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猪囊尾蚴抗原DNA疫苗诱导的免疫保护效应
目的:观察猪囊尾蚴保护性抗原cC1 DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答,及对仔猪的免疫保护作用. 方法:将全长cC1 cDNA插入真核表达质粒载体pcDNA3,构建了重组质粒p3-cC1,肌注小鼠,ELISA检测小鼠血清抗cC1抗体IgG及IgG2a水平,并进行仔猪的免疫保护实验. 结果:免疫小鼠第3周出现特异性IgG应答,第8周IgG水平达到高;小鼠血清的IgG2a检测显示,第2周IgG2a 应答即为阳性,且长时间保持较高应答水平.用该疫苗免疫仔猪使其获得了73%的保护率. 结论:猪囊尾蚴保护性抗原cC1 DNA疫苗能有效诱导仔猪的免疫保护效应.
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猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗的免疫保护性研究
目的:研究猪囊尾蚴副肌球蛋白(AgB)核酸疫苗诱发的免疫应答.方法:将pcDNA3-AgB核酸疫苗肌注4～6周龄的昆明种小鼠,从2周后开始用ELISA方法检测小鼠体内IgG和IgG2a的水平.另外将该核酸疫苗注射C57BL/6小鼠,体外培养小鼠脾细胞,用刀豆蛋白A(ConA)和特异性抗原刺激,ELISA试剂盒检测细胞因子IL-2和IL-4的水平,并观察脾淋巴细胞增殖反应.另外,将该核酸疫苗肌注瘦型仔猪,进行攻击实验,计算相对保护率.结果:注射疫苗后的第3周起,IgG即为阳性,持续升高至第8周;从第2周起,小鼠血清IgG2a为阳性,第4周达到高峰.细胞因子检测表明,IL-2水平远远高于空载体对照组,而IL-4含量却与空载体对照组无显著差异;实验组刺激指数明显高于空载体对照组.副肌球蛋白核酸疫苗对仔猪的相对保护率为80%.结论:猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗在小鼠动物实验中引发了以Th1型免疫应答占优势的全面免疫应答.pcDNA3-AgB核酸疫苗对仔猪具有较好的免疫保护性.
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猪囊尾蚴跨膜蛋白T24基因的克隆及序列分析
目的 寻找猪囊尾蚴病新的免疫学候选诊断分子.方法 设计合成引物,用PCR法从猪囊尾蚴cDNA文库中扩增出猪囊尾蚴跨膜蛋白T24基因编码序列,将其与线性克隆载体PMD-18T连接,分别进行酶切和PCR鉴定及DNA测序证实.结果 PCR法扩增出一条长度约678 bp的特异性片段,将重组质粒PMD-18T-T24作BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,均能得到一个大小与PCR扩增产物一致的插入片段,对插入片段的测序结果表明,T24具有一个长度为678 bp的完整开放阅读框,编码225个氨基酸,理论分子量为23.91 kDa,与GenBank收录的猪囊尾蚴T24基因(编号为AY211879)具有高度的同源性(99.85%).结论 猪囊尾蚴跨膜蛋白T24编码基因克隆成功,为进一步的表达、鉴定及免疫诊断研究奠定了基础.
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猪囊尾蚴一种蛋白抗原的cDNA分子克隆
目的从猪囊尾蚴cDNA文库中克隆某种编码蛋白抗原的基因.方法用脑囊尾蚴病人血清筛选猪囊尾蚴cDNA文库,获得阳性克隆后,经PCR技术扩增噬菌体载体中插入的cDNA片段,并将其亚克隆入pUC18质粒载体中,用双脱氧核苷酸末端终止法测定插入片段的核苷酸序列.测序后与GenBank中的核苷酸序列进行同源性分析.结果经3次筛选,从cDNA文库中克隆出一个阳性克隆,测序后其长度为546 bp,含有一个开放读码框,编码158个氨基酸.同源序列分析结果表明此基因片段与编码猪囊尾蚴的一种免疫原性蛋白基因(NC-9)同源性高达99%.结论本研究克隆出一种编码猪囊尾蚴蛋白抗原的基因.
