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鱼腥草素钠栓有关物质检查方法学研究
目的:建立鱼腥草素钠栓有关物质的检查方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-水-10%四丁基氢氧化铵(75:125:0.6);检测波长283nm,流速为1.0ml/min.结果:通过辅料干扰试验,高温、光照、过氧化氢、酸和碱的破坏性试验等一系列试验证明了该方法的专属性和耐用性.结论:该方法能够较好控制本品有关物质.
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苦参碱、鱼腥草素钠及其与红霉素联用对表皮葡萄球菌生物被膜渗透作用的研究
目的：比较苦参碱、鱼腥草素钠及其与红霉素联用对表皮葡萄球菌生物被膜的渗透性，为中药及中西药联用治疗表皮葡萄球菌引起的相关感染提供研究的依据。方法：在体外建立SE-BF（表皮葡萄球菌生物被膜模型）和PB（生物被膜渗透模型），观察并测量含药滤纸片抑菌圈直径（每个时间点取样3个），计算苦参碱、鱼腥草素钠及其与红霉素联用对PB的渗透率。结果：苦参碱、鱼腥草素钠、苦参碱与红霉素及鱼腥草素钠与红霉素联用对Se738的36h渗透率分别达到93.94%、96.97%、89.34%、93.53%；苦参碱、鱼腥草素钠、苦参碱与红霉素及鱼腥草素钠与红霉素联用对ATCC35984的36h渗透率分别达到82.83%、88.55%、91.47%、96.76%。结论：中药有效成分苦参碱、鱼腥草素钠及其与红霉素联用对表皮葡萄球菌生物被膜均有较强的渗透性。
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鱼腥草素钠抑制铜绿假单胞菌致病相关运动能力的研究
鱼腥草素钠(sodium houttuyfonate,SH)是一种有效抑制致病菌感染的传统中药鱼腥草的活性成分的衍生物,但其抑菌机制尚没有被阐明.本研究通过铜绿假单胞菌运动能力试验发现,SH可在有效抑制与细菌致病性相关的浮泳运动、蹭行运动和集群运动能力.平板分析法实验结果表明24 h内SH对浮泳运动、蹭行运动和48 h内SH对集群运动的抑制趋势呈现显著的浓度依赖性特点;并且在1倍SH小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC) (512 mg·L-1)条件下,细菌的运动能力和阳性对照阿奇霉素(1倍MIC 16mg·L-1)一样基本丧失.进一步,基因表达分析发现SH显著抑制铜绿假单胞菌的鞭毛和菌毛结构基因flgB和pilG的表达,提示SH抑制细菌运动能力的可能机制是通过抑制细菌运动相关的特殊结构鞭毛和菌毛的合成而产生.因此,该研究结果首次证明SH可有效抑制细菌的运动能力,并探讨了抑制机制,为该药物在临床上治疗条件性致病菌铜绿假单胞菌提供理论依据.
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鱼腥草素钠增强亚胺培南抗铜绿假单胞菌生物被膜的作用
目的:研究鱼腥草素钠联合亚胺培南增强抗铜绿假单胞菌生物被膜的作用.方法:2倍稀释法测定被试药物小抑菌浓度(MIC),结晶紫染色法检测1/2MIC,1MIC,2MIC的鱼腥草素钠(SH)、亚胺培南(IMP)单药组和1/2MIC的SH与IMP各药物浓度联合组对黏附菌的清除量、生物被膜生长量、藻酸盐产生量的影响.FDA-PI荧光素双染法荧光显微镜下观察各药物组膜分散后死活细菌、生物被膜形态.结果:鱼腥草素钠能增强亚胺培南抗绿假单胞菌生物被膜的作用,尤以2MIC药物浓度联合组作用强(与阴性对照组比较P＜0.001).荧光显微镜下观察死活细菌、生物被膜形态支持了上述结果.结论:鱼腥草素钠联合亚胺培南能增强抗生物被膜作用,预期两药联合会提高相关感染的临床疗效.
