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肿瘤坏死因子-α对RF/6A细胞自噬促进细胞增殖、迁移和管腔形成的影响
目的 本研究观察肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)对体外培养的恒河猴脉络膜/视网膜内皮细胞(RF/6A)表达自噬蛋白Beclin-1及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响,探讨TNF-α参与新生血管生成的可能机制.方法 将生长良好的RF/6A细胞随机分为空白对照组、TNF-α组和TNF-α+3-MA组.培养24 h、48 h后采用Western blot检测细胞Beclin-1蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,细胞划痕法检测细胞迁移,Matrigel法检测管腔形成.结果 培养24 h和48 h,各组Beclin-1/β-actin比值分别是TNF-α组(24 h)0.673±0.017、TNF-α+ 3-MA组(24 h)0.491±0.017、TNF-α组(48 h)0.792±0.006、TNF-α+ 3-MA组(48 h)0.504±0.007、空白对照组0.268±0.017.TNF-α组RF/6A细胞Beclin-1的表达量均明显高于空白对照组(P＜0.05),TNF-α+ 3-MA组Beclin-1的表达量较TNF-α组明显减少(P＜0.05).各组细胞的相对增殖率分别是TNF-α组(24 h)1.410±0.010、TNF-α+ 3-MA组(24 h) 1.290±0.004、TNF-α组(48 h)1.320±0.011、TNF-α+3-MA组(48 h)0.180±0.015、对照组(24 h)1.000±0.020、对照组(48 h) 1.000±0.011;TNF-α组细胞的相对增殖率均较空白对照组升高(P＜0.05),3-MA预处理后,TNF-α促进RF/6A细胞增殖的能力在两个时间点均受到抑制(均为P＜0.05).各组细胞的相对迁移距离分别是TNF-α组(24 h) (345±28) μm、TNF-α+ 3-MA组(24 h) (259±77) μm、TNF-α组(48 h) (762±55) μm、TNF-α+ 3-MA组(48 h)(659±48)μm、空白对照组(24 h)(195±63) μm、空白对照组(48 h)(412±94) μm;TNF-α处理组RF/6A细胞24 h的迁移明显强于对照组(P＜0.05),加入3-MA预处理后,这种增强作用有所下降,但仍然明显高于对照组(P＜0.05);培养48 h,更多细胞迁移入划痕区域,较24 h明显增加;不同组之间的差异与24h时的结果类似,差异有统计学意义(P＜0.05);培养24 h各组细胞管腔形成个数:TNF-α组(11.80±0.81)个、TNF-α+ 3-MA组(7.50±0.72)个、空白对照组(4.30±1.12)个,TNF-α组及TNF-α+3-MA组管腔形成个数均高于对照组(均为P＜0.05),TNF-α+ 3-MA组较TNF-α组明显减少(P＜0.05).结论 TNF-α能够促进RF/6A细胞的增殖、迁移和管腔样结构的形成,且TNF-α促进内皮细胞自噬在血管新生中发挥重要的调控作用.
