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Nec-1对铝致神经细胞凋亡和自噬的作用
目的 观察和探讨在铝致神经细胞死亡中,坏死抑制剂1(Nec-1)对凋亡和自噬的作用.方法 用体外原代培养小鼠神经细胞的方法,制造铝损伤神经细胞模型,然后用细胞活力检测、荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白印迹(Western-Blot)以及流式细胞术等方法从多角度对Nec-1的作用进行研究.结果 ①流式结果显示,在Al3+(2 mmol/L)作用于神经细胞后,随着Nec-1剂量的增加,细胞的凋亡率呈下降趋势,且差异有统计学意义(P<0.05);②qRT-PCR结果显示,以Al3+(2 mmol/L)为对照,Nec-1(60和90 μmol/L)可使神经细胞的凋亡和自噬相关基因的表达呈显著性下降(P<0.05);③Western-Blot结果显示,同Al3+(2 mmol/L)组比,Nec-1(60和90 μmol/L)组凋亡相关蛋白caspase-3的表达下降(P<0.01),Nec-1(30和60 μmol/L)可使自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达下降(P<0.05).结论 在本试验条件下,Nec-1可减少铝导致的神经细胞凋亡和自噬,起到保护神经细胞的作用.
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自吞噬在神经细胞缺血性损伤中的作用及其与凋亡和坏死的关系
缺血性脑卒中是导致残疾和死亡主要原因之一.自吞噬现象广泛存在于缺血性脑损伤中,但自吞噬在缺血性脑损伤中的作用仍不明确.自吞噬是一把双刃剑,其保护抑或损伤细胞主要取决于自吞噬活性的强度,一般情况下,适度的自吞噬作用可有效清除细胞内过多的代谢产物,衰老的细胞器等;而过度自吞噬却容易导致细胞正常功能的细胞器及物质被溶酶体降解而出现自吞噬样细胞死亡.因此本文主要针对以下两点进行论述:1.自吞噬在缺血性脑损伤中发挥怎样的作用,是保护还是损伤？2.自吞噬与凋亡和坏死之间存在着怎样的关系?
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自噬与肿瘤的发生和治疗研究进展
自噬 (autophagy) 是细胞对内外界环境压力变化的一种反应,是细胞在饥饿、能量缺乏等代谢压力下的一种生理过程,细胞内的蛋白、细胞器和胞质通过自体吞噬作用被包裹、消化,降解成核苷、氨基酸和脂肪酸循环利用,合成新的大分子和ATP,从而维持细胞的正常代谢和生存[1].同时,在某些情况下它可以选择性地清除某些细胞成分,如受损或多余的过氧化物酶体、内质网、线粒体、DNA,减少异常蛋白、细胞器的堆积,维持细胞自我稳态[2].在某些情况下自体吞噬还可导致细胞死亡,被认为是区别于细胞凋亡(I型程序性死亡)的另一种细胞程序性死亡形式(Ⅱ型程序性死).自体吞噬现象早是于1962年在电子显微镜下被观察到的[3].近年来由于分子生物学、基因组学等实验手段的日臻完善,尤其是酵母自体吞噬突变株的产生,使得自体吞噬分子基础的研究有了很大的进展.
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Nec-1对铝作用下神经细胞活力及凋亡、自吞噬基因的影响
[目的]研究坏死性抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)对铝(Al)作用下的神经细胞活力及凋亡、自吞噬基因的影响.[方法]体外原代培养小鼠神经细胞,通过2mmol/L Al3+作用于神经细胞制造铝损伤模型,加入不同剂量的Nec-1,用细胞活力检测(CCK-8)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法观察Nec-1对染铝神经细胞的作用.[结果]细胞活力检测:以2mmol/L Al3+染毒组作为对照,30μmol/L Nec-1组的细胞活力与对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05),60、90μmol/L Nec-1组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).RT-PCR结果:2mmol/L Al3+染毒组caspase-3基因的表达为0.98±0.120,而Nec-1 60μmol/L组和Nec-1 90μmol/L组caspase-3的表达分别为0.50±0.077和0.44±0.050,同对照组相比,两组caspase-3的表达均下降(P<0.01).2mmol/L Al3+染毒组的LC3-Ⅱ基因的表达为1.82±0.047,而60μmol/L Nec-1组和90μmol/L Nec-1组的LC3-Ⅱ表达分别为1.00±0.022和0.97±0.035,同对照组相比,两组LC3-Ⅱ的表达均呈下降(P<0.01).[结论]Nec-1可使铝作用下的神经细胞活力上升,并使神经细胞的自吞噬和凋亡基因表达下降.
