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Beclin 1、LC3-Ⅱ及P62蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及意义
目的 探讨上皮性卵巢癌中Beclin 1、LC3-Ⅱ及P62蛋白的表达及临床意义.方法 选取2011年6月-2013年3月我院手术切除并经病理学检查确诊的上皮性卵巢癌标本50例为实验组,同期手术切除正常卵巢组织20例作为对照,通过免疫组织化学SP法,检测标本中Beclin 1、LC3-Ⅱ及P62蛋白的表达情况,并结合临床病理资料进行分析.结果 在上皮性卵巢癌组织中,Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白的阳性表达率分别为46.00％(23/50)和42.00％ (21/50),低于正常卵巢组织的95.00％(19/20)和85.00％(17/20);而P62蛋白的阳性表达率为72.00％(36/50),高于正常卵巢组织的10.00％(2/20),差异均具有统计学意义(P值均＜0.05).在上皮性卵巢癌组织中,Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白的表达与FIGO分期、病理分级具有相关性(P＜0.05),而P62蛋白的表达与FIGO分期具有相关性(P＜0.05).Beclin 1蛋白和LC3-Ⅱ蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达呈正相关(P＜0.01),P62蛋白的表达与Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白均呈负相关(P＜0.01).结论 在上皮性卵巢癌组织中,Beclin 1、LC3-Ⅱ和P62蛋白的异常表达,可导致自噬体形成减少和自噬功能减弱;可能与卵巢癌的发生、发展和预后不良有关.
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Klotho与自噬在脓毒症急性肾损伤小鼠中的表达趋势
目的 研究脓毒症急性肾损伤小鼠中Klotho与自噬的关系.方法 选用清洁级健康雄性Balb/c小鼠,用盲肠结扎穿刺术(cecal ligation and puncture,CLP)建立小鼠脓毒症急性肾损伤模型,分别在CLP造模后3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d处死小鼠(n=12只);假手术组(Sham) (n=6)1 d处死,正常组(Normal)(n=6)同时处死.留取血清检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),肾组织行HE和PAS染色,观察光镜病理结果,电镜超微结构观察自噬体的形成,Western blot和免疫组化检测肾组织Klotho蛋白、LC3蛋白和P62蛋白的表达以及分布.SPSS 23.0软件采用独立样本资料的t检验进行统计学分析.结果 CLP术后Scr和BUN明显升高,1d肘达高峰,分别为(165.64 ±20.56) μmol/L和(45.51 ±4.05) mmol/L;HE和PAS染色显示肾小管刷状缘上皮细胞脱落,基底膜暴露,间质炎症细胞浸润,电镜显示肾脏可见自噬小体和吞噬泡.与Sham组相比,Klotho蛋白浓度从3h开始逐渐变淡,至1d时达低值(t=51.851,P＜0.01),2d时有所恢复,然后逐渐转浓;LC3-Ⅱ呈相反的变化趋势,从3h开始逐渐增浓,至1d时达峰值(t=-22.676,P＜0.01),2d时有所下降,然后逐渐变淡,而P62(=6.43,P=0.002)作为自噬的相关蛋白与LC3-Ⅱ反应相反,表明自噬的激活作用,在1d这个时间点显著.免疫组化显示Klotho蛋白和LC3-Ⅱ蛋白主要分布于肾小管胞浆内.CLP术后1d,Klohto蛋白明显减弱(t=-8.371,P＜0.01),LC3-Ⅱ蛋白明显增浓(t=4.995,P=0.001).结论 脓毒症急性肾损伤是Klotho减少,自噬增强的一个过程,Klotho和自噬的表达具有一定的时间依赖性.