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鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌黏附的清除作用及对生物被膜形成的影响
目的:研究鱼腥草素钠( houttuyfonate sodium,SH)对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)黏附的清除作用及对生物被膜( biofilm,BF)形成的影响.方法:用96孔板孔建立铜绿假单胞菌黏附生物被膜,MTT法检测膜内菌的代谢变化、评价药物对黏附菌的小清除浓度( minimum eliminateing concentration,MEC)及小抑膜浓度(sessile minimal inhibitory concentration,SMIC);菌落计数法观察药物对黏附、膜内菌量影响；扫描电镜观察药物对受试菌黏附作用及生物被膜的形态结构影响.结果:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的MEC80为500 mg·L-1,MEC50为125 mg·L-1,对铜绿假单胞菌早期生物被膜和成熟生物被膜SMIC80均为500 mg·L-1,早期生物被膜、成熟生物被膜SMIC50分别为31.25,1.95 mg·L-1.250mg·L-1药物浓度使载体上黏附的及初步生物被膜、成熟生物被膜内的活菌数明显减少,和对照组比较差异显著(P＜0.05),扫描电镜观察黏附载体上的细菌明显减少,连续用药后,成熟生物被膜阶段载体上未见有生物被膜结构,菌量明显减少并且细菌形态发生变异,由杆状变为球杆状.结论:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的黏附有较强的清除活性,通过连续给药能抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成.
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鱼腥草素钠及其与红霉素联用对产膜表皮葡萄球菌luxS,agr/RNAⅢ影响的研究
细菌的群体感应及特异基因表达调控在细菌生物被膜形成中有十分重要的作用.luxS,agr均是表皮葡萄球菌群体感应调控中的关键基因,RNAⅢ是agr系统的效应器分子.为了评估鱼腥草素钠及其与红霉素联用对产膜表皮葡萄球菌转录水平的影响,采用连续稀释法测定鱼腥草素钠、红霉素、万古霉素对表皮葡萄球菌的MIC;荧光定量PCR测定鱼腥草素钠及其与红霉素联用、万古霉素、红霉素等对表皮葡萄球菌作用后不同时间段luxS,agr/RNAⅢ的转录水平.结果表明1/2MIC,1/4MIC鱼腥草素钠,1/2MIC鱼腥草素钠+1/2MIC红霉素,1/4MIC鱼腥草素钠+1/4MIC红霉素,1/8MIC鱼腥草素钠+1/8MIC红霉素等在作用于ATCC 35984伊始,就可迅速上调luxS 的表达,与阴性对照相比,存在显著差异(P<0.05);在作用6,12,48 h后,鱼腥草素钠依然存在对luxS的上调作用.鱼腥草素钠在MIC,1/2MIC浓度时对agr表达均有显著下调作用(P<0.05),1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用、1/4 MIC鱼腥草素钠与1/4MIC红霉素联用,在作用6,12,24 h等时间段对agr表达的下调作用也很显著(P<0.05).鱼腥草素钠在MIC浓度时,对RNAⅢ表达亦有显著下调作用(P<0.05),1/2MIC鱼腥草素钠与1/2MIC红霉素联用对RNAⅢ表达的下调效果也很显著(P<0.05).提示鱼腥草素钠及其与红霉素联用,可以迅速上调表皮葡萄球菌luxS转录水平的表达,在特定浓度下可下调agr/RNAⅢ的表达,具有抑制表皮葡萄球菌生物被膜菌之间的相互黏附聚集、抑制膜内营养和输水通道的形成、阻止膜内细菌脱离、并抑制细菌外毒素形成等作用的可能.
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亚抑菌浓度鱼腥草素钠及与红霉素联合对表皮葡萄球菌生物被膜的作用
目的:观察亚抑菌浓度(亚-MIC)的鱼腥草素钠及与红霉素联用对表皮葡萄球菌生物被膜的影响.方法:连续稀释法测定鱼腥草素钠和红霉素对表皮葡萄球菌的MIC；棋盘格法测定鱼腥草素钠和红霉素联用对表皮葡萄球菌悬浮菌的作用；体外构建表皮葡萄球菌生物被膜,XTT递减法评价亚抑菌浓度的鱼腥草素钠及与红霉素联用对表皮葡萄球菌黏附及对生物被膜内细菌代谢的影响；扫描电镜观察亚抑菌浓度下2药单独及联合用药后对表皮葡萄球菌生物被膜形态的影响情况.结果:鱼腥草素钠、红霉素对表皮葡萄球菌的MIC分别为62.5,7.812 5 mg·L-1；1/8MIC鱼腥草素钠、1/2MIC红霉素联用对表皮葡萄球菌悬浮菌的作用为协同,亚抑菌浓度的鱼腥草素钠、红霉素以及二者联用对表皮葡萄球菌生物被膜菌黏附和代谢均有抑制作用,对表皮葡萄球菌牛物被膜的形态有影响.结论:亚抑菌浓度的鱼腥草素钠、红霉素对表皮葡萄球菌牛物被膜有抑制作用；鱼腥草素钠和红霉素联合用药对表皮葡萄球菌悬浮菌和生物被膜的抑制具有协同作用,在对生物被膜菌代谢的抑制和对牛物被膜形态的影响方面效果尤为显著.