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脑胶质瘤组织中 Beclin-1的表达及与预后的关系
目的：探讨人脑胶质瘤组织中自噬相关基因Beclin-1的表达及与预后的关系。方法：采用免疫组化SP法及RT-PCR技术检测43例脑胶质瘤组织（包括Ⅰ级5例，Ⅱ级17例，Ⅲ级12例，Ⅳ级9例）及11例非瘤脑组织中Beclin-1蛋白和mRNA的表达，同时对随访资料进行Kaplan-Meier生存分析。结果：非瘤脑组织，Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级脑胶质瘤组织中Beclin-1蛋白和mRNA的表达水平差异均有统计学意义（ F＝99．962和41．951，P均＜0．001）。Ⅲ级、Ⅳ级脑胶质瘤组织中Beclin-1蛋白和mRNA的表达水平低于Ⅰ级、Ⅱ级脑胶质瘤组织和非瘤脑组织（P＜0．05），Ⅰ级、Ⅱ级脑胶质瘤组织中Beclin-1蛋白的表达水平低于非瘤脑组织（P＜0．05）。43例患者随访到35例，以脑胶质瘤组织中Beclin-1蛋白表达水平的中位数为界限，将35例患者分成Beclin-1蛋白低表达组（16例）及高表达组（19例），两组的Kaplan-Meier生存曲线差异有统计学意义（χ2＝4．962，P＝0．026），Beclin-1蛋白高表达组预后优于低表达组。结论：Beclin-1可作为判断人脑胶质瘤预后的新指标用于临床。
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瑞舒伐他汀对心肌肥厚大鼠心肌组织 Beclin-1蛋白表达的影响
目的：探讨瑞舒伐他汀对心肌肥厚大鼠心肌组织中自噬相关蛋白Beclin-1表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠75只，随机分为假手术组、模型组和RSV组，每组25只，模型组和RSV组通过腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚模型，术后分别给予生理盐水和瑞舒伐他汀（4 mg／kg）灌胃，1次／d，连用4周。4周后测定心脏指数，用RT-PCR和Western blot法分别检测大鼠左心室心肌组织中Beclin-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与假手术组比较，模型组大鼠心肌明显肥厚，心脏指数升高，心肌组织中Beclin-1 mRNA和蛋白表达上调（ P＜0．05）；与模型组比较， RSV组大鼠心肌无明显肥厚，心脏指数降低，心肌组织中Beclin-1 mRNA和蛋白表达下降（P＜0．05）。结论：瑞舒伐他汀可抑制压力超负荷性心肌肥厚，其作用机制可能与降低自噬水平有关。
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Beclin-1在肺腺癌发生发展中的作用及其对预后的影响
目的：研究自噬特异性标志物 Beclin-1在肺腺癌发生、发展中的变化及其对术后患者预后的影响。方法采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及 Western blot 法分别检测108例正常肺组织、肺不典型腺瘤样增生（AAH）、肺原位腺癌、肺微浸润性腺癌及浸润性腺癌组织标本中自噬特异性标志物 Beclin-1在基因及蛋白水平的表达，比较 Beclin-1在不同组织中及不同病理分期肺腺癌患者肿瘤组织中的变化，分析其对肺腺癌患者术后预后的影响。结果肺腺癌 Beclin-1基因及蛋白水平的表达均显著低于正常肺组织（P <0.05），浸润性肺腺癌组织表达低；早期肺腺癌（Ⅰ~Ⅱ期）患者肿瘤组织 Beclin-1的表达高于中晚期肺腺癌（Ⅲ~Ⅳ期）患者（P <0.05）。肺腺癌伴淋巴结转移者肿瘤组织 Beclin-1的表达低于淋巴结阴性患者（P <0.05）。肺腺癌肿瘤组织Beclin-1阳性表达患者术后生存时间显著高于 Beclin-1阴性表达者（P <0.05）。结论 Beclin-1的表达与肺腺癌的发生、发展相关；肺腺癌 Beclin-1的表达缺失预示肺腺癌患者术后生存率较差。Beclin-1可能成为预测肺腺癌患者术后预后的重要标志物。
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Beclin-1调控p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对缺氧复氧心肌细胞氧化损伤影响及临床意义