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酶联免疫吸附试验检测4种寄生虫感染效果
目的 观察酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪囊尾蚴、细粒棘球蚴、卫氏并殖吸虫和曼氏裂头蚴感染的效果.方法 以2008-2011年就诊于江苏省寄生虫病防治研究所的患者为检测对象,采用ELISA法检测血清抗体.每份血清均检测囊尾蚴、棘球蚴和卫氏并殖吸虫IgG抗体,2011年6月起增加检测曼氏裂头蚴IgG抗体.结果 共检测282例患者,其中IgG抗体检测1项或2项同时阳性者88例,总阳性率为31.2％；囊尾蚴、棘球蚴、卫氏并殖吸虫、曼氏裂头蚴IgG抗体1项阳性者分别为39、2、21、3例；囊尾蚴和棘球蚴IgG抗体2项同时阳性者15例,囊尾蚴和卫氏并殖吸虫抗体同时阳性者5例,棘球蚴和卫氏并殖吸虫抗体同时阳性者3例,88例阳性标本中交叉反应者23例,交叉反应率为26.1％.结论 目前仍存在一定数量的寄生虫感染者.ELISA检测抗寄生虫IgG抗体存在交叉反应.
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血吸虫病化疗致眼囊尾蚴病失明1例
眼囊尾蚴病为猪囊尾蚴寄生眼部所致,囊尾蚴眼内死亡可致玻璃体混浊及视网膜脱落,造成严重后果,本院诊疗1例血吸虫病化疗致眼囊尾蚴病失明患者.
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猪囊尾蚴抗原基因GP50的表达及鉴定
目的 为了寻找猪囊尾蚴病新的免疫学候选诊断分子,克隆猪囊尾蚴抗原GP50编码基因,并进行表达、鉴定.方法 设计合成引物,用PCR法从猪囊尾蚴cDNA文库中扩增出猪囊尾蚴抗原GP50基因编码序列,将其克隆入pGEM-T载体,然后在真核表达载体pBKCMV中亚克隆,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot观察表达结果.结果 RT-PCR法扩增出一条大小约897bp的特异性片段,克隆质粒pGEM-GP50和真核表达质粒pBKCMV作BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切和以重组质粒为模板进行PCR扩增,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段.诱导表达后,经SDS-PAGE可见一条约36kDa大小的融合蛋白条带,Western blot结果显示其可与猪囊尾蚴病人血清起反应.结论 本实验成功地克隆了猪囊尾蚴抗原GP50编码基因,并在原核细胞中进行了表达及鉴定,为进一步的免疫诊断研究奠定了基础.
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眼囊虫病1例报告
患者,女,15岁,白族,云南大理市人,因右眼视力突然下降,视物模糊入院.患者自诉有食生肉史,否认绦虫病史.查右眼视力不到0.1,血清囊虫抗体阴性,超声检查发现眼底一活动囊肿伴视网膜脱离,手术治疗并取出囊肿经病理鉴定为猪囊尾蚴,两周后视力恢复至0.6.术后给予吡喹酮治疗两个疗程.
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结膜下猪囊尾蚴病1例
患者,女,7岁.主因左眼下穹窿肿物3年余,于1999年3月10日来我院眼科就诊.临床检查:一般情况良好,神志清,查体合作.眼部检查:双眼视力1.2,双眼眼压正常,右眼未见异常,左眼下穹窿部结膜下可见圆形的结节,直径约1.0cm,触及坚实而有弹性,无压痛、活动度良,周围结膜无充血、无水肿,余均未见异常.血常规、尿常规、大便常规检查均未见异常.疑结膜下囊肿,在局麻下行左眼结膜下囊肿切除术,术中见出血不多,与周围组织无粘连,分离结膜取出一约0.8cm×0.8cm大小白色半透明呈囊状的活体组织.送病理检查:镜下可见虫体及头节,病理确诊为结膜下猪囊尾蚴,术后口服抗生素及吡喹酮等药物.
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首次对金平县猪囊尾蚴鉴定及猪带绦/囊虫病感染流行因素的调查
人体猪带绦虫病感染主要由生食或食入未煮熟的含囊尾蚴的猪肉所致,金平县少数民族较多,各自生活习惯不同,并有嗜食生猪肉的不良饮食习惯.为了解金平县少数民族不良生活习惯与绦/囊虫病之间的关系,我们于金平县屠宰场采集"米糁猪肉",对囊尾蚴进行鉴定,并对少数民族的生活习惯、饮食习惯进行了解,为今后的防治工作提供依据.
