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Beclin-1、Bcl-2、Bax在子宫内膜样腺癌中的表达及意义
目的：探讨Beclin-1、Bcl-2、Bax在子宫内膜样腺癌中的表达及意义。方法：运用免疫组化S-P法检测80例子宫内膜样腺癌及40例正常子宫内膜组织制作成的组织芯片中Beclin-1、Bcl-2、Bax 3种基因蛋白的表达，并分析三者间的相关性，以及与临床病理特征之间的关系。结果：①Bax、Bcl-2在子宫内膜样腺癌中高表达，而Beclin-1在子宫内膜样腺癌中低表达，提示三者可能均参与了子宫内膜样腺癌的发生发展。②Beclin-1与Bcl-2、Beclin-1与Bax表达呈负相关，提示Bax、Bcl-2可能通过抑制Beclin-1的表达，共同促进子宫内膜样腺癌的发生发展。③Beclin-1与Bcl-2的表达与子宫内膜样腺癌的某些临床病理特征之间存在一定相关性。Beclin-1阳性表达与肿瘤分化程度及TNM分期密切相关，可望作为预后评估的参考指标。结论：Beclin-1、Bcl-2、Bax在子宫内膜样腺癌中有着不同的表达水平并具有重要的临床意义。
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慢性束缚应激抑郁症大鼠海马Belin-1、LC3的表达变化及逍遥散的调节作用
目的:观察慢性束缚应激抑郁症大鼠模型中海马自噬标志蛋白Belin-1及LC3的表达变化情况,探讨逍遥散对其的调节作用.方法:20只Wistar大鼠随机分为4组(n=5):正常组、模型组、逍遥散组、氟西汀组.采用21 d慢性束缚应激方法建立抑郁症大鼠模型,利用免疫组织化学方法检测大鼠海马CA3区Belin-1、LC3表达情况.结果:Belin-1、LC3在各组中较正常组均有较明显的表达(P<0.05).与模型组相比,逍遥散能明显下调Belin-1、LC3的表达(P<0.05).结论:慢性束缚应激抑郁症大鼠海马自噬相关蛋白Belin-1、LC3表达有变化,提示自噬可能是抑郁症发病机制之一,且逍遥散治疗抑郁症的机制可能与调节自噬标志蛋白Belin-1、LC3有关.
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津力达颗粒联合通心络胶囊对2型糖尿病大鼠胰腺组织自噬的影响
目的:观察中药复方津力达颗粒联合通心络胶囊对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠胰岛β细胞超微结构损伤情况、胰岛β细胞功能及胰腺组织自噬相关蛋白Beclin-1,Atg7,p62表达的影响.方法:采用高脂喂养结合小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ) 30 mg· kg-1ip建立T2DM大鼠模型,15只雄性SD大鼠设为正常组正常饲料喂养,75只雄性SD大鼠高脂饲料喂养6周后STZ腹腔注射,根据血糖随机分为:模型组,津力达组(JLD),通心络胶囊组(TXL),联合用药组(JT),吡格列酮组(PLZ),JLD组于模型成功后给予津力达颗粒(3.0 g·kg-1·d-1),TXL组于模型成功后给予通心络胶囊(0.4 g·kg-1·d-1),JT组于模型成功后给予津力达颗粒(3.0 g·kg-1·d-1)加通心络胶囊(0.4 g·kg-1·d-1),PLZ组于模型成功后给予吡格列酮(10 mg·kg-1·d-1),连续ig6周后,检测空腹血糖及血清胰岛素以计算胰岛β细胞功能指数,电镜观察各组大鼠胰岛β细胞超微结构;Western blot方法检测胰腺组织Beclin-1,Atg7,p62蛋白的表达变化.结果:与正常组相比较,模型组大鼠胰岛β细胞损伤减轻,胰岛β细胞功能指数明显降低,胰腺组织Beclin-1,Atg7蛋白表达明显减少,p62蛋白表达明显增加(P＜0.01);与模型组比较,各给药组大鼠胰岛功能指数升高,Beclin-1,Atg7表达升高,p62蛋白表达减少(P＜0.01),与JLD,TXL组比较,JT组Beclin-1,Atg7表达升高,p62蛋白表达减少(P＜0.05).结论:津力达颗粒联合通心络胶囊可以提高胰岛β细胞功能指数,其作用可能与促进胰岛自噬有关,而维持胰腺组织自噬水平可能是延缓糖尿病进展的有效措施.
