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棒曲霉素引起HEK-293细胞DNA损伤的溶酶体途径
目的 研究棒曲霉素(PAT)引起的DNA损伤与细胞内ROS水平以及溶酶体的关系,探讨PAT遗传毒性的机制.方法 以HEK-293细胞作为试验系统,单细胞凝胶电泳试验检测DNA损伤情况,2’,7’-二氢二氯荧光素检测ROS水平,吖啶橙测定溶酶体膜稳定性;采用NAC和NH4C1对溶酶体进行保护干预;采用NAC、NH4Cl、抑胃肽干预PAT所致的DNA损伤.结果 PAT作用细胞1h,不同浓度引起细胞DNA链断裂、溶酶体膜稳定性改变和ROS水平增加;经NH4Cl、NAC预处理,PAT引起的溶酶体膜稳定性均增强了;经NH4Cl、NAC和抑胃肽干预处理,PAT引起的DNA链断裂几乎完全被阻止.结论 棒曲霉素可致HEK-293细胞DNA链断裂,其作用机制可能与溶酶体途径有关,溶酶体可能是棒曲霉素细胞毒性的生物靶点之一,并由ROS引起溶酶体膜稳定性的破坏.
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水飞蓟宾对锰致神经毒性的干预研究
目的 研究不同剂量的水飞蓟宾(silibinin)对锰致入神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞毒性的对抗作用及可能机制.方法 体外培养SH-SYSY细胞,加入不同浓度的水飞蓟宾(5～ 20μmol/L),继续培养24 h,吸出后加入MnCl2(终浓度为0.6 mmol/L),MTT法检测细胞活力,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达和活化情况,DCFH-DA染色检测活性氧(ROS)含量,同时检测水飞蓟宾的体内外抗氧化活性.结果 MTT结果显示(5～20μmol/L)的水飞蓟宾对MnCl2诱导的细胞损伤有显著的拮抗作用.Western blot结果显示水飞蓟宾能剂量依赖性地抑制MnCl2处理诱导的自噬性损伤的发生.与对照组相比,0.6 mmol/L的MnCl2处理组ROS含量明显升高,而水飞蓟宾给药则能显著抑制ROS的产生,同时体内外的抗氧化能力检测显示水飞蓟宾抗具有较强的总抗氧化能力和抗超氧阴离子自由基活力,能显著恢复细胞内GSH和SOD的活力.结论 水飞蓟宾能剂量依赖性地对抗MnCl2诱导的SH-SY5Y细胞损伤,这一作用可能是通过清除细胞内ROS继而抑制自噬性死亡的发生来实现的.
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ACTD处理对旁观者V79细胞ROS和细胞色素C分布的影响
目的 观察放线菌素D(actinomycin D,ACTD)处理V79靶细胞获得的条件培养液(conditioned medium,CM)对V79旁观者细胞ROS水平和细胞色素C(Cytochorome C,Cyt C)分布的影响,以研究ACTD诱导旁观者效应发生的可能机制.方法 4.0 mg/L ACTD处理V79靶细胞1h,磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次,加入新鲜培养液开始计时,分别在4、8、12和24 h获取靶细胞条件培养液CM.用不同时段CM培养正常V79细胞24 h后,流式细胞仪观察旁观者细胞ROS水平；比色法测定胞浆和线粒体细胞色素C含量.结果 CM处理组旁观者细胞ROS水平均高于对照组,随着时段的延后,ROS水平逐渐降低(P＜0.01),24 h又增加(P＜0.01).对照组线粒体内Cyt C含量高,在各CM处理组旁观者细胞线粒体Cyt C含量均有不同程度下降,4hCM组含量低,随着时段延后,线粒体Cyt C含量增加,但没达到对照组水平,24 h又趋下降.胞浆内Cyt C含量变化趋势与之相反,对照组Cyt C含量低,CM处理组胞浆Cyt C含量增加,4h高随后下降,24 h又明显增加.结论 ACTD诱导旁观者效应可能通过靶细胞的CM影响旁观者细胞ROS的产生,并造成细胞色素C从线粒体释放而引起的.