目的 观察Beclin-1调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对缺氧复氧(H/R)心肌细胞氧化损伤的影响.方法 H9C2细胞给予缺氧复氧(H/R),Beclin-1 siRNA转染及p38MAPK抑制剂SB203580处理,分为对照组(Con)、H/R、Beclin-1 siRNA+ H/R、SB+ H/R组和Beclin-1 siRNA+ SB+ H/R组.定量聚合酶链反应(PCR)和Westem blot检测细胞中Beclin-1及下游蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡,黄嘌呤氧化法检测心肌细胞中超氧化物歧化酶Orgotein(SOD)水平,硫代巴比妥酸比色法检测细胞中丙二醛(MDA)水平,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)水平.结果 H9C2细胞经H/R处理,细胞中Beclin-1 mRNA和蛋白水平均明显高于Con(t1=8.205,P1=0.001;t2=5.583,P2=0.011),细胞凋亡率由(6.47±0.84)％增加为(36.18±2.69)％(t=18.260,P=0.000),细胞中MDA和LDH水平升高(t1=11.596,P1=0.000;t2=18.709,P2=0.000),SOD水平下降(t=-8.041,P=0.001).Beclin-1敲除或p38MAPK抑制剂SB203580处理H/R细胞,细胞凋亡率下降(t1=-3.971,P1=0.016;t2=-6.100,P2=0.003),降低细胞中MDA(t1=-5.567,P1=0.005;t2=-3.325,P2 =0.029)和LDH(t1=-4.850,P1=0.008;t2=-2.668,P2=0.055),SOD水平升高(t1=4.103,P1=0.014;t2=2.594,P2=0.060),下调Cleaved Caspase-3(t1=16.705,P1=0.000;t2=16.623,P2=0.000)及p-p38MAPK(t1=-5.448,P1 =0.005;t2=-3.421,P2=0.027)的表达,上调第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)的表达(t1=7.574,P1 =0.002;t2=10.549,P2 =0.001).结论 缺氧复氧诱导心肌细胞氧化损伤,抑制Beclin-1/p38MAPK信号通路,减轻细胞凋亡和氧化应激,发挥心肌保护作用.
关键词： 缺氧复氧 心肌细胞 氧化损伤 Beclin-1 p38丝裂原活化蛋白激酶 -
榄香烯对肺腺癌耐药株SPC-A-1/顺铂耐药性的逆转作用及其机制
目的 探讨榄香烯是否参与肺癌细胞对顺铂(DDP)耐药性的调节及其潜在的分子机制.方法 首先,观察不同剂量DDP对肺癌细胞株SPC-A-1及其耐药株SPC-A-1/DDP细胞活性的影响.其次,以低剂量榄香烯处理两种细胞株,24 h后检测细胞对DDP的敏感性以及耐药相关蛋白水平,并检测细胞自噬水平的改变,检测自噬关键调节蛋白Beclin-1的水平.再次,以15 μg/ml DDP处理SPC-A-1/DDP细胞同时施加榄香烯、Beclin-1过表达或Beclin-1干扰处理,24 h后检测耐药性、Beclin-1和耐药相关蛋白水平.结果 与SPC-A-1相比,SPC-A-1/DDP对DDP不敏感(67.00 ±0.40,P =0.000).低剂量的榄香烯增加SPC-A-1/DDP细胞对DDP的敏感性(43.00 ±0.27,P=0.000),伴随多药耐药相关蛋白-1(MRP-1)和P-糖蛋白(P-gp)表达的减少(1.55 ±0.22,P=0.000;1.34-0.12,P=0.000),并促进细胞自噬和自噬关键调节蛋白Beclin-1水平的升高(2.69土0.20,P=0.000).过表达Beclin-1与榄香烯对SPC-A-1/DDP细胞耐药性有类似逆转作用(16.00±1.50,P=0.010).与此相反,干扰Beclin-1基因能拮抗榄香烯对细胞耐药性的逆转作用(46.00±3.10,P=0.010).结论 榄香烯通过诱导Beclin-1介导的自噬增加SPC-A-1/DDP对DDP的药物敏感性.