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不同时间电针预处理抗MIRI的效应差异及其与自噬的相关性
目的:观察不同时间电针预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)保护的效应差异及其心肌组织中ULK1和Beclin-1蛋白表达变化,探究该差异与自噬的相关性.方法:将63只雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、预处理电针1d组(EA-1d组)、预处理电针2d组(EA-2d组)、预处理电针3d组(EA-3d组)、预处理电针4d组(EA-4d组)、预处理电针5d组(EA-5d组),每组9只.各干预组分别于MIRI手术前1～5 d干预,选择大鼠双侧“内关”穴进行电针(2 Hz/100 Hz,2mA)干预20 min.S组在冠状动脉左前降支(LAD)下穿线但不结扎,其余组心脏LAD结扎30 min,再灌注4h,建立心肌缺血再灌注模型,期间进行心电图监测.再灌注4h后,Evans blue-TTC双染法测定心肌梗死面积;ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白I (cTnI)的浓度;Western blot法检测心肌组织中ULK1和Beclin-1蛋白的表达.结果:与S组相比,M组血清中cTn I含量升高,ULK1和Beclin-1蛋白的表达量明显升高(均P＜ 0.05);与M组相比,EA-1d组、EA-2d组、EA-3d组、EA-4d组和EA-5d组心肌梗死面积值均减小(均P＜ 0.05),EA-3d组、EA-4d组和EA-5d组心肌风险面积值明显减少(均P＜ 0.05),EA-4d组和EA-5d组血清中cTn I含量降低(均P＜ 0.05),EA-1d组、EA-2d组、EA-3d组、EA-.4d组、EA-5d组ULK1蛋白表达量明显降低(均P＜ 0.05),EA-2d组、EA-3d组、EA-4d组、EA-5d组Beclin-1蛋白表达量明显降低(均P＜ 0.05);与EA-1d组相比,EA-4d组和EA-5d组心肌梗死面积值减少(均P＜ 0.05),EA-4d组cTn I含量减少(P＜ 0.05).结论:电针预处理1～5d均能降低MIRI的梗死面积,其中以4d和5d为佳;该心肌保护效应与降低自噬相关,但相应的效应差异与ULK1和Beclin-1蛋白表达非依赖性.
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miR-144在SKOV-3细胞中的表达及对Beclin-1的调控作用
目的 检测雷帕霉素诱导细胞后4种miRNAs的表达情况,并进一步研究miR-144与Beclin-1基因的靶向调控作用.方法 对SKOV-3细胞分别进行雷帕霉素(50 μg/L,反应2h)及3-甲基腺嘌呤(10 nmol/L、反应12 h)处理,RT-qPCR检测各组细胞miR-17、miR-20a、miR-144及miR-155的表达;Western blot检测雷帕霉素组Beclin-1蛋白的表达;双荧光素酶报告系统、Westem blot及RT-qPCR,验证miR-144与Beclin-1之间的靶向调控关系.结果 与正常对照组相比,雷帕霉素组SKOV-3细胞的miR-17、miR-144及miR-155的表达水平显著上调(P＜0.05);3-MA组SKOV-3细胞的miR-17、miR-20a及miR-144的表达水平显著下调(P＜0.05);雷帕霉素组Beclin-l的蛋白表达明显低于正常细胞组(P＜0.05).miR-144可靶向作用Beclin-1的3'非翻译区(3'UTR),且抑制其表达;miR-144能明显抑制Beclin-1蛋白及mRNA的表达.结论 miR-144可靶向抑制Beclin-1基因的表达,并参与调控SKOV-3细胞自噬的过程.