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自噬参与锰诱导的SH-SYSY细胞毒性研究
目的 研究不同剂量的锰(Mn)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞生长增殖的影响以及诱导自噬的情况.方法 体外培养SH-SYSY细胞,以200～1 000 μmol/L MnCl2处理后进行四唑盐比色实验(MTT)观察MnCl2对细胞的抑制作用,MDC染色法检测自噬小泡形成情况,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Bclin-1的表达和活化情况.DCFH-DA染色检测活性氧(ROS)含量.结果 MTT结果 显示200～1 000 μmol/L MnCl2对细胞的生长增殖有显著的抑制作用.Western blot结果 显示MnCl2处理后LC3蛋白表达增加并且活化,Bcelin-1蛋白表达增加,细胞产生自噬小泡.与对照组相比,200、400和800 μmol/L MnCl2组ROS含量明显升高.结论 一定剂量的MnCl2对SH-SHY5Y细胞的生长增殖有明显的抑制作用,这一作用可能是通过破坏胞内氧化还原平衡导致ROS大量产生继而诱发细胞发生自噬性的死亡.
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丙烯腈诱发活性氧生成对大鼠精子质量及超微结构的影响
目的 探讨丙烯腈(ACN)诱导氧化应激对大鼠附睾精子质量与鞭毛超微结构的影响.方法 40只雄性SPF级健康SD大鼠按体重随机分为4组,染毒组以12.5、25和50 mg/kg ACN灌胃,对照组给予等体积玉米油.1次/d,6d/周,连续13周.测精子活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(methane dicarboxylic aldehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、精子线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和精子质量(0.86％生理盐水中游离精子),电子显微镜下观察精子鞭毛超微结构.结果 50 mg/kg组精子MMP较其他组均降低(P＜0.05).50 mg/kg组精子ROS含量较其他组升高(P＜0.05).染毒组SOD活力较对照组降低(P＜0.05).精子鞭毛超微结构显示,25和50 mg/kg ACN组精子鞭毛外部致密纤维和线粒体结构有损伤.精子密度50 mg/kg组为(3.52±0.46)×106/ml,较对照组、12.5和25 mg/kg组[分别为(5.71±0.66)×106/ml、(4.95±1.33)× 106/ml和(5.99±0.78)×106/ml]均降低(P ＜0.05);25和50 mg/kg组精子活率分别为(62.18±3.4)％和(66.25±7.23)％,较对照组(83.22±13.86)％降低(P＜0.05).d级精子率50 mg/kg组为(40.76±1.47)％,25 mg/kg组为(37.77±3.41)％,与对照组(27.77±4.85)％和12.5 mg/kg组(31.77 ±4.85)％比较均升高(P＜0.05).精子平均路径速度对照组高于各ACN组,差异有统计学意义(P＜0.05).直线速度50 mg/kg组较对照组降低(P＜0.05).精子ROS含量与精子MMP呈负相关(r=-0.643,P =0.024),与SOD活力呈负相关(r=-0.713,P=0.009),与精子活力呈负相关(r=-0.629,P=0.028);与精子平均路径速度呈负相关(r=-0.839,P=0.001);与d级精子率呈正相关(r=0.699,P=0.011).结论 ACN可致附睾内精子ROS含量增高,精子鞭毛内线粒体和外部致密纤维超微结构改变,而使精子活动能力和运动速度降低.