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感染猪囊尾蚴的家猪组织中不同时间IL-6、IL-8、TNF-α和sIL-2R含量变化
目的 研究实验家猪感染猪囊尾蚴不同时间组织中细胞因子IL-6、IL- 8、TNF-α和sIL-2R含量变化,从细胞因子角度探讨家猪抗猪带绦虫免疫应答的机制.方法 用猪带绦虫虫卵直接灌胃20d龄健康乳猪4头,并以健康乳猪4头作对照.于感染后第40、60、80和120 d取实验组猪肝脏、骨骼肌、心肌、舌肌及脑组织中囊尾蚴寄生处组织200mg匀浆,用ELISA法测定匀浆上清液中细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α和sIL-2R的含量.结果 1.肝脏病变组织中4种细胞因子的含量在40d时均明显高于同期对照组(P<0.01);随感染时间延长,4种细胞因子的含量逐渐降低,至80d时与同期对照组差别缩小(P<0.05),120d时肝脏已无囊尾蚴寄生;对照组肝脏组织中4种细胞因子的含量在不同时间始终保持基本稳定. 2.肌肉和脑部份病变组织中4种细胞因子的含量在40d时也明显高于同期对照组(P<0.01);随感染时间延长至80d时与同期对照组差别变小(P<0.05),120d时与同期对照组差别无显著性(P>0.05).3.对照组家猪肝脏中4种细胞因子的含量绝对值高于肌肉和脑组织(P<0.01);实验组肝组织在40d时各种细胞因子的增量更明显高于肌肉和脑组织中的增量(P<0.01).结论 家猪感染猪带绦虫早期,IL-6、IL-8和TNF-α作为前炎性反应因子在家猪肝脏的高水平表达诱导肝脏发生严重的炎症反应,限制和杀灭肝内的早期囊尾蚴,而肌肉和脑组织中这些细胞因子表达稍低,炎症反应相对较轻,因而囊尾蚴易于在这些部位存活.这一点可以从感染后期肌肉、脑组织中的囊尾蚴数量远多于肝脏而得到证实.
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猪囊尾蚴cDNA文库的筛选与重组蛋白的初步鉴定
目的 从猪囊尾蚴cDNA文库中免疫学筛选阳性蛋白的编码基因.以期获得囊尾蚴病新的免疫学诊断候选分子.方法 免疫学筛选cDNA文库,用PCR法扩增出猪囊尾蚴候选蛋白基因编码序列,T载体连接,鉴定后将其亚克隆入pET28a(+)载体中.经酶切、测序证实正确后.转化入大肠杆菌BL21并用IPTG对该重组菌诱导表达.SDS-PAGE和Westernblot方法观察表达结果.结果 通过cDNA文库免疫筛选、测序和EXPASY软件分析,其一个684bp ORF DNA序列为新基因(命名为Tsl).录入号为EU009656;将Tsl基因克隆入pET28a(+)载体中诱导表达,可得到一分子量约28.0kDa融合蛋白,并能被囊尾蚴病人血清识别.结论 本试验成功筛选、克隆出一个新囊尾蚴编码基因.并在原核细胞中表达,为进一步验证其免疫诊断价值奠定了基础.
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毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1的特征研究
目的研究毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征变化.方法对表达产物行SDS-PAGE,FPLC离子交换层析和分子筛,等电聚焦,脱磷酸反应,N端氨基酸测序,小鼠免疫接种.结果毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的分子量较原核的大,易于纯化,等电点较理论值低,重组cC1已被磷酸化,N端携带了来自载体的4个氨基酸,免疫原性较原核的明显增强.结论毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征较原核的有了明显变化,尤其是蛋白易于纯化及免疫原性的增强,表明毕赤酵母表达系统非常适合重组亚单位疫苗的生产制备.
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猪囊尾蚴发育过程中的细胞凋亡
目的研究猪囊尾蚴发育过程中猪囊尾蚴细胞是否存在凋亡.方法仔猪感染猪带绦虫卵后,定期剖杀,剥离囊尾蚴,作组织切片,采用TUNEL法检测囊尾蚴头节和囊壁细胞的凋亡率(S-AI和W-AI).结果头节细胞和囊壁细胞均存在凋亡现象,尤以囊壁细胞凋亡明显.感染后19d时头节细胞和囊壁细胞凋亡率较高,分别为7%和15%左右.以后随感染时间的延长而降低,至80d时稍有回升,并分别稳定保持在4%和8%左右.结论猪囊尾蚴发育过程中猪囊尾蚴细胞存在凋亡,且囊壁细胞凋亡明显.
