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淋巴结淋巴细胞文献资料
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不同免疫接种方法在单克隆抗体制备中的应用及比较
在制备抗泡球蚴原头节可溶性抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞时，我们采用常规的小鼠腹腔免疫接种－脾淋巴细胞法(以下称腹腔免疫法)和后肢跖部局部免疫接种－胴淋巴结淋巴细胞法(以下称后肢跖部法)，进行了4次杂交瘤细胞融合。经ELISA筛选和有限稀释克隆，后获得了16株可以稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。现将这两种免疫接种方法的结果及所获得的单克隆抗体的特性分析报告如下。1 材料和方法1.1 泡球蚴可溶性抗原手术摘取在沙鼠腹腔人工接种培养1年以上的泡球蚴包囊，在事先盛有生理盐水的培养皿中，粗铁纱网破碎过滤，沉淀用生理盐水悬浮清洗3遍后，在解剖镜下，仔细将位于中央的原头节收集，注意不要混入位于周围的大量石灰小体。取1.5×106个原头节，用pH7.4的磷酸缓冲液(PBS)漂洗2遍后，再冻融2次。将原头节混悬液与等容的50mM n-heptyl-β-D-thioglucoside(含0.5mM PMSF)混合，超声粉碎后，10000g×4℃离心1h。上清即为泡球蚴可溶性抗原。以Bradford法测定蛋白浓度后，用PBS调整为10mg／ml，分装冻存。1.2 单克隆抗体的制备1.2.1 腹腔免疫接种－脾淋巴细胞法 50μg以1ml PBS稀释的泡球蚴原头节可溶性抗原，与等容福氏完全佐剂充分乳化后，腹腔注射BALB／c小鼠。14天后，换用福氏不全佐剂同法加强免疫。2周后，再次以1mlPBS稀释的100μg抗原腹腔注射强化免疫。3天后，检测血清抗体滴度，手术摘取ELISA结果OD值超过1.0小鼠的脾脏，采取脾淋巴细胞后，与P3X63-Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞融合[1]。