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调控自噬对脊髓损伤后神经保护作用及机制
目的 探索通过雷帕霉素调控自噬对脊髓损伤大鼠脊髓神经元凋亡的作用及机制.方法 将36只SD大鼠随机分为3组,每组12只.假手术组仅行椎板切除,生理盐水组和雷帕霉素组采用改良Allen's法损伤T10脊髓.术后1、3、7、14 d评价大鼠神经功能,术后14d采用免疫组织化学双标染色检测神经元自噬水平,检测自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Beclin-1 mRNA和蛋白的表达.结果 1、3、7、14 d生理盐水组和雷帕霉素组术后斜板实验(28.14 ±2.48)°、(30.65±3.58).、(34.85 ±4.12)°、(37.62 ±4.73)°;(29.02 ±2.64)°、(36.37±3.87).、(43.28±4.39)°、(50.06±4.52)°(P =0.430、0.021、0.016、0.005)和改良Tarlov评分(0.23±0.12)、(0.96±0.22)、(1.17 ±0.28)、(1.73±0.35)分;(0.29±0.15)、(1.34 ±0.23)、(2.26 ±0.30)、(3.68 ±0.41)分(P =0.390、0.037、0.028、0.013),均较假手术组显著降低,之后有增加趋势,自3d起两组差异有统计学意义.运动诱发电位(MEP)检测生理盐水组和雷帕霉素组潜伏期与波幅(17.08±0.39)、(13.85±0.31)、(9.26±0.23)、(8.24±0.25) ms;(1.86±1.05)、(2.37±1.26)、(3.84±1.75)、(4.27±1.49) μV和(12.63 ±0.34)、(9.88 ±0.29)、(7.59 ±0.22)、(6.48±0.21) ms;(3.75±1.88)、(4.72±2.14)、(5.43 ±2.29)、(5.96±2.31) μV(P=0.002、0.003、0.021、0.023和P=0.022、0.029、0.032、0.042),两组术后潜伏期明显延长且波幅降低,自1d开始潜伏期逐渐缩短而波幅增高,两组差异有统计学意义.免疫组织化学双标染色共聚焦显微镜检测LC3阳性神经元荧光强度,假手术组为103.26±5.49,生理盐水组为121.85±8.37(P =0.002),雷帕霉素组为156.17±10.62,P=0.001;同时实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LC3和Beclin-1的mRNA相对表达量,生理盐水组为1.28±0.09和1.23 ±0.12,雷帕霉素组为1.74 ±0.10和1.51 ±0.14(P=0.022、P=0.030);Western blot检测LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白的表达水平也是雷帕霉素组高,均与生理盐水组差异有统计学意义(P =0.033、P=0.041).结论 有效调控自噬可通过抑制凋亡而促进脊髓神经功能的修复.
关键词： 脊髓损伤 自噬 雷帕霉素 自噬微管相关蛋白1轻链3 Beclin-1 -
自噬基因Beclin-1通过食管癌相关基因4通路抑制A549肺癌细胞增殖
目的 探讨自噬基因Beclin-1过表达对A549肺癌细胞自噬和增殖的影响以及其作用机制.方法 用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot的方法分别检测转染后各组A549肺癌细胞Beclin-1 mRNA和蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测各组A549细胞生长增殖;单丹磺酰戊二胺(MDC)法检测各组A549细胞自噬的变化;Western blot方法检测各组A549细胞食管癌相关基因4(ECRG4)蛋白表达变化.结果 与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,A549细胞中Beclin-1 mRNA和蛋白表达显著增加(P＜0.05);与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,Beclin-1过表达组细胞群体平均倍增时间[(46.0±2.4)h]显著延长(P＜0.05);与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,自噬细胞阳性数量[(10.0±1.5)个]显著增加(P＜0.05);与对照组比较,感染pLenex-Beclin-1慢病毒颗粒后,ECRG4蛋白表达增加(P＜0.05).结论 自噬基因Beclin-1通过ECRG4通路抑制A549肺癌细胞增殖.