关键词： 铝 Necrostatin-1(Nec-1) 细胞培养 凋亡 自吞噬 -
丙戊酸钠诱导人结肠癌细胞HT-29自噬及其机制研究
目的 对丙戊酸钠诱导人结肠癌细胞HT-29发生自噬性死亡的过程进行观察,并初步探讨其可能的机制.方法 用不同浓度、不同作用时间的丙戊酸钠处理人结肠癌细胞系HT-29,用细胞计数试剂盒CCK8法观察其对细胞增殖的抑制作用,丹酰戊二胺染色法观察细胞自噬,荧光测试仪检测自噬水平,荧光定量PCR法检测以下基因表达水平的变化:微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关基因Beclin-1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K).结果 随着丙戊酸钠处理浓度的递增及作用时间的延长,其对人结肠癌细胞HT-29的增殖抑制率逐渐提高,呈剂量依赖性及时间依赖性(P均＜ 0.01);同时,随着药物浓度的增加,细胞中自噬泡数量增多,荧光强度增强,与对照组比较,差异有统计学意义(P均＜0.05).经丙戊酸钠处理后,自2 mmol/L浓度始,人结肠癌细胞系HT-29自噬相关基因LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平明显升高(P均＜0.01),而mTOR、p-Akt和p-p70S6K表达水平明显降低(P均＜0.01).结论 丙戊酸钠可诱导结肠癌细胞发生自噬,其诱导结肠癌细胞发生自噬的机制可能与阻断mTOR-Akt信号转导通路及激活Beclin-1信号转导通路有关.
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微管相关蛋白LC3和组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌中的表达及意义
目的:探讨微管相关蛋白LC3、组织蛋白酶D 在子宫内膜样腺癌组织中的表达及与临床病理参数之间的关系.方法:用免疫组织化学法检测12例正常增生期子宫内膜、12例子宫内膜增殖症以及51例子宫内膜样腺癌组织中LC3和组织蛋白酶D的表达并分析.结果:LC3在子宫内膜样腺癌组织的表达强度显著低于正常增生期内膜和子宫内膜增殖症(P＜ 0.001,P＜ 0.001).LC3在子宫内膜样腺癌中的表达强度与组织学分级以及手术病理分期呈明显的负相关(r =-0.390,P＜ 0.001;r =-0.312,P＜ 0.05).组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌组织中的表达显著低于正常增生期内膜(P＜ 0.05).结论:自噬活性相关的LC3、组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌中的表达下降,自噬活性的改变可能参与了子宫内膜样腺癌的发生和演进过程.
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Beclin-1在肺腺癌发生发展中的作用及其对预后的影响
目的：研究自噬特异性标志物 Beclin-1在肺腺癌发生、发展中的变化及其对术后患者预后的影响。方法采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及 Western blot 法分别检测108例正常肺组织、肺不典型腺瘤样增生（AAH）、肺原位腺癌、肺微浸润性腺癌及浸润性腺癌组织标本中自噬特异性标志物 Beclin-1在基因及蛋白水平的表达，比较 Beclin-1在不同组织中及不同病理分期肺腺癌患者肿瘤组织中的变化，分析其对肺腺癌患者术后预后的影响。结果肺腺癌 Beclin-1基因及蛋白水平的表达均显著低于正常肺组织（P <0.05），浸润性肺腺癌组织表达低；早期肺腺癌（Ⅰ~Ⅱ期）患者肿瘤组织 Beclin-1的表达高于中晚期肺腺癌（Ⅲ~Ⅳ期）患者（P <0.05）。肺腺癌伴淋巴结转移者肿瘤组织 Beclin-1的表达低于淋巴结阴性患者（P <0.05）。肺腺癌肿瘤组织Beclin-1阳性表达患者术后生存时间显著高于 Beclin-1阴性表达者（P <0.05）。结论 Beclin-1的表达与肺腺癌的发生、发展相关；肺腺癌 Beclin-1的表达缺失预示肺腺癌患者术后生存率较差。Beclin-1可能成为预测肺腺癌患者术后预后的重要标志物。
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MAP1LC3B表达促进结直肠癌侵袭转移的体外研究
目的 探讨MAP1LC3B在结直肠癌(CRC)中的表达与侵袭转移及自噬的作用机制.方法 采用免疫组织化学方法检测92例结直肠癌组织中MAP1LC3B的表达情况,结合临床病理及随访资料进行分析.体外构建慢病毒pLKO.1-MAP1LC3B-siRNA干扰质粒,转染HCT-116细胞株,对照组转染空质粒;采用MTT和侵袭小室实验检测细胞增殖侵袭能力.免疫荧光观察细胞形态.定量RT-PCR和Western blot方法检测MAP1 LC3B、mTOR、ATG5和HIF-1α蛋白表达水平.结果 MAP1LC3B高表达存在于82.6％ (76/92)癌组织,高于癌旁组织中的阳性率11.95％(11/92),差异有统计学意义(P＜0.05); MAP1LC3B蛋白高表达与肝转移、TNM分期和不良预后具有显著相关性(P＜0.05);抑制MAP1LC3B表达降低HCT-116细胞侵袭能力;并促进细胞发生自吞噬;下调mTOR、ATG5和HIF-1α蛋白表达水平,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MAP1LC3B是CRC新的预后指标;MAP1LC3B调控mTOR、ATG5和HIF-1α表达介导自吞噬的作用分子机制在CRC侵袭转移中起重要作用.
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MHC Ⅱ类分子胞内转运过程研究进展
MHCⅡ类分子在抗原提呈细胞内的转运过程可分为3个环节:1)新合成MHCⅡ类分子转运到内吞系统；2)存储在内吞系统中完成抗原提呈；3)从内吞系统转运到细胞表面活化CD4+T细胞.近年来研究显示此转运过程涉及自吞噬、泛素化等多种机制,而转运环节的改变将影响MHC Ⅱ类分子发挥其功能,导致免疫发育和免疫防御功能障碍,故本文将此领域研究进展进行综述.