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鱼腥草素钠灌洗治疗慢性上颌窦炎内镜术后的临床观察
我科从2003年5月-2005年8月对40例经功能性内窥镜鼻窦外科(FESS)术后的慢性上颌窦炎患者分别采用鱼腥草钠注射液和生理盐水作上颌窦灌洗对照比较,现将结果报告如下.
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鱼腥草素钠抗类风湿关节炎作用的探讨研究
目的 探讨鱼腥草素钠(SH)是否具有抗类风湿关节炎(RA)的作用.方法 ①体外实验:培养RA原代滑膜细胞,将RA滑膜细胞平均分为5组,分别标记为空白对照组、SH 25 μg/ml组、SH 50 μg/ml组、SH 100 μg/ml组、SH 200 μg/ml组.按照上述浓度将SH分别加入到各SH干预组中,同时,用等量的0.9%氯化钠溶液加入到空白对照组中,如此连续培养7 d后用MTT法检测各组吸光度值,分析SH对于体外RA滑膜细胞增殖的抑制作用.②体内实验:Wistar大鼠随机分成5组:空白对照组、模型组、SH 130 mg/kg组、SH 260 mg/kg组、SH 520 mg/kg组.建立大鼠胶原诱导的类风湿关节炎(CIA)模型,计数方法测定大鼠关节炎指数(AI),HE染色法光镜观察关节病理形态学变化.结果 体外实验结果显示与空白对照组相比,SH干预组的滑膜细胞增殖率明显降低,在SH 25 μg/ml组、SH 50 μg/ml组、SH 100 μg/ml组及SH 200 μg/ml组之间呈现出剂量效应关系;当200 μg/mlSH时达到大抑制率;体内实验结果显示CIA大鼠SH干预组关节炎指数较模型组低,HE染色可见SH干预组踝关节滑膜炎症明显减轻.结论 体内体外实验证实SH干预可抑制类风湿性关节炎的滑膜炎症.
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鱼腥草素钠与β-环糊精包络常数的电泳法研究
目的建立用毛细管电泳法测定包络物稳定性的方法,并以此研究抗菌药鱼腥草素钠与β-环糊精相互作用的强度,测定二者形成的超分子包络物的包络常数.方法用毛细管电泳法测定鱼腥草素钠的淌度,变化缓冲溶液中环糊精浓度,通过"电泳峰漂移法"及其数学模型,从鱼腥草素钠的电泳淌度差计算获得包络物的包络常数.结果鱼腥草素钠的淌度随着缓冲溶液中β-环糊精浓度的增加而增大,当淌度到达极限值后,不再随β-环糊精浓度的增加而变化.方法的重现性高.获得包络常数的对数值logKGH=3.81.结论鱼腥草素钠与β-环糊精间作用强,当1∶1混合时,鱼腥草素钠的理论转化率可达98%.其超分子包络物的包络常数值与β-环糊精浓度无关.毛细管电泳的电泳峰漂移法可以用于指导药物包络常数的测定,进一步可用于包络物在生理条件下的稳定性研究.