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自噬基因Beclin-1通过食管癌相关基因4通路影响A549肺癌细胞自噬和凋亡
目的 探讨自噬基因Beclin-1表达沉默对A549肺癌细胞自噬和凋亡的影响以及其作用机制.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot的方法分别检测转染后各组A549肺癌细胞Beclin-1 mRNA和蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测各组A549细胞生长增殖;单丹磺酰戊二胺(MDC)法检测各组A549细胞自噬的变化;用流式细胞仪检测各组A549细胞凋亡;Western blot方法检测各组A549细胞食管癌相关基因4(EC RG4)蛋白表达变化.结果 与对照组比较,感染Beclin-1小干扰RNA (siRNA)慢病毒颗粒后,A549细胞中Beclin-1 mRNA和蛋白表达显著减少(P＜0.05),Beclin-1 mRNA的沉默效率分别为35.56％、89.22％和66.78％;感染Beclin-1siRNA慢病毒颗粒后,A549细胞凋亡率为(4.31±0.49)％,和对照组比较显著降低(P＜0.05);感染Beclin-1 siRNA慢病毒颗粒后,A549细胞群体平均倍增时间为(37.7±2.6)h,和对照组比较,平均倍增时间缩短(P＞0.05);感染Beclin-1 siRNA慢病毒颗粒后,和对照组比较,A549细胞自噬细胞阳性数量减少(P＞0.05);感染Beclin-1 siRNA慢病毒颗粒后,和对照组比较,ECRG4蛋白表达下降(P＜0.05).结论 自噬基因Beclin-1通过ECRG4通路影响A549肺癌细胞自噬和凋亡.
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大鼠蛛网膜下腔出血后胶质纤维酸性蛋白、Beclin-1和微管相关蛋白2的表达
目的 探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤和自噬激活的相关性.方法 比较SAH后大鼠脑含水量变化以及双重免疫荧光染色结果.结果 脑干湿重法显示SAH后大鼠6h大脑半球含水量为78.25％,3d时为79.75％,明显增高(P＜0.05)；小脑半球在各时间点含水量差异无统计学意义(P＞0.05).胶质纤维酸性蛋白和Beclin-1染色显示神经元细胞Beclin-1染色呈阳性,自噬激活发生于神经元细胞；Beclin-1和微管相关蛋白2染色显示神经元细胞呈阳性,神经元细胞自噬被明显激活,与含水量变化表现为相同的时程变化.结论 大鼠SAH后出现了大脑半球早期脑损伤表现和自噬激活征象,自噬可能在SAH后早期脑损伤过程中起关键作用.
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大鼠增龄过程中髓核组织Beclin-1和微管相关蛋白轻链3的表达及其意义
目的 探讨在增龄过程中SD大鼠髓核组织中Beclin-1和微管相关蛋白轻链3(MAPLC3)的表达及其意义.方法 3个月龄、12个月龄、24个月龄SD大鼠各8只,建立青年组、中年组和老龄组大鼠模型,苏木素-伊红(HE)染色检测椎间盘组织的退变;透射电镜检测髓核细胞中自噬体的表达;免疫组织化学染色和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定髓核组织中Beclin-1和MAPLC3的表达.结果 大鼠增龄过程可较好地体现椎间盘的退变变化;不同年龄组大鼠髓核细胞中均有自噬体的表达;Beclin-1和MAPLC3在不同年龄组SD大鼠髓核细胞中均有表达(0.42±0.05,0.47±0.06,0.52±0.05;0.34±0.06,0.39±0.05,0.46±0.09),且老龄组表达均较青年组高(P<0.01).Beclin-1和MAPLC3 mRNA在不同年龄组SD大鼠髓核组织中均有表达(0.86±0.12,0.93±0.14,1.01±0.13;1.09±0.06,1.15±0.07,1.33±0.11),且老龄组表达较青年组表达明显增高(分别为P<0.05和P<0.01).结论 自噬存在于椎间盘退变过程中,且MAPLC3与Beclin-1在椎间盘退变过程中的表达增加,提示自噬活性的增加可能与椎间盘退变的发展进程有关.