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灭囊灵对体外培养的猪囊尾蚴虫体蛋白质组分及含量的影响
目的探讨灭囊灵杀灭猪囊尾蚴的作用机理.方法应用PAGE和薄层扫描技术,观察灭囊灵对体外培养猪囊尾蚴虫体蛋白质组分及含量的影响.结果灭囊灵组囊尾蚴蛋白经PAGE可分离出17～25条蛋白带.经薄层扫描分析:灭囊灵0.6ml、1.2ml和2.4ml三个剂量组在70～75区段蛋白扫描无峰;0.6ml组在105～110区段峰值高,1.2ml和2.4ml剂量组在110～115区段峰值高.峰面积积分值占8%以上者为高峰带,0.6ml和2.4ml组可见6个高峰,1.2ml组可见5个高峰.以上三项指标与原囊尾蚴和空白对照组均有明显差别.结论灭囊灵对猪囊尾蚴虫体蛋白组分和含量均有明显影响.
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猪囊尾蚴cDNA表达文库构建及抗原基因筛选
采用Quick Prep mRNA Purification试剂盒提取猪囊尾蚴mRNA; Time-Saver cDNA Synthesis试剂盒反转录合成双链cDNA,并在末端加上EcoRI/NotI adapto r,修饰后的cDNA与λgtll EcoRI臂连接,体外包装为λ噬菌体颗粒;感染E.coliY1090构建成功库容量为2×106、重组率为80%的cDNA表达文库.利用兔抗猪囊尾蚴虫体抗原和囊液抗原血清分别对一部分文库进行免疫印迹筛选,分别获得8个阳性克隆 .提取阳性克隆DNA,利用PCR法从重组噬菌体DNA中扩增出cDNA片段,长度自40 0-900bp.本文工作为研制猪囊尾蚴核酸疫苗打下了基础.
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猪带绦虫卵实验感染家猪后囊尾蚴在家猪体内发育的观察
目的 了解猪带绦虫卵实验感染中间宿主家猪后,囊尾蚴发育过程中在家猪体内各个器官的分布及其发育成熟所需的时间等.方法 以猪带绦虫卵(4.2万个/头)实验感染20～30日龄的家猪15头,在感染后不同时间宰杀,肉眼观察囊尾蚴在家猪体内各个器官上分布、数量、初次出现以及发育成熟所需时间等.结果 感染后的第10d剖杀仔猪,肉眼观察各部位及脏器内均未见到囊尾蚴生长.感染15～30d时只在肝脏组织内见到少量未成熟囊尾蚴.感染40～70d时在肝脏寄生的囊尾蚴数量增多,同时开始在前肢和后肢的肌肉、胸肌、颈肌、脑组织、肾脏、肺脏内逐步见到未成熟的囊尾蚴.感染80～100d时肝脏、前肢和后肢的肌肉、胸肌、颈肌、脑组织、肾脏、肺脏内部分囊尾蚴开始先后发育成熟,但各器官组织内囊尾蚴的成熟率不等,肝脏内囊尾蚴成熟率(82.00%)高于其他器官,各器官内囊尾蚴成熟率随感染时间增加而增高.感染110～130d时肝脏内囊尾蚴成熟率(98.97%)仍高于其他器官内囊尾蚴成熟率.实验的全过程中,各器官内未见到死亡和钙化的囊尾蚴,脾内未见囊尾蚴生长.结论 猪囊尾蚴可以在猪的肝脏内寄生,而且在肝脏内初次出现和发育成熟的时间均比其在全身的肌肉、脑等更早.提示猪肝脏也是囊尾蚴寄生的主要部位,在防治和卫生宣教工作中应予重视.
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中药体外抑制猪囊尾蚴作用的超微结构观察
目的观察中药在体外抑制猪囊尾蚴的超微结构变化.方法用透射电镜观察中药灭囊灵醇提取物、吡喹酮和丙硫咪唑体外作用于猪囊尾蚴的变化.结果中药组和吡喹酮组虫体皮层、基底膜、肌层和实质层细胞均明显受损,中药组对神经索的损伤作用强于吡喹酮.丙硫咪唑组虫体各层次细胞损伤均明显低于中药组和吡喹酮组.结论中药灭囊灵对猪囊尾蚴具有明显的杀伤作用.
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脑囊虫病的临床诊断与治疗(附153例报告)
脑囊虫病是猪囊尾蚴寄生在人脑的一种疾病,其临床表现复杂多样,临床认识不足时易误诊,且治疗时间长,对人体健康危害大.为了共同提高对该病的认识,现将我科4年来收治的153例脑囊虫患者的诊治情况总结分析如下.
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脑囊虫病的临床与磁共振分析
脑囊虫病是由猪囊尾蚴引起的常见的颅内寄生虫病,其临床表现复杂多样,不易识别,磁共振(MRI)等影象学表现对于诊断及治疗起到重要的作用.