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心肌细胞自噬对心力衰竭大鼠心功能的影响
目的 观察心力衰竭时自噬相关蛋白的表达以及抑制自噬对心力衰竭的影响,探讨自噬在心力衰竭发病过程中的作用.方法 实验分为对照组(control)、心力衰竭组(HF)和3甲基腺嘌呤(3MA)组.心力衰竭组采用腹主动脉缩窄术制备大鼠心力衰竭动物模型.3MA组给予心力衰竭大鼠自噬特异性抑制剂3MA 15 mg/kg,连续两周.采用心导管术检测大鼠左室舒张末压(LVEDP)、左室等容收缩期压力上升大速率+dp/dtmax、左室等容舒张期压力下降的大速率-dp/dtmax.用Western blot法检测心肌组织自噬相关蛋白beclin-1、cathepsin D的表达.结果 1)心力衰竭组LVEDP较对照组显著增加(P＜0.05),±dp/dtmax较对照组显著降低(P＜0.05).使用3MA组LVEDP较心力衰竭组显著降低(P＜0.01),±dp/dtmax较心力衰竭组显著增加(P＜0.01,P＜0.05).2)心力衰竭组心肌组织自噬相关蛋白beclin-1和cathepsin D表达较对照组显著增加(P＜0.05),而3MA组beclin-1、cathepsin D 的表达较心力衰竭组显著减少(P＜0.05).结论 心肌细胞自噬在心力衰竭发病过程中发挥着致病作用.
关键词： 自噬 心力衰竭 3甲基腺嘌呤 Beclin-1 cathepsin D -
微管相关蛋白1轻链3及 Beclin-1在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达
目的：观察自噬相关蛋白---微管相关蛋白1轻链3（ LC-3）、Beclin-1在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达，从细胞自噬角度探讨硅沉着病形成的分子机制。方法50只成年雄性SD大鼠随机分为2组（ n＝25）：对照组和硅沉着病模型组，每组再分5个时相组。采用非暴露气管灌注二氧化硅（ SiO2）粉尘混悬液法（50g／L）建立大鼠硅沉着病模型。分别于造模后1、3、7、14及28 d分批处死5只大鼠，进行原位支气管肺泡灌洗，获取肺泡巨噬细胞，进行培养纯化和富集后用于后续研究。 HE染色及透射电子显微镜观察肺泡巨噬细胞形态学改变；免疫细胞化学法检测LC-3、Beclin-1的表达及分布；免疫印迹法检测LC-3、Beclin-1的蛋白表达量。结果与对照组相比模型组肺泡巨噬细胞体积较大，胞质丰富，部分细胞内可见硅沉着吞噬颗粒，电镜下可见自噬体形成；模型组LC-3、Beclin-1在各时间点的表达较对照组均增多（P＜0．05），1 d即开始增多，随着时间的延长表达逐渐增多，至14 d时达高峰（P＜0．05），28d时回落，但仍高于对照组的表达。结论在硅沉着病大鼠肺泡巨噬细胞中有自噬的激活，肺泡巨噬细胞自噬参与了大鼠硅沉着病的病理进程。
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自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1在大鼠硅沉着病发生中的表达及意义
目的 观察自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1在大鼠硅沉着病模型中的表达及意义,并探讨其机制；从细胞自噬角度研究硅沉着病形成的分子机制.方法 将90只健康SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组30只.采用非暴露式气管插管一次性灌注二氧化硅粉尘混悬液法建立大鼠硅沉着病模型,并给予3-MA干预,各组分别于造模后第1、3、7、14及28天分批处死6只大鼠.留取肺组织,HE和Masson染色观察肺组织形态变化；免疫组织化学染色检测LC-3、Beclin-1的表达及分布；免疫印迹法检测LC-3、Beclin-1的蛋白表达量.结果 与对照组相比,模型组有显著的肺泡炎改变、明显的矽结节形成及大量胶原沉积.LC-3、Beclin-1在各时间点的表达均上调(P＜0.05),并随时间呈现动态变化趋势,SiO2注入后1d表达有升高趋势,14d达高峰(P＜0.05),28 d回落,但仍高于基础表达.与模型组相比,3-MA组肺泡炎减轻,矽结节减小,胶原沉积减少,LC-3、Beclin-1在各时间点的表达均下调(P＜0.05),各时间点的变化趋势无显著性改变.结论 细胞自噬参与大鼠硅沉着病的病理进程,并在硅沉着病的发生与发展过程中起重要作用.
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细胞自噬在宫颈癌中的相关研究进展
细胞自噬指细胞利用溶酶体降解细胞质中错误折叠的蛋白质及受损细胞器等,重新利用降解物质及胞内有害物质的过程,以维持细胞内环境稳定.正常状态下细胞的自噬维持在低水平,当细胞处在不利因素条件下,自噬也会被激活应对不利因素.自噬在肿瘤发生、发展、转移、复发、药物抵抗等方面有着重要作用,但自噬在这些方面的详细机制仍不清楚.我们在文中对宫颈癌细胞中自噬相关基因的表达情况进行了阐述,自噬治疗在宫颈癌中具有重要的应用前景.