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有关鱼腥草素钠与合成鱼腥草素质量标准的探析
目的：通过红外分光光度法和高效液相色谱法证明鱼腥草素钠与合成鱼腥草素为同一物质，并建立高效液相色谱测定其片剂含量的方法。方法：采用C8（4．6 mm ×250 mm，5μm）色谱柱，以甲醇－水－10％四丁基氢氧化铵溶液（55∶45∶0．3）为流动相，流量1 mL? min－1，柱温45℃，检测波长为286 nm。结果：鱼腥草素钠与合成鱼腥草素在2．1～42μg? mL－1浓度范围内线性关系良好（ r＝1），平均加样回收率为99．0％（ n＝9）。结论：鱼腥草素钠与合成鱼腥草素质量标准应合并统一，所建立的方法简单，专属性好，辅料无干扰，适用于片剂的含量测定。
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鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌生物被膜作用的研究
目的 通过中药有效成分鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌生物被膜抑制作用的研究,为表皮葡萄球菌生物被膜引起的相关感染提供新的治疗途径.方法 利用XTT减低法评价鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌初始黏附及生物被膜内细菌代谢的影响.镜下观察该药对表皮葡萄球菌生物被膜的形态学影响.结果 鱼腥草素钠时表皮葡萄球菌生物被膜菌的SMIC50和SMIC80分别为62.5和1 000 mg·L-1;1 000 mg·L-1质量浓度的鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌早期黏附有抑制作用;500 mg·L-1质量浓度的鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌生物被膜的形态有显著影响.结论 鱼腥草素钠对表皮葡萄球菌生物被膜的形成与黏附均有抑制作用.
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鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌群感效应系统影响的研究
目的 研究鱼腥草素钠(SH)对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)群感效应系统的影响,以期探明SH抗PA的作用机制.方法 微量稀释法测定SH和阿奇霉素(AZM)对PA的小抑菌浓度(MIC);紫外分光光度法测定SH对PA LasA蛋白酶活性和绿脓菌素生成的影响;平板法观察PA的形态;半定量PCR法和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测群感效应相关的基因lasI、rhlI、lasR、rhlR、phzM、pqsA、pslA、lasA、lasB、toxA表达量的变化.结果 SH和AZM对PA的MIC分别为512 μg/mL和64 μg/mL;紫外分光光度法结果显示SH能够抑制LasA蛋白酶的活性和绿脓菌素的合成;SH能够显著影响PA的形态;半定量PCR和qRT-PCR结果显示在SH作用下lasI、rhlI、lasR、lasA、pslA、phzM基因表达显著发生变化.结论 SH具有抗PA群感效应属性,通过抑制PA的群感效应系统发挥抗菌作用.
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鱼腥草分散片处方优化研究
目的 利用均匀设计法及相关分析优选鱼腥草分散片的处方,并对其进行质量控制.方法 以不同处方配比的崩解剂、黏合剂、填充剂、润滑剂为载药辅料,以分散片的外观、片质量、硬度、崩解时限、分散均匀性作为考察指标,采用均匀设计法及相关分析筛选优处方;用HPLC法对分散片进行质量控制.结果 佳分散片处方为CMS-Na、L-HPC、PVPP为联合崩解剂,MCC为填充剂,5%L-HPC醇溶液为黏合剂,硬脂酸镁、滑石粉和微粉硅胶为润滑剂.分散片含鱼腥草素钠的量为682μg/片,平均回收率为100.73%,RSD为1.22%;槲皮素的量为18.45 μg/片,平均回收率为99.97%,RSD为0.25%.结论 采用上述处方可制备出优质的鱼腥草分散片,满足速释的要求;HPLC法简便、灵敏、准确,重现性好,可用于鱼腥草分散片的质量控制.
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鱼腥草抗炎药理作用机制的研究进展
鱼腥草为传统的清热解毒中药,临床应用多年,被卫生部列为药食两用、极具开发潜力的资源.药理研究表明,鱼腥草在炎症性疾病方面表现出较好的疗效.综述国内外关于鱼腥草抗炎的药理作用机制的研究进展,并分析了今后研究的方向和思路,为研究与开发以鱼腥草为原料的抗炎新药提供参考.
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高效液相色谱法测定芒果止咳片中鱼腥草素钠
芒果止咳片由芒果叶干浸膏、鱼腥草素钠和马来酸氯苯那敏经适当的加工制成,有宣肺化痰、止咳平喘的功效,用于咳嗽、气喘、多痰等.原质量标准中没有定量测定,为了更好地控制芒果止咳片的质量,本实验建立反相高效液相色谱法测定芒果止咳片中鱼腥草素钠,为芒果止咳片质量控制提供科学依据.
