h后所有虫体蠕动均停止. 槟榔、白胡椒对囊尾蚴分别作用20 min, 40 min, 虫体表面开始出现部分剥蚀区, 且随时间延长, 其剥蚀区增大. 结论两种药物作用于囊尾蚴的效果均好, 可以作为人或猪囊虫病的治疗药物.
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脑囊虫病患者的诊断及治疗探讨
脑囊虫病是中枢神经系统常见的寄生虫病,为猪囊尾蚴寄生于脑部所致.我国以东北、华北、西北地区多见.近年来我国南方城市脑囊虫发病率呈上升趋势.我们将近些年来收治的44例患者,观察其治疗前后影像学和免疫学的变化,探讨对此病的诊断及驱虫药物的应用.