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电针对侧脑室注射孤啡肽实验性RA痛阈和皮肤FOS表达的影响
目的:观察电针对大鼠实验性关节炎痛阈和皮肤c-fos表达的作用及侧脑室注射孤啡肽(OFQ)对电针效应的影响.方法:将福氏完全佐剂(FCA)注入SD大鼠踝关节腔造成类风湿性关节炎的模型.44只SD大鼠随机分为A[模型+侧脑室注射生理盐水(NS)+电针,n=8],B(模型+侧脑室注射OFQ+电针,n=8),C(正常对照,n=8),D(模型,n=10)和E(模型+电针,n=10)组.大鼠麻醉(戊巴比妥钠30 mg/kg,I.p.)后,参照Noble方法定位,将OFQ(20 μL,50 μg/mL)或NS(20 μL)注入侧脑室(30 min内注完,保留1 min).右侧"太溪"和"足三里"针刺后连接WQ-10C多用途电子穴位测定治疗仪,用疏密波形,频率20/100Hz交替,电压2~4 V,波宽0.2~0.6 ms,持续20 min,电针每天1次,连续5天.痛阈用气压弹簧棒测定右后足掌心皮肤加压时动物的缩腿反应,每天1次,共测5天.取大鼠右后足垫部皮肤及皮下组织,采用免疫组织化学ABC法测定RA模型建立后各组c-fos表达.结果与结论:①电针对实验性RA关节痛具有明显的镇痛效应;②电针明显提高实验性RA大鼠痛阈,具有明显的后效应,注射OFQ对抗电针提高实验性RA大鼠痛阈,而且对抗电针的后效应;③电针抑制实验性RA诱导的FOS表达,注射OFQ对抗电针抑制FOS的表达.
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抗脑囊虫头节和囊壁鸡卵黄抗体的制备
鸡卵黄免疫球蛋白IgY(Yolk Immunoglobulin)是近几年研究的热点,本文把IgY用于对脑囊虫抗体的制备,为囊虫抗体的获取开辟了新思路.自新鲜病猪肉中摘取猪囊尾蚴,用TBS缓冲液浸洗并吸干水分.然后将头节和囊壁剥离,经离心及饱和硫酸铵溶液处理制成抗原.用分光光度法测定蛋白含量.将抗原与福氏完全佐剂混合制成乳浊液,免疫34周龄美国海兰特产蛋母鸡40只,分为2组,每组20只.分别进行头节和囊壁抗原的免疫,每只鸡以1ml抗原于左右背部和胸部多点注射.
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超声击破微泡介导EGFP转染类风湿性关节炎大鼠关节滑膜组织的实验研究
关节疾病的基因治疗是当今国内外研究的热门课题[1].超声击破微泡造影剂介导作为一种新型的基因转染方法,在心脏、脑、角膜及肿瘤组织中得到实验证实[2-4].本实验旨在探讨该方法在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis:RA)滑膜组织中实现基因转染的可能性.资料与方法一、质粒的提取与鉴定取大肠杆菌DH5α制备感受态细菌,将质粒pEGFP-C1转化感受态细菌,挑取单菌落接种到LB培养基中,37℃振荡培养过夜.提取质粒后酶切电泳鉴定.二、实验动物及分组1.建立RA大鼠动物模型:24只正常清洁级Wister大鼠,雌雄各半,体质量258~279 g,平均(261.57±5.42)g.Ⅱ型胶原乙酸溶液(4 mg/ml)4℃搅拌过夜后按1∶1滴加至冷的福氏完全佐剂中,充分乳化.每只大鼠在左后足底、尾根部、背部分3点皮内注射乳化液共0.25 ml,7d后用同样方法加强注射一次.大鼠四肢足爪均严重肿胀、踝关节直径增长幅度≥2mm为造模成功.
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Wistar 大鼠福氏佐剂性类风湿关节炎动物模型研究
①目的探讨 Wistar 大鼠佐剂性类风湿关节炎造模效果,为类风湿关节炎发生机制及治疗效果等相关研究中动物模型的应用提供实验依据。②方法将大鼠随机分为两组,分别为模型组和正常对照组,每组各20只。模型组于大鼠右足趾皮下注射福氏完全佐剂(CFA)0.15mL,造模后第7、14、21、28天对两组大鼠进行关节炎评分。测量每组大鼠右足趾关节肿胀度,分离脾脏并制备脾细胞悬液,计算脾细胞增殖率,ELISA 法检测血清中 IL-10与 IL-17的含量。③结果模型组致炎后7天足趾肿胀达峰值,14天后再度肿胀,21天出现皮肤溃疡,28天后溃疡面进一步扩大。大鼠模型组第14天脾细胞增殖率高于第7 天和第21天,差异有统计学意义(P <0.05),模型组不同时期脾细胞增殖率均高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);模型组第7、28天关节炎评分高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);第7、14、28天血清中 IL-10与 IL-17的含量高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。④结论模型组关节肿胀明显,大鼠表现接近于人体的类风湿关节炎(RA),且造模过程简单、稳定,是研究 RA 的较理想模型。
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链脲佐菌素致迟发型大鼠1型糖尿病模型的研究
目的 探讨链脲佐菌素(streptozocin,STZ)致迟发型大鼠1型糖尿病模型建立的方法.方法 将8只大鼠随机分为对照组3只,实验组5只;实验组将福氏完全佐剂(CFA)与小剂量STZ联合使用,连续3周大鼠腹腔注射,制造Wistar大鼠1型糖尿病模型,并对2组大鼠的进食量、饮水量、尿量、体重、血糖及尿糖进行密切监测,同时对实验组及对照组大鼠进行葡萄糖耐量实验(OGTT).结果 3只大鼠(60%)成模,实验组大鼠表现出多饮、多食、多尿、高血糖、高尿糖的1型糖尿病典型症状,与对照组大鼠的各项指标差异均有统计学意义(P<0.05),且实验组大鼠表现出葡萄糖耐量异常.结论 CFA与小剂量STZ联合使用可制造Wistar大鼠1型糖尿病模型.