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腹腔灌注顺铂治疗胃癌恶性腹水的疗效与Beclin-1mRNA表达变化的关系
目的 探讨腹水脱落癌细胞Beclin-1 mRNA表达变化对顺铂腹腔化疗治疗胃癌恶性腹水疗效的预测作用.方法 35例胃癌恶性腹水患者,均接受腹腔内灌注顺铂,60毫克/次,1次/周.采用WHO标准评价疗效,根据疗效不同将患者分成治疗有效组(OR)和无效组(NR)两组;收集化疗前和首次腹腔化疗后第5天的腹水各20 ml,分离腹水中脱落癌细胞,RT-PCR技术检测腹水脱落癌细胞Beclin-1和Bcl-2 mRNA的表达.结果 54.3％(19/35)的患者治疗有效,与NR组患者相比,OR组患者以Beclin-1和Bcl-2 mRNA降低为主(均P＜0.05);统计分析显示,Beclin-1 mRNA下降预测化疗有效的敏感度达86.7％,特异性为70.0％.结论 监测腹水脱落癌细胞中Beclin-1 mRNA水平的变化,有助于预测腹腔内灌注顺铂治疗胃癌恶性腹水的近期疗效.
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抑制beclin-1信号通路对缺血再灌注后神经母细胞瘤N2a细胞自噬的影响
目的 观察抑制beclin-1信号通路对缺血再灌注后神经母细胞瘤N2a细胞自噬的影响.方法 体外培养神经母细胞瘤系N2a细胞,脂质体转染beclin-1的miRNA干扰质粒,以缺氧、缺营养方式模拟缺血再灌注,甲基噻唑基四哇法检测各组N2a细胞活性,免疫印迹法测定各组N2a细胞beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase 3)的表达,电镜观察该细胞自噬活性.结果 在缺血90 min、再灌注24 h干扰组较相应假于扰组细胞活性明显升高(P<0.05) ;干扰组beclin-1和Caspase 3表达水平明显低于相应的假干扰组(P<0.05),但两组之间LC3表达无明显差异(P>0.05);而在缺血30min再灌注24 h细胞活性,beclin-1、Caspase 3和LC3的表达真假干扰组间无明显差异(P>0.05).电镜下在正常组没有观察到细胞自噬现象;在缺血30 min和90 min再灌注24 h,真假干扰组均观察到明显的细胞自噬现象,且两组间无明显差异.结论 缺血90 min,再灌注24 h时,干扰beclin-1的表达虽不能明显改变N2a细胞自噬水平,却减少了凋亡,有利细胞存活.
关键词： 神经细胞瘤N2a细胞 缺血再灌注 Beclin-1 细胞自噬 凋亡 -
自噬标志物LC3B表达水平的改变与星形细胞瘤手术患者预后的相关性研究
目的 评估两种自噬标志物LC3B和Beclin-1的蛋白表达水平与星形细胞瘤患者的临床参数之间的关系.方法 回顾性收集2009年12月-2012年12月星形细胞瘤患者的106个薄切片,通过切片染色分析LC3B和Beclin-1与患者生存时间的关系.结果 发现LC3B与蛋白质表达水平与抗辐射或化学疗法显著相关(P=0.02);高强度的LC3B染色预示着不良的预后(P=0.03);Beclin-1蛋白表达水平与患者的总体生存率不相关;CD133和LC3B高表达的患者的总生存期为38个月,CD133和LC3B两者均为弱表达的患者的总生存期为50个月,CD133和LC3B高表达的患者的生存时间明显短于CD133和LC3B低表达者(P=0.049).结论 星形细胞瘤癌症干细胞样细胞和增强的自噬可引起对放射疗法/化学疗法的抗性,并且针对星形细胞瘤中的癌症干细胞样细胞可提供可行的治疗方法.