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三氧化二砷上调Beclin-1诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226自噬的实验研究
目的:研究三氧化二砷诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226自噬及其机制.方法:不同浓度As2O3作用RP-MI8226细胞不同时间后,用MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测不同浓度As2O3诱导RPMI8226细胞的自噬率;透射电子显微镜观察As2O3作用后RPMI8226细胞超微结构的变化;RT-PCR和Western blot检测不同浓度As2O3作用后Beclin-1 mRNA及蛋白表达的变化.结果:不同浓度的As2O3对RPMI8226细胞均有增殖抑制作用(P＜0.05),且在一定浓度和时间范围内,其抑制作用呈时间-剂量依赖性增强;随着药物浓度增加和作用时间的延长,MDC阳性细胞率(即自噬率)逐渐增加,各时间段各浓度组与其对应的对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);As2O3作用RPMI8226细胞48 h后,在电子显微镜下可见典型的自噬体;RT-PCR和Western blot检测结果均显示,在1.0、2.0、5.0 μmol/L As2O3作用RPMI8226细胞48 h后,Beclin-1表达上调(P＜0.05).结论:As2O3可诱导RPMI8226细胞自噬,其机制可能与As2O3使Beclin-1表达上调有关.
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40例MDS患者骨髓单个核细胞内自噬相关基因BECLIN-1表达水平和自噬泡数量检测及其意义
目的:本研究旨在检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)内自噬相关基因BECLIN-1的表达水平和自噬泡数量,探讨MDS在不同阶段其骨髓单个核细胞内BECLIN-1表达水平和自噬泡数量的差异及其与疾病特点之间的关系.方法:收集9例正常对照、19例低危MDS、14例高危MDS以及7例MDS转化的急性髓系白血病(AML)患者的骨髓单个核细胞;采用实时定量PCR检测自噬相关基因BECLIN-1的表达,在透射电子显微镜下计数细胞内自噬泡数量.结果:低危组BECLIN-1表达水平明显高于正常对照(P＜0.05);高危组BECLIN-1表达水平高于正常对照,但差异无统计学意义(P＞0.05);转AML组BECLIN-1表达水平明显低于对照组(P＜0.05).电子显微镜结果显示,低危组和高危组自噬泡数量较对照组增多,但差异无统计学意义(P＞0.05);转AML组自噬泡数量明显减少(P＜0.05).结论:在MDS疾病进展并向白血病转化的过程中患者骨髓单个核细胞内自噬相关基因BECLIN-1的表达水平逐渐降低,自噬泡数量逐渐减少;自噬可能与MDS的疾病进展相关.
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2型登革病毒对原代人肝窦内皮细胞凋亡、自噬以及相关基因表达的影响
目的：研究2型登革病毒（DENV-2）感染原代人肝窦内皮细胞（HHSECs）后，HHSECs的凋亡、自噬，细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及 Beclin-1 mRNA 水平的表达，分析 DENV-2致病过程中可能的作用机制。方法用 DENV-2（MOI=1）作用于 HHSECs，Real-time PCR 动态检测 DENV-2 NS1部分序列；CCK-8法动态检测 DENV-2对 HHSECs 的毒性作用。real-time PCR 动态检测被感染 HH-SECs 的 ICAM-1、Beclin-1 mRNA 的表达水平。流式细胞术检测被感染 HHSECs 的细胞凋亡率，以及LC3B 和 ICAM-1的表达。结果被 DENV-2作用后的 HHSECs 有 NS1部分基因序列的表达。DENV-2感染细胞后，CCK-8法检测细胞的抑制率分别为（10.90±1.24）%（12 h）、（16.40±0.42）%（24 h）、（17.00±0.46）%（36 h）、（29.60±0.26）%（48 h）。Real-time PCR 检测 HHSECs 中 Beclin-1及 ICAM-1 mRNA 的表达，以未感染组为对照，2-△△Ct值于24 h 达峰值，分别为46.77±2.55和40.97±4.91。流式细胞术动态观察被 DENV-2感染的 HHSECs 的凋亡，于12 h 较明显，凋亡率为13.17%；36 h 时LC3B 的表达率（35.50%）达到峰值；ICAM-1的表达率分别为9.17%（12 h）、14.7%（24 h）、12.7%（36 h）、11.6%（48 h）。结论 HHSECs对 DENV-2易感。DENV-2可激活 HHSECs，诱导 ICAM-1上调；可促进自噬的发生，于早期诱导 HHSECs 细胞凋亡。