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N-乙酰半胱氨酸对氟诱导睾丸支持细胞内质网应激的作用
目的 探讨N-乙酰半胱氨酸对氟化钠(NaF)介导睾丸支持细胞内质网应激的抑制作用.方法 将原代培养大鼠睾丸支持细胞进行分组:0 μg/ml NaF(对照组)、6 μg/ml NaF组、12μg/ml NaF组、24μg/ml NaF组、N-乙酰半胱氨酸(2 mmol/LNAC)组、6μg/ml NaF+2 mmol/L NAC组、12μg/ml NaF+2 mmoL/L NAC组和24 μg/ml NaF+2 mmol/L NAC组,各组以相应药物孵育24 h.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞生长活性;荧光探针法分析各组细胞内活性氧(ROS)水平;免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关蛋白GRP78、PERK和CHOP的表达.结果 2 mmol/L NAC有效提高了细胞存活率(P＜0.01);NAC明显抑制了NaF介导的细胞内ROS水平的升高,与NaF组相比,各NAC组的ROS水平均显著降低(P＜0.01);NaF诱导内质网应激相关蛋白GRP78、PERK和CHOP表达明显上调,经2mmol/L NAC处理后,其有效拮抗了GRP78、PERK和CHOP蛋白表达的上调(P＜0.01).结论 ROS激活了内质网应激相关信号通路,而NAC通过减少ROS的产生,拮抗了NaF介导的睾丸支持细胞内质网应激.
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氧化应激与慢性阻塞性肺疾病研究进展
氧化应激是指机体内高活性分子如活性氧簇(ROS)和活性氮簇(RNS)产生过多或消除减少,从而导致组织损伤.ROS包括超氧阴离子(O2-)、羟自由基(-OH)、过氧化氢(H2O2)等,RNS包括一氧化氮(NO)、二氧化氮(NO2)、过氧亚硝酸基阴离子(ONOO)等.在正常状态下机体可产生少量ROS参与正常代谢,同时体内存在清除自由基、抑制自由基反应的体系,使过多的自由基被清除或使自由基减少,保持自由基的产生和清除平衡.但在某些病理状态下,这一机制遭到破坏,体内自由基显著增加,可直接致机体损伤.
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不同脏腑虚损对慢性阻塞性肺疾病患者病情及线粒体功能的影响
目的:探讨不同脏腑虚损对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者病情及线粒体功能的影响.方法:纳入161例COPD稳定期患者,记录病史按脏腑虚损标准对纳入病例进行中医辨证分型,检测患者肺通气功能,采用COPD评估测试量表(CAT)、呼吸困难量表(m MRC)对患者进行评分、进行6min步行试验(6MWT);采集患者外周血分离有核细胞用流式细胞术进行线粒体膜电位、细胞内活性氧(ROS)检测;采用SPASS21.0对数据进行统计分析.结果:161例COPD患者中辨证为肺气虚者36例,肺脾气虚者31例,肺肾气虚者50例,肺脾肾虚44例,其中104例完成了线粒体实验.COPD患者的病程在肺脾气虚组长,肺气虚组短,4组间差异不具显著性(P=0.503);肺通气功能FVC％在4组间差异不具有显著性(P=0.265);FEV1％在各组间差异具有显著性(P=0.025);CAT在各组间差异具有显著性(P=0.001),6MWD在4组间差异不具显著性(P=0.057),FEV1％、FVC％、6MWT均值在肺脾肾虚组低,CAT均值在肺脾肾虚组高.线粒体膜电位(MTP)在肺脾气虚组与肺气虚组、肺肾气虚组比较差异有显著性(P＜0.05);细胞内活性氧(ROS)在肺脾气虚组与肺气虚组、肺肾气虚组比较差异有显著性(P＜0.01);线粒体膜电位(MTP)在肺脾气虚组明显降低,细胞内活性氧(ROS)在肺脾气虚组明显升高.结论:COPD的防治应重视脏腑虚损在发病中的作用;COPD患者线粒体功能障碍与脾虚有关,推测补脾疗法可能改善线粒体功能障碍.