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肾囊肿穿刺硬化治疗临床研究
肾囊肿穿刺治疗是一种很理想的疗法,穿刺治疗方法简单、创伤小、痛苦少、疗效好.2006年1月至2008年1月我们完成了多例碘伏联合福氏完全佐剂作为硬化剂的穿刺硬化治疗肾囊肿,疗效较好,报告如下.
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碘伏联合完全福氏佐剂穿刺硬化治疗肾囊肿的临床观察
无水乙醇是肾囊钟穿刺硬化治疗的常见硬化剂,在临床治疗中广泛使用,但术中术后出现明显疼痛,甚至因剧烈疼痛终止硬化治疗.经近几年临床实践,使用碘伏联合福氏完全佐剂对穿刺硬化治疗肾囊肿取得良好效果,治愈率高,并且避免了像无水乙醇穿刺硬化治疗引起的疼痛,为穿刺硬化治疗肾囊肿找到了又一优良方法.
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97、佐剂病
福氏完全佐剂是在液体石腊中加入死结核杆菌菌体成分组成的.把它和抗原混合在一起,研磨成油包水状态,再免疫动物,能增强对抗原免疫应答的物质.
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87、变态反应性脑脊髓炎
已知,接种狂犬疫苗以后,有时会发生脑脊髓炎.这是因为所用的疫苗是用含有动物脑组织的材料制成的,针对脑组织抗原而产生了免疫反应的缘故,从而对脑脊髓造成了损伤,如果将动物的脑组织混入福氏完全佐剂,然后免疫动物,也能诱发脑脊髓炎,将此称为实验性变态反应性脑脊髓(EAE).
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96、佐剂
佐剂是同抗原物质混合在一起进行免疫,增强机体免疫应答反应的物质.福氏佐剂是用液体石腊等矿物油类物质制成,同抗原水溶液混合,经研磨后能制备出油包水的混悬液,将其注射后,能使抗原物质缓慢释放,少量抗原持续性刺激免疫系统能增强免疫应答反应.如把结核杆菌、BCG、MDP(胞壁酰二肽)等物质加入福氏佐剂中,则可制备出福氏完全佐剂,就能诱导出强烈的细胞免疫.不加细菌的则称为福氏不完全佐剂.
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大鼠佐剂性关节炎的诱导及观察指标比较
大鼠佐剂性关节炎(AA)是常用于类风湿关节炎(RA)研究的动物模型之一,目前国内一般都是通过从其后足垫皮内注射福氏完全佐剂(FCA)进行诱导,采用经尾巴途径进行诱导较少见,且多以关节炎指数(AI)作为观察指标,采用放射学指数(RI)作为观察指标来评价 AA的病变程度国内尚未见有报道.本研究拟通过从大鼠尾巴皮内注射FCA诱导AA后,通过观察不同时点AI及RI,比较二者在AA病情演变过程中的异同.
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抗日本血吸虫重组蛋白20.8 kDa抗原单克隆抗体的建株
以日本血吸虫重组蛋白20.8 kDa抗原免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体.每鼠注入蛋白100 μg,共免疫3次,第1次加福氏完全佐剂,第2、3次加福氏不完全佐剂,间隔3wk.融合前,于免疫的BALB/c小鼠尾静脉注射50 μg血吸虫重组蛋白20.8 kDa抗原,4 d后取脾脏与骨髓瘤细胞SP2/O融合,11d后检测,融合率为13.54%(26/192).ELISA检测培养上清,筛选阳性孔,经3次克隆,获得6株阳性杂交瘤细胞株.将这6株细胞上清浓缩10倍,用琼脂双扩散法测得免疫球蛋白亚类为IgG14株,IgM 2株.将6株细胞扩增后注入BALB/c小鼠腹腔,诱生腹水.