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激活自噬减轻心肺复苏后Wistar大鼠脑损伤
目的 观察自噬(autophagy)在心肺复苏(CPR)后Wistar大鼠脑损伤中的作用.方法 实验一:36只健康成年雄性Wistar大鼠通过体外交流电刺激诱发心室颤动(VF),VF (0)前和ROSC后1、2、4、8、12 h取大脑皮层观察beclin-1和LC3Ⅱ的表达.实验二:60只Wistar大鼠随机(随机数字法)分为对照组(control)、自噬激活剂雷帕霉素组(Rapamycine)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(3-MA).VF前1h分别向腹腔内注入生理盐水或雷帕霉素1 mg/kg或3-甲基腺嘌呤30 mg/kg.ROSC后2、4h取大脑皮层,用电镜和Western blot方法观察神经元自噬的激活,免疫荧光观察LC3颗粒的形成;24、48、72 h进行NDS评分;72h后取大脑皮层行HE染色和TUNEL染色计数顶叶皮层存活神经元细胞数和凋亡神经元细胞数.beclin-1、LC3Ⅱ表达和神经元计数用单因素方差分析,NDS比较用秩合检验.结果 实验一中28只Wistar大鼠复苏成功.ROSC后2、4h自噬基因beclin-1和LC3Ⅱ的表达明显低于VF前(P＜0.05),而ROSC后8、12h的表达与VF前差异无统计学意义.Rapamycine组动物ROSC后2、4h大脑皮层beclin-1的表达和LC3Ⅱ的转换明显高于Control组和3-MA组,P＜0.05.ROSC后2、4 h Rapamycine组自噬泡数量明显多于Control组和3-MA组;ROSC后4 h Rapamycine组LC3颗粒数也明显多于Control组和3-MA组.ROSC后72 h Rapamycine组动物大脑皮层存活的神经元细胞数多于Control组和3-MA组(P＜0.05);凋亡神经元细胞数Rapamycine组少于Control组和3-MA组(P＜0.05).ROSC后24、48、72 h Rapamycine组的NDS评分优于control组和3-MA组(P＜0.05).结论 ROSC后早期大脑皮层神经元beclin-1和LC3-Ⅱ表达下降,通过雷帕霉素促进beclin-1和LC3-Ⅱ表达可以保护神经元细胞和改善神经功能.
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推拿对失神经骨骼肌萎缩大鼠自噬相关因子Beclin-1、液泡分选蛋白34和微管相关蛋白轻链3的mRNA表达的影响
目的 探讨推拿延缓失神经骨骼肌萎缩的相关机制.方法 77只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为假手术组(n=7)、模型组(n=35)和推拿组(n=35).后两组通过暴露并切断胫神经的方法制备失神经骨骼肌萎缩大鼠模型.造模后第2天,推拿组术侧下肢进行推拿干预.分别在造模后0 d、7 d、14 d、21 d和28 d取材,测定术侧腓肠肌湿重比,HE染色测定腓肠肌肌纤维截面积和直径,逆转录实时定量聚合酶链反应检测术侧腓肠肌组织中自噬相关因子Beclin-1、液泡分选蛋白34(Vps34)和微管相关蛋白轻链3(LC3)的mRNA表达.结果 三组0 d时,腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径,以及Beclin-1、Vps34和LC3的mRNA表达均无显著性差异(F<1.321,P>0.05).与假手术组比较,模型组和推拿组腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径在不同时间下降(P<0.05),推拿组肌湿重比(除21 d)均高于模型组(P<0.05),推拿组肌纤维截面积和直径(除21 d)均大于模型组(P<0.05).与假手术组相比,模型组和推拿组术侧腓肠肌Beclin-1、Vps34、LC3 mRNA表达在不同时间升高(P<0.05),推拿组各项mRNA表达(除14 d)均高于模型组(P<0.05).组内比较,模型组和推拿组腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径随时间呈进行性下降趋势(P<0.05);模型组Beclin-1、Vps34 mRNA表达在21 d后呈上升趋势(P<0.05),LC3 mRNA表达在21 d升高(P<0.05);推拿组Beclin-1 mRNA表达呈先上升后下降的趋势(P<0.05),Vps34和LC3 mRNA表达(除14 d)呈先上升后下降趋势(P<0.05).结论 推拿可能通过上调自噬相关因子Beclin-1、Vps34和LC3的mRNA表达,促进细胞自噬的激活,清除损伤细胞器和蛋白质,为肌纤维再生提供一定的合成底物和能量,从而减轻失神经骨骼肌萎缩的程度.