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利湿活血方对高尿酸血症大鼠血尿酸及抗氧化能力的影响
目的:探讨中药利湿活血方对高尿酸血症模型大鼠血尿酸及其抗氧化能力的影响.方法:将雄性SD大鼠随机分成空白组、模型组、四妙丸组、苯溴马隆组及利湿活血方(7.74 g/kg、3.87 g/kg、1.935 g/kg)组,共7组.除空白组,其余各组以酵母膏、腺嘌呤连续灌胃14 d,制备高尿酸血症模型.验模成功后,各给药组灌胃给予相应药物,空白组和模型组给予等体积蒸馏水,连续14d.末次给药后,测定大鼠血清中血尿酸(UA)、丙二醛(MDA)含量,活性氧簇(ROS)水平及过氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)的活性.结果:1)与空白组比较,模型组动物血清UA含量升高,差异有统计学意义(P ＜0.001);ROS水平升高,差异有统计学意义(P ＜0.001);MDA含量显著升高(P＜0.01);SOD、T-AOC活性明显降低,差异有统计学意义(P＜0.001).2)与模型组比较,四妙丸组、苯溴马隆组及利湿活血方7.74 g/kg、3.87 g/kg组大鼠血清UA含量明显降低,苯溴马隆组、利湿活血方7.74g/kg组差异有统计学意义(P＜0.001、P＜0.01);苯溴马隆组、利湿活血方7.74 g/kg组MDA含量降低,差异有统计学意义(P＜0.05);除四妙丸组外,各给药组SOD活性较模型组均显著升高(P＜0.001);各给药组ROS均降低,苯溴马隆组差异有统计学意义(P＜0.001),利湿活血方7.74 g/kg、3.87 g/kg组差异有统计学意义(P＜0.01);四妙丸组、苯溴马隆组及利湿活血方7.74g/kg、3.87 g/kg组大鼠血清T-AOC活性明显升高,苯溴马隆组差异有统计学意义(P ＜0.001),利湿活血方7.74g/kg组差异有统计学意义(P＜0.01).结论:中药利湿活血方从湿热壅盛、瘀血阻滞的病机出发,以清热利湿、化瘀散结为治法,在降低高尿酸血症大鼠血清尿酸的同时,还能增强高尿酸血症大鼠的抗氧化和清除氧自由基的能力,减少脂质过氧化,达到较好的治疗效果.
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氧化应激与实热"上火"的相关性研究
目的:通过检测观察组血液中过氧化指标(MDA、ROS)和抗氧化指标(GSH、T-AOC、SOD)的变化,探讨氧化应激与实热"上火"的相关性.方法:分别收集临床实热"上火"和正常人群的样本,检测其血浆中MDA、GSH、SOD、T-AOC水平和外周血白细胞中ROS含量,进行比较.结果:与对照组比较,观察组血浆中MDA、GSH、SOD、T-AOC浓度水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05),而白细胞内的ROS含量显著下降,差异有统计学意义(P<0.01).结论:观察组过氧化指标与抗氧化指标均有显著变化,说明实热"上火"与氧化应激密切相关,观察组机体处于过氧化与抗氧化相互交争状态,但氧化与抗氧化水平尚且处于平衡阶段.
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天然产物oblongifolin C诱导ROS和线粒体降解
目的：：探讨藤黄属植物中提取的多环多异戊烯基间苯三酚类天然小分子化合物oblongifolin C( OC)对细胞线粒体功能和细胞凋亡的影响。方法：以野生型和促凋亡基因 bax/bak 双敲除的小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 和人结肠癌细胞HCT116为研究模型,通过流式细胞术,共聚焦显微术和蛋白质免疫印迹法检测OC对ROS,线粒体功能和细胞凋亡的影响。结果：OC能够诱导细胞产生ROS,破坏线粒体结构,降低线粒体膜电位,终造成线粒体降解和细胞内ATP耗竭,使细胞走向凋亡。结论：OC能通过多条途径诱导细胞凋亡,是一种极有抗癌潜力的天然化合物。
关键词： 藤黄 Oblongifolin C ROS 线粒体 凋亡 -
强精煎对奥硝唑所致少弱精子症大鼠抗氧化作用实验研究
目的:观察强精煎对奥硝唑(ORN)诱导的少弱精子症大鼠附睾精子氧化应激的保护作用.方法:60只大鼠按随机数字表法分为4组,模型组给予ORN,黄精赞育胶囊组给予ORN+黄精赞育胶囊,强精煎组给予ORN+强精煎,空白组给予生理盐水.测定大鼠附睾精子的浓度、活动率、附睾丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)活力以及睾丸附睾超微病理.结果:与空白组比较,模型组精子浓度及活动率、附睾SOD、GSH-Px活力明显降低,MDA浓度及NOS活力显著升高;与模型组比较,强精煎组及黄精赞育胶囊组精子浓度及活动率、SOD及GSH-Px活力升高,MDA、NOS活力降低.模型组生精上皮破损显著、紊乱,精子产量锐减,强精煎组及黄精赞育胶囊组生精上皮受损轻、生精产量接近空白组.结论:强精煎可增强抗氧化酶活性,抑制氧化应激对生精功能和精子活力的不良影响.