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NJ967抗炎作用的研究
目的研究非甾体类抗炎新药-NJ967的抗炎作用.方法采用角叉菜胶诱导的大鼠急性足爪肿胀模型和福氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎模型.结果 NJ967 25,50,100 mg·kg-1灌胃给药可明显抑制大鼠急性足爪肿胀,其半数抑制量(ID50)为76 mg·kg;该剂量的NJ967预防与治疗给药,每天灌胃1次,连续7天亦可抑制大鼠佐剂性关节炎继发性足爪肿胀.结论 NJ967具有较强的抗炎作用.
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不同免疫接种方法在单克隆抗体制备中的应用及比较
在制备抗泡球蚴原头节可溶性抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞时,我们采用常规的小鼠腹腔免疫接种-脾淋巴细胞法(以下称腹腔免疫法)和后肢跖部局部免疫接种-胴淋巴结淋巴细胞法(以下称后肢跖部法),进行了4次杂交瘤细胞融合。经ELISA筛选和有限稀释克隆,后获得了16株可以稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。现将这两种免疫接种方法的结果及所获得的单克隆抗体的特性分析报告如下。1 材料和方法1.1 泡球蚴可溶性抗原手术摘取在沙鼠腹腔人工接种培养1年以上的泡球蚴包囊,在事先盛有生理盐水的培养皿中,粗铁纱网破碎过滤,沉淀用生理盐水悬浮清洗3遍后,在解剖镜下,仔细将位于中央的原头节收集,注意不要混入位于周围的大量石灰小体。取1.5×106个原头节,用pH7.4的磷酸缓冲液(PBS)漂洗2遍后,再冻融2次。将原头节混悬液与等容的50mM n-heptyl-β-D-thioglucoside(含0.5mM PMSF)混合,超声粉碎后,10000g×4℃离心1h。上清即为泡球蚴可溶性抗原。以Bradford法测定蛋白浓度后,用PBS调整为10mg/ml,分装冻存。1.2 单克隆抗体的制备1.2.1 腹腔免疫接种-脾淋巴细胞法 50μg以1ml PBS稀释的泡球蚴原头节可溶性抗原,与等容福氏完全佐剂充分乳化后,腹腔注射BALB/c小鼠。14天后,换用福氏不全佐剂同法加强免疫。2周后,再次以1mlPBS稀释的100μg抗原腹腔注射强化免疫。3天后,检测血清抗体滴度,手术摘取ELISA结果OD值超过1.0小鼠的脾脏,采取脾淋巴细胞后,与P3X63-Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞融合[1]。
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不同佐剂的弓形虫亚单位疫苗免疫效果观察
目的探讨不同佐剂增强弓形虫P30/35亚单位疫苗刺激肌体产生免疫应答和保护性免疫力效果.方法应用拟菌颗粒、脂磷壁酸、蜂胶3种佐剂分别和弓形虫P30/35特异蛋白组分混合、碾磨、免疫小白鼠,以福氏完全佐剂作对照,检测其细胞免疫和体液免疫,并观察其受到弓形虫攻击感染后的生存情况.结果拟菌颗粒佐剂能辅助弓形虫P30/35特异蛋白组分刺激宿主产生较高的细胞免疫和体液免疫,并能提供较好的免疫保护力.拟菌颗粒产生的IL-2较福氏完全佐剂稍低,但明显高于其它实验和对照组(P<0.01),特别是IFn-γ和CD4+/CD8+比值,两者差异均无显著性(P>0.05),并且拟菌颗粒刺激机体产生的IgG明显高于福氏完全佐剂(P<0.01).脂磷壁酸佐剂和蜂胶佐剂辅助P30/35刺激产生的细胞免疫应答及免疫保护力低于拟菌颗粒佐剂和福氏完全佐剂.结论拟菌颗粒佐剂与福氏佐剂具有相似增强免疫应答和提高P30/35特异蛋白组分抗原的免疫原性作用,可用于弓形虫亚单位疫苗的研制.
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祛风散对类风湿性关节炎作用及其机理研究(Ⅱ)
目的:探讨中药祛风散对佐剂性关节炎大鼠的影响.方法:用乙醚麻醉大鼠,于右后足跖皮下注射福氏完全佐剂致炎.致炎前或致炎后第8天灌胃祛风散,每天1次,每只灌胃容量5ml,连续28天.结果:致炎后第8天测定,祛风散组动物炎性组织中PGE2含量(0.028±0.005)比模型组的(0.068±0.008)降低了58.8%.第28天测定,模型组和强的松组动物体重分别降低了11.7%和59.5%,祛风散预防组和祛风散治疗组分别增加了45.2%、9.6%和18.4%;强的松组动物存活率第18天为80%,第28天为10%,其它各组未见死亡;右后肢足跖厚度和踝关节周长,模型组比致炎前增长了122.4%和88.0%,祛风散预防组增长了4.2%和0%,祛风散治疗2组增长了10.4%和5.5%.结论:祛风散对佐剂性关节炎大鼠足跖肿胀度、耳部红斑、尾部结节等病理性变化具有明显的预防和治疗作用.