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电针神庭、百会对脑缺血再灌注大鼠认知功能及 Beclin-1表达的影响
目的 观察电针神庭、百会对脑缺血再灌注大鼠认知功能的影响,并探讨其可能机制.方法 雄性Sprague-Dawley大鼠45只随机分为假手术组(n=15)、模型组(n=15)和电针组(n=15).模型组和电针组采用线栓法制备脑缺血2 h再灌注模型.电针组术后2 h起电针百会、神庭共7 d.各组术后1 d、3 d、5 d、7 d行Longa评分;干预后4 d起,行Morris水迷宫测试,共4 d.干预后7 d,TTC染色检测脑梗死体积,Western blotting检测缺血侧Beclin-1蛋白表达.结果 干预后3 d起,与模型组相比,电针组大鼠Longa评分降低(P<0.05).各时间点,与模型组相比,电针组逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数提高(P<0.05).与模型组相比,电针组脑梗死体积显著减小(F=7.651,P<0.001),Beclin-1表达增强(P<0.05).结论 电针百会、神庭穴可以改善脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力,可能与调控自噬网络有关.
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脊髓切开术对大鼠脊髓损伤区自噬的影响
目的：观察脊髓切开术干预后大鼠脊髓损伤区自噬活性的变化。方法54只成年雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n=18)、挫伤组(n=18)和手术组(n=18)。用NYU打击器制备T10脊髓挫伤模型。手术组在造模后24 h行脊髓切开术。在伤后第1、7、14天，采用开放场地试验评估大鼠运动功能；RT-PCR检测Beclin-1和Bcl-2的mRNA表达；伤后3 d开始电镜观察自噬体。结果损伤后7 d、14 d，手术组大鼠BBB评分高于挫伤组(P<0.05)，Beclin-1 mRNA水平低于挫伤组(P<0.05)；伤后3 d、7 d，Bcl-2 mRNA水平高于挫伤组(P<0.05)。伤后7 d、14 d，大鼠脊髓损伤区的Beclin-1 mRNA水平与行为学评分负相关(P<0.01)。脊髓挫伤后自噬体形成增多，手术组自噬体形成减少。结论脊髓切开术能改善创伤性脊髓损伤大鼠的运动功能，可能与抑制自噬、上调Bcl-2 mRNA表达有关。
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电针对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织Beclin-1蛋白及基因表达的影响
目的:观察电针(EA)对脑缺血再灌注认知障碍模型大鼠脑组织中Beclin-1的影响,探讨脑卒中后认知障碍的康复机制.方法:健康SD雄性大鼠105只,随机分为3组:电针组、模型组和假手术组,每组35只;大鼠缺血再灌注模型采用改良线栓法栓塞左侧大脑中动脉制备.电针“神庭穴”、“百会穴”各30min,1次/日,从术后第1天至第10天动物处死.采用Morris水迷宫实验观测模型大鼠的学习、记忆能力;采用Western blot和荧光定量PCR法检测大鼠脑组织Beclin-1蛋白和基因的表达.结果:造模后的第4到第8天,模型组大鼠的逃避潜伏期较假手术组长(P＜ 0.05),EA组大鼠的逃避潜伏期较模型组缩短(P＜0.05).电针组大鼠海马及左侧大脑皮质中Beclin-1蛋白的电泳条带与假手术组相比,电针组条带灰度值较假手术组高(P＜0.05),与模型组相比,电针组Beclin-1蛋白电泳条带灰度较模型组高(P＜0.05).模型组和电针组的Beclin-1基因表达的2-△△ct与假手术组相比差异明显,均升高(P＜0.05).但电针组Beclin-1基因表达的2-△△Ct明显较模型组高(P＜0.05)结论:①电针神庭、百会可以促进脑缺血再灌注后认知障碍模型大鼠的认知功能的恢复;②电针可以提高缺血再灌注模型大鼠脑组织中的Beclin-1表达.Beclin-1是一种自噬相关蛋白,直接执行自噬的过程,被作为自噬发生的标志物.对自噬网络系统的调控可能是电针能够改善脑卒中后认知障碍的生物学机制之一.