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人参三七川芎提取物延缓内皮细胞复制性衰老的机制研究
目的:探讨人参三七川芎提取物对内皮细胞复制性衰老(humanumbilical vein endothelial cells,HUVECs)的影响.方法:体外培养的HUVEC-2C传代至第8代,造成内皮细胞复制性衰老模型.细胞分为4组,8代衰老模型组、维生素E(Vit E)组(50 mg·L~(-1))、中药高、低(50,20 mg·L~(-1))剂量组,采用衰老相关卢β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法观察细胞衰老改变,流式细胞仪分析细胞周期,激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧(ROS)含量,硝酸还原酶法检测培养液一氧化氮(NO)和抗超氧阴离子水平,Western-blot法检测各组细胞AngII1型和2型受体(AT_1R和AT_2R),NAD(P)H氧化酶p47phox的蛋白表达.结果:8代衰老模型组β-gal染色阳性细胞数明显增多,细胞停滞在G_0/G_1期,激光共聚焦显微镜下ROS荧光强度明显增强,培养液中抗超氧阴离子、NO含量减少,p47phox,AT_1R,AT_2R蛋白表达上调.给予高、低剂量中药处理后,可明显改善细胞的衰老状态,β-gal染色阳性细胞数减少,G_0/G_1期细胞减少,G_2/M期细胞增加,ROS荧光强度减弱,抗超氧阴离子、NO含量较8代衰老模型组增加,p47phox,AT_1R,AT_2R蛋白表达下调,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论:人参三七川芎提取物能够延缓内皮细胞复制性衰老,通过活性氧途径下调NADPH氧化酶p47phox的表达,终使ROS产生减少;同时,中药提取物还能降低衰老内皮细胞AT_1R,AT_2R的表达,改善内皮功能,这可能是益气活血中药延缓内皮细胞衰老的主要原因之一.
关键词： 人参三七川芎提取物 NAD(P)H氧化酶 细胞复制性衰老 ROS -
葛根素通过调控活性氧对缺氧诱导的PASMCs增殖的影响
探讨葛根素(puerarin,Pue)对缺氧所引起的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响,并探讨其机制是否通过调控活性氧来实现的.原代培养大鼠PASMCs,选用2～5代用于实验.利用体外噻唑蓝比色法(MTT)、蛋白免疫印记法、流式细胞、DCFH-DA荧光观察Pue对PASMCs增殖能力的影响.利用蛋白免疫印记法检测ROS是否参与Pue抑制PASMCs增殖的过程.实验分组为:常氧组、缺氧组、缺氧+ Pue组、缺氧+Pue+ Rotenone组、缺氧+Rotenone组.其中Rotenone为ROS阻断剂.结果显示,Pue对常氧条件下的PASMCs增殖无影响,可抑制缺氧引起的PASMCs增殖.在常氧和缺氧状态下Pue对PASMCs的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达均无影响;可以使缺氧导致的细胞周期蛋白(Cyclin A)、细胞增殖核抗原(PCNA)表达下调;DCFH-DA探针证明Pue能逆转缺氧引起的ROS含量升高.Rotenone与Pue均可抑制因缺氧诱导的HIF-1α,Cyclin A,PCNA表达上调且存在协同作用.这些结果说明,Pue可抑制缺氧引起的PASMCs增殖,这一作用可能是通过调控ROS来完成的.