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苦参碱、鱼腥草素钠及其与红霉素联用对表皮葡萄球菌生物被膜渗透作用的研究
目的 比较苦参碱、鱼腥草素钠及其与红霉素联用对表皮葡萄球菌生物被膜的渗透性,为中药及中西药联用治疗表皮葡萄球菌引起的相关感染提供依据.方法 在体外建立SE-BF(表皮葡萄球菌生物被膜模型),PB(生物被膜渗透模型);观察并测量含药滤纸片抑菌圈直径(每个时间点取样3个),计算苦参碱、鱼腥草素钠及其与红霉素联用对PB的渗透率.结果 苦参碱、鱼腥草素钠、苦参碱与红霉素及鱼腥草素钠与红霉素联用对Se738的36 h渗透率分别达到93.94％、96.97％、89.34％和93.53％;苦参碱、鱼腥草素钠、苦参碱与红霉素及鱼腥草素钠与红霉素联用对ATCC 35984的36 h渗透率分别达到82.83％、88.55％、91.47％和96.76％.结论 苦参碱、鱼腥草素钠及其与红霉素联用,对表皮葡萄球菌生物被膜均有较强的渗透性.
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电位滴定法测定复方氯丙那林鱼腥草素钠片中鱼腥草素钠的含量
目的建立电位滴定法测定复方氯丙那林鱼腥草素钠片中鱼腥草素钠的含量.方法采用碘量法进行滴定,以电位变化判断滴定终点.结果平均回收率为99.2%(RSD为0.6%);重现性RSD为0.5%(n=6).结论该方法准确、客观,适用于复方氯丙那林鱼腥草素钠片中鱼腥草素钠含量的测量.
关键词： 复方氯丙那林鱼腥草素钠片 鱼腥草素钠 电位滴定法 -
鱼腥草素钠增强妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜作用及抗菌协同作用
目的:研究鱼腥草素钠增强妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜的作用.方法:微量倍比稀释法测定鱼腥草素钠、妥布霉素对铜绿假单胞菌的小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定两者联合抗菌作用,结晶紫染色法测定单药及联合用药对铜绿假单胞菌生物被膜的小抑膜浓度(SMIC),扫描电镜下观察药物对铜绿假单胞菌生物被膜形态的影响,采用倾注平板法进行菌落数计数.结果:鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的MIC为512 μg/mL,妥布霉素对铜绿假单胞菌的MIC为4μg/mL,两药联合后MIC分别为64μg/mL和1μg/mL,分级抑菌浓度指数(FIC)为0.375,提示两药协同作用明显.妥布霉素对铜绿假单胞菌生物被膜SMIC50黏附期为8μg/mI,早期生物被膜阶段为16μg/mL,成熟期生物被膜阶段为32μg/mL,两药联合后铜绿假单胞菌生物被膜SMIC50黏附期为8μg/mL,早期为0.5μg/mL,成熟期为8μg/mL,鱼腥草素钠对妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜有增强作用.结论:鱼腥草素钠与妥布霉素抗菌协同作用明显,鱼腥草素钠对妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜有增强作用.
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利巴韦林鱼腥草素钠粉针剂在大鼠体内的药代动力学
目的以利巴韦林单方为参照品,测定利巴韦林鱼腥草素钠复方粉针剂中主药成分利巴韦林在大鼠体内的药代动力学,并考察粉针剂中另一成分鱼腥草素钠对主药药代动力学的影响.方法采用50%(φ)高氯酸水溶液沉淀蛋白后正庚烷提取,反相高效液相法分别测定了大鼠静脉注射利巴韦林单方药和利巴韦林复方粉针剂后的血药浓度并计算其药代动力学参数.结果利巴韦林复方粉针剂在大鼠体内的隔室模型和药代动力学参数与利巴韦林原料药无显著差别,t1/2β分别为(207.503±38.681)min和(189.354±20.480)min,AUC分别为(1 058.900±253.278)mg·min·L-1和(1 139.512±383.793)mg·min·L-1.结论利巴韦林鱼腥草素钠粉针剂中的另一成分鱼腥草素钠不影响主药利巴韦林的药代动力学.