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搜风祛痰中药对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块自噬相关蛋白Beclin-1、Bcl-2、LC3的影响
目的：通过对ApoE基因敲除小鼠喂食搜风祛痰中药复方稳斑汤后观察动脉粥样硬化（AS）不稳定斑块自噬相关蛋白Beclin-1、Bcl-2、 LC3的改变，探索治疗动脉粥样硬化新思路、新方法。方法将ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块模型随机分成空白组、模型组、稳斑汤低、中、高剂量组、西药组。小鼠麻醉处死取主动脉组织HE染色后进行病理学观察，采用半定量 RT-PCR 技术检测Beclin-1、Bcl-2、LC3蛋白表达变化。结果与空白组比较，模型组小鼠腹主动脉组织中Beclin-1、Bcl-2、LC3蛋白表达水平显著降低（P<0.01）；与模型组比较，西药组和稳斑汤各剂量组均能提高Beclin-1、Bcl-2、LC3表达水平（P<0.01）；稳斑汤高剂量组与西药组在Beclin-1、Bcl-2、LC3表达水平上差异无统计学意义（P>0.05）。结论中药搜风祛痰法稳斑汤可以显著提高Beclin-1、Bcl-2、LC3蛋白表达水平，从而达到稳定动脉硬化斑块、抗动脉硬化效果。
关键词： 搜风祛痰中药复方稳斑汤 不稳定斑块 Beclin-1 Bcl-2 LC3 -
前列腺腺癌中Beclin-1和Bcl-2的表达及意义
目的：探讨 Beclin-1和 Bcl-2在前列腺腺癌中的表达及意义方法采用免疫组化 PV-6000法检测76例前列腺腺癌和40例前列腺结节性增生组织中Beclin-1和Bcl-2的表达。结果在前列腺腺癌组织中，Beclin-1、Bcl-2的阳性表达率分别为47.4%、39.5%；在前列腺结节性增生组织中Beclin-1、Bcl-2的阳性表达率分别为95%、12.5%。Beclin-1、Bcl-2的表达在前列腺腺癌中与前列腺结节性增生组织中有明显差异（P均＜0.01）；同时两者的表达与前列腺腺癌组织的Gleason评分分级有相关性，Gleason评分越高，Beclin-1的表达越弱，而Bcl-2的表达越强（P＜0.05）；Beclin-1在前列腺腺癌中的阳性表达与Bcl-2的阳性表达呈负相关性（r＝-0.235，P＜0.05）。结论 Beclin-1和Bcl-2与前列腺腺癌的发生、发展有关，联合检测有助于临床预测患者预后。
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Wortmannin 对血管性痴呆大鼠海马 CA1区自噬相关蛋白 Beclin-1及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响
目的探讨Wortmannin对血管性痴呆大鼠海马 CA1区的自噬及凋亡表达的影响及意义。方法将150只大鼠随机分为假手术组、模型组及Wortmannin组。每组又随机分为1周、2周、4周、8周和12周5个亚组（n＝10）。采用四血管阻断法制备血管性痴呆模型，应用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力，HE染色观察大鼠海马区神经元形态变化，免疫组化法检测Beclin-1及Caspase-3蛋白的表达。结果与假手术组比较，模型组出现明显学习记忆障碍，海马CA1区Beclin-1阳性表达在1周开始增多，4周达到高峰，8周开始下降，到12周仍增多；Caspase-3阳性表达在1周开始增多，2周达到高峰；4周开始下降，到12周仍增多，差异有统计学意义（ P＜0.05）；与模型组比较，Wortmannin组学习记忆障碍明显改善，海马CA1区Beclin-1及Caspase-3阳性表达减少，差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论 Wortmannin可能通过减轻自噬及凋亡对神经细胞的损伤，从而达到保护神经细胞，增强和调节学习记忆能力的作用。这可能为血管性痴呆的治疗提供一个靶点。
关键词： 自噬 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 Wortmannin Beclin-1