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丹酚酸B对谷氨酸诱导的PC12细胞兴奋毒保护作用的研究
目的:研究丹酚酸B对谷氨酸诱导PC12细胞兴奋毒的保护及作用机制.方法:以谷氨酸损伤PC12细胞24 h为模型,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率；LDH法检测乳酸脱氢酶的漏出率；AO/EB双染法荧光显微镜和PI单染流式细胞术检测细胞凋亡；流式细胞术检测细胞内活性氧的含量；Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果:丹酚酸B可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞的损伤,阻止细胞LDH的释放,在50～200 μmol·L-1剂量呈一定的量效关系；同时,丹酚酸B明显降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,抑制谷氨酸引起的ROS的累积,降低PC12细胞的凋亡率,在50 ～ 200 μmol·L-剂量呈量效相关性.结论:在一定剂量范围内,丹酚酸B对谷氨酸损伤的PC12细胞有保护作用,其保护的机制可能与丹酚酸B减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的凋亡相关.
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姜辣素拮抗半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞所致炎症因子TNF-α释放增加、ROS过量生成及RIP3表达增高
为探索姜辣素拮抗半夏凝集素蛋白致炎作用,该研究采用ELISA法测定生姜不同提取部位对半夏凝集素蛋白所致巨噬细胞释放炎症因子TNF-α的影响;采用荧光探针测定姜辣素对半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞氧自由基ROS水平变化的影响;采用Western blot法研究姜辣素对半夏凝集素蛋白致巨噬细胞中细胞受体相互作用蛋白RIP3的表达水平增高的影响;扫描电镜研究姜辣素对半夏凝集素蛋白致巨噬细胞形态变化的影响.结果显示姜辣素可显著抑制半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞所导致炎症因子释放增加、ROS过量生成及RIP3的表达增高,扫描电镜显示姜辣素可抑制半夏凝集素蛋白导致的细胞变形坏死.生姜解半夏毒的机制可能与姜辣素抑制半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞导致的炎症因子释放、ROS的过量生成、RIP3的表达增高及巨噬细胞坏死相关,机体表现为抑制炎症的发生发展.
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伴侣自吞噬在MPP+损伤的SH-SY5Y细胞中的影响及葛根素的干预作用
目的:研究葛根素通过分子伴侣自吞噬途径保护MPP+损伤的SH-SY5Y细胞.方法:以1 mmol·L-1 MPP+损伤SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型.采用CCK-8染色检测不同浓度的葛根素对MPP+损伤的SH-SY5Y细胞存活率的影响;透射电镜、AO染色观察自噬体的形成及检测溶酶体活性的变化;RT-PCR检测Lamp2a,Hsc70 mRNA表达的变化,Western blotting法检测细胞内Lamp2a,Hsc70,α-synuclein蛋白的表达.结果:在12.5 ～ 50.0 μmol·L-1,预先30 min加入葛根素可以保护SH-SY5Y细胞抵抗MPP+诱导的损伤,并呈一定的量效关系;AO染色和电子显微镜检测25.0,50.0μmol·L-1葛根素作用于1 mmol · L-1MPP+损伤的SH-SY5Y细胞,细胞内出现自噬体,并且随着葛根素剂量的增加,胞质中形成的自噬体增多;流式细胞术检测结果显示50.0 μmol·L-1葛根素可以拮抗1 mmol·L-1 MPP+诱导的SH-SY5Y细胞内ROS水平的增加,阻止氧化损伤的发生;RT-PCR和Western blotting结果表明在12.5～50.0 μmol·L-1葛根素通过上调细胞内Hsc70,Lamp2a mRNA和蛋白水平保护MPP+造成的SH-SY5Y细胞损伤并抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞α-synuclein蛋白的积聚.结论:葛根素可以拮抗MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其保护机制可能与干预分子伴侣自吞噬途径有关.