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党参多糖对大鼠脑缺血再灌注脑组织氧自由基和Beclin-1表达的影响
目的 观察党参多糖对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其可能作用机制.方法 改良大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)法制备大鼠局灶性脑缺血模型,2、3、5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-tri phenyltetrazolium chloride,TTC)染色法检测大鼠脑梗死面积;化学比色法检测脑组织中丙二醛(malondiMdehyde,MDA)含量、超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力;蛋白免疫印迹法检测自噬特异性基因Beclin-1的表达变化.结果 与模型组比较,党参多糖可减小脑梗死面积(30.17±10.11、25.63±10.59),增加SOD(48.36±2.52、56.29±3.41)和GSH-Px(4.33±0.18、5.21±0.11)活性,降低MDA含量(0.13±0.04、0.11±0.02)(P＜0.01),抑制Beclin-1表达(0.47±0.04、0.42±0.05)(P＜0.05).结论 党参多糖对脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,可能是通过减轻氧化应激及抑制自噬基因Beclin-1表达而达到的.
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自噬相关蛋白Beclin-1表达与缺血性心肌病的相关性
目的 探讨自噬相关蛋白Beclin-1表达与缺血性心脏病的相关性.方法 病例组选自贵州医科大学法医司法鉴定中心于2013年7月至2016年12月接收的尸检案例中被确诊为“缺血性心肌病”的80例死者,对照组为同期接收的尸检案例中经病理组织学检查确认无心肌组织病变的122例死者.用免疫组织化学检测Beclin-1在病例组和对照组心肌细胞中的表达.通过建立广义线性模型,调整多个混杂因素(包括性别、年龄、身高、体质指数、左心室壁厚度、右心室壁厚度、酗酒史、Gensini评分、心肌梗死史、是否合并高血压、慢性肾病和慢性呼吸系统疾病),评估Beclin-1和缺血性心肌病发病的相关性.结果 Beclin-1在心肌细胞中的表达与缺血性心肌病呈正相关(OR=1.2,95％CI为1.1～1.3,P＜0.001).即在调整其他混杂因素后,Beclin-1对缺血性心肌病的作用是:Beclin-1的表达每增加0.01个单位,缺血性心肌病风险增加20％.结论 Beclin-1可能是缺血性心肌病的独立危险因素.
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儿童急性淋巴细胞白血病beclin-1的表达及意义
目的:探讨自噬基因beclin-1在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者外周血白细胞的表达及意义.方法:选取儿童急性淋巴细胞白血病患者39例,体检正常儿童40例作为对照,收集患者及正常对照外周血标本,分离白细胞,用免疫组化和免疫印迹法检测beclin-1表达,分析比较患者与对照组beclin-1蛋白表达差异.结果:ALL患儿外周血白细胞beclin-1表达阳性率48.7％(19/39),低于正常对照组82.5％(33/40) (P＜0.005),Western blot显示患儿阳性标本表达量亦低于对照阳性标本.标危组表达率(59.3％)高于高危组(25.0％),B-ALL与T-ALL的beclin-1表达率差异无显著性(P＜0.05).结论:beclin-1表达率及表达量在ALL患儿外周血白细胞中明显低于正常对照;beclin-1表达率与诊断时免疫学分型无明显关系,标危组表达率高于高危组.beclin-1可能与儿童ALL发生发展相关.