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黄芪甲苷对肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制
目的:研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASⅣ)对H2O2诱导肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)氧化应激损伤的保护作用,并进一步探讨其分子机制.方法:将培养的肾小球系膜细胞随机分为5组:正常对照组、H2O2模型组、AS Ⅳ(12.5,100 nmol·L-1)组、阳性药(Tempol,1×105nmol·L-1)组.采用MTT法观察细胞活力；Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;DHE染色检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生；流式细胞术检测细胞周期变化情况；Western blot方法测定细胞周期蛋白Cyclin D1,Cyclin A及磷酸化p38,T-p38的表达.结果:1×105,2×105,3×105,4×105nmol·L-1H2O2均能诱导肾小球系膜细胞发牛氧化应激损伤:细胞存活率明显降低,细胞活力与H2O2浓度及其作用的时间呈正相关下降趋势.100 nmol·L-1黄芪甲苷能够显著减轻H2O2(3×l05nmol·L-1)诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤:提高细胞存活率及细胞活力,抑制细胞凋亡,降低胞内ROS产量；恢复细胞周期蛋白Cyclin D1表达及各细胞周期的百分比,恢复细胞的正常增殖；降低磷酸化p38的表达.结论:黄芪甲苷对H2O2诱导肾小球系膜细胞氧化应激损伤有一定的保护作用.其机制可能与抑制p38/MAPK信号通路,影响细胞周期蛋白Cyclin D1的表达及降低H2O2诱导的细胞内ROS氧化应激损伤有关.
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丹参素对非小细胞肺癌A549细胞内氧化还原状态及相关核转录因子的影响
目的:探讨丹参素(DSS)抗肿瘤作用的分子机制,重点在于是否与其抗氧化作用及改变非小细胞肺癌A549细胞内氧化还原状态及影响相关核转录因子和信号通路有关.方法:通过体外DPPH自由基清除、高铁还原、亚铁螯合实验和DCFH-DA荧光探针标记ROS,检测DSS的抗氧化活性及对A549细胞内ROS水平的影响;采用MTT法测定DSS对A549细胞增殖能力的时效与量效关系;采用Western blot技术检测DSS对A549细胞内缺氧诱导因子HIF-1α及氧化还原调节转录因子Nrf2蛋白表达的影响,以及上游Akt,ERK1/2 MAPK信号磷酸化水平的影响.结果:DSS能够剂量依赖性降低A549细胞内ROS水平,与其较强的自由基清除和抗氧化活性有关;DSS能以时间和剂量依赖性的方式抑制A549细胞生长,进一步机制研究发现,DSS能降低Nrf2表达,与抑制Akt以及ERK1/2的磷酸化水平有关,但对HIF-1α的表达没有影响.结论:DSS具有治疗非小细胞肺癌的作用,机制在于通过清除ROS进而抑制Akt,ERK1/2的磷酸化而下调Nrf2的表达并终抑制A549细胞的生长.
关键词： 丹参素 非小细胞肺癌A549细胞株 ROS Nrf2 HIF-1α -
黄芩体内H2O2清除系统和黄酮类活性成分积累的相关性研究
目的:研究黄芩H2O2清除系统和黄酮类活性成分积累的相关性.方法:采用HPLC方法检测黄芩悬浮细胞中黄芩苷、黄芩素的含量,采用紫外分光光度法测定总黄酮、H2O2含量和POD,PAL酶活性.结果:40℃、黑暗、PEG胁迫组总黄酮含量和PAL酶活性在12 d显著提高.NPA,NPA+40℃,40℃,NPA+黑暗,黑暗,PEG胁迫12 d前后黄芩苷呈下降趋势,黄芩素呈上升趋势,POD酶活性呈升高趋势,H2O2含量保持稳定.结论:适度的环境胁迫促进黄芩总黄酮的积累,黄芩苷在POD酶的作用下转化为黄芩素,同时维持H2O2水平的稳定以避免氧化伤害.