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加味丹参饮预处理调控自噬相关基因Beclin-1和Atg5表达抗大鼠心肌缺血再灌注损伤
目的：探讨加味丹参饮预处理是否通过调节Beclin-1和Atg5表达调控自噬抗缺血再灌注损伤大鼠心肌。方法将60只健康SD大鼠随机分为空白对照（control group ，C）组、假手术(sham，S)组、缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion in-jury ，IRI）组、IRI+加味丹参饮（Jiawei Danshen Yin, JDY）组、IRI+JDY+自噬抑制剂（inhibitor,I）组，每组12只。通过结扎-放松大鼠左冠状动脉前降支制备心肌IRI模型。通过氯化三苯基四氮唑（TTC）染色观察心肌梗死面积率；在透射电镜下观察自噬泡；采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription - polymerase chain reaction， RT-PCR)方法检测心肌Beclin-1和Atg5 mRNA表达；采用蛋白质印迹(western blot)法检测心肌Beclin-1蛋白表达变化。结果 IRI+JDY组心肌梗死面积率显著低于IRI组及IRI+JDY+I组（P<0.01）。电镜结果显示，IRI+JDY组适度调节大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞的自噬，改善心肌细胞结构。 IRI组大鼠心肌细胞中Beclin-1和Atg5 mRNA表达水平及Beclin-1蛋白表达较SG组显著升高(P<0.01)；IRI+JDY 组、IRI+JDY+I 组大鼠心肌细胞中Beclin-1和Atg5 mRNA表达水平及Beclin-1蛋白表达较IRI组显著降低(P<0.01)；IRI+JDY组大鼠心肌细胞中Beclin-1和Atg5 mRNA表达水平及Beclin-1蛋白表达较IRI+JDY+I 组显著升高(P<0.01)。结论加味丹参饮通过调节缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞自噬相关基因Beclin-1和Atg5表达适度，调控缺血再灌注心肌细胞发生适度自噬，从而发挥细胞保护作用。
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自噬蛋白Beclin-1在胆囊癌中的表达及临床意义
目的 研究自噬蛋白Beclin-1在胆囊癌中的表达,分析Beclin-1与胆囊癌临床病理参数及预后的相关性.方法 利用该院构建成功的胆囊癌组织芯片,该芯片合有118例胆囊癌患者的组织标本.收集患者的临床病理资料,获得72例患者预后资料.通过免疫组织化学法和Western blot检测Beclin-1在胆囊癌组织中的表达,分析其与胆囊癌病理参数的相关性.通过单因素和多因素生存分析检测Beclin-1表达与胆囊癌患者预后的相关性.结果 Beclin-1在胆囊癌组织中的阳性表达率为67.8％(80/118).高表达的Beclin-1和胆囊癌的TNM分期、肝转移行为密切相关(P＜0.05),与患者年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤分化程度无相关性(P＞0.05).Kaplan-Meier和Cox生存分析表明,Beclin-1与胆囊癌患者的总生存率无关,Beclin-1不是胆囊癌的独立预后因素.结论 高表达的Beclin-1和胆囊癌的进展与肝转移有关,但不是有效的胆囊癌预后指标.Beclin-1可能有促进胆囊癌进展的作用.
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天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠血管内皮细胞自噬相关信号通路Ca2+/AMPK/mTOR的影响
目的 探讨天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮细胞自噬相关信号通路Ca2+/AMPK/mTOR的影响.方法 将30只雄性SHR大鼠随机分为SHR组、尼莫地平组(5.4 mg/kg)及天麻钩藤饮组(10.26 g/kg),另设京都种大鼠(WKY)作为对照组,灌胃体积为10 ml/kg,连续给药6周.采用无创血压仪分别检测各组给药前、给药2周后、给药4周后及给药6周后的大鼠尾动脉收缩压;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测给药6周后各组大鼠血浆血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)、白细胞介素1(IL-1)及钙调素(CaM)水平;采用Western blot检测给药6周后各组大鼠血管内皮细胞中自噬标志物(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链(LC3-Ⅱ)及自噬通路相关腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达情况;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测给药6周后各组大鼠血管内皮细胞中自噬通路相关AMPK、mTOR基因的表达情况.结果 与WKY组比较,SHR组大鼠尾动脉收缩压增高,血浆ANGⅡ、IL-1及CaM含量增加,血管内皮细胞中自噬标志物Beclin-1、LC3-Ⅱ和自噬通路相关AMPK、mTOR蛋白及mRNA表达水平均上调(P<0.05);与SHR组比较,尼莫地平组和天麻钩藤饮组大鼠血压均降低(P<0.05),血浆ANGⅡ、IL-1及CaM含量下降,且两者血管内皮细胞中自噬标志物Beclin-1、LC3-Ⅱ和自噬通路相关AMPK、mTOR蛋白及mRNA表达水平均降低(P<0.05).结论 天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠血管内皮细胞自噬相关信号通路Ca2+/AMPK/mTOR具有明显的调控作用,可能是其降压的重要机制之一.