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肌萎缩侧索硬化症相关TDP-43降解机制的研究
目的 探索肌萎缩侧索硬化症(ALS)相关TDP-43的降解机制.方法 用瞬时转染的方法在运动神经元样细胞系NSC-34中过表达野生型(role of wild-type,WT) WT TDP-43,与家族型ALS相关的Q331K TDP-43、M337V TDP-43突变蛋白、TDP-43的两种C末端片段TDP-25和TDP-35,再给予自噬、蛋白酶体通路的特异性诱导剂和阻断剂,通过蛋白印迹方法检测5种TDP-43以及自噬标记物LC3-Ⅱ的表达水平.结果 在自噬诱导剂作用下,各组LC3-Ⅱ的表达升高,同时两种突变TDP-43及其C末端片段的表达明显减少,在自噬通路和蛋白酶体阻断剂作用下突变TDP-43及其C末端片段表达水平明显增多,而WT TDP-43的蛋白表达水平仅在蛋白酶体阻断剂作用时增多.结论 WT TDP-43主要经由蛋白酶体途径降解,Q331K TDP-43、M337V TDP-43及其C末端片段经由蛋白酶体途径和自噬两种途径降解.
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佛手柑内酯对双氧水诱导人脐静脉内皮细胞衰老的影响
背景：有效的中医药治疗可以缓解内皮细胞的衰老，传统的中医药提取较困难，佛手柑内酯提纯简练，价格经济，关于佛手柑内酯在延缓内皮细胞衰老的研究中尚未见报道。目的：观察佛手柑内酯对双氧水诱导人脐静脉内皮细胞衰老的影响。方法：将人脐静脉内皮细胞采用过氧化氢处理建立衰老细胞模型，并用0.1，1，10μmol/L佛手柑内酯预处理。通过Western blot法检测各处理组pRb，pAmpk，pS6，LC3-Ⅱ，Beclin-1蛋白，β-半乳糖甘酶染色确定各组衰老细胞数，细胞免疫荧光检测pS6阳性细胞数。结果与结论：①Western blot结果、β-半乳糖苷酶染色法和免疫荧光检测结果：采用佛手柑内酯后预处理的衰老细胞模型中，pS6，pRb蛋白表达降低，β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数和免疫荧光pS6阳性细胞数减少，pAmpk，Beclin-1，LC3-Ⅱ蛋白表达升高(P<0.05)；②结果说明，佛手柑内酯预处理对双氧水诱导的人脐静脉内皮细胞有一定抗衰老作用。
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自噬相关蛋白Atg5和LC3在婴幼儿血管瘤中的表达
目的研究自噬相关蛋白在婴幼儿血管瘤中的表达,初探自噬在婴幼儿血管瘤发生发展中的作用.方法根据患儿临床表现判断其瘤体处于增殖期还是消退期;将石蜡包埋的婴幼儿血管瘤(IH)标本经HE染色后,于光学显微镜下观察不同时期IH内血管内皮细胞的增生程度、形态;切片经TUNEL法染色后,根据标记凋亡细胞计数比较不同时期IH凋亡率差异;免疫组化染色观察不同时期IH中Atg5的表达水平差异;免疫荧光标记法分析不同时期IH中LC3-Ⅱ的表达水平变化.结果Tunel凋亡检测显示,消退期IH细胞凋亡率明显高于增殖期IH(P＜0.01);免疫组化结果显示,增殖期IH中Atg5的表达水平高于消退期IH(P＜0.01);免疫荧光显示增殖期IH中的LC3-Ⅱ阳性细胞多于消退期IH.结论消退期IH凋亡细胞比增殖期明显增多;增殖期自噬活性较强,消退期自噬下调;自噬的下调有可能促进增殖期IH向消退期转化.
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盐酸曲美他嗪调控自噬对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的 观察盐酸曲美他嗪(TMZ)在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用,及其与自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3蛋白-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和自噬流的另一个标志物p62的关系,并探讨其作用机制.方法 将54只雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组)、心肌缺血30 min再灌注组(I/R组)、心肌缺血30 min再灌注药物干预组(I/R+TMZ组),每组18只.制备大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型,于即刻、4周、8周后处死大鼠,实时定量PCR和Western blotting检测心肌组织LC3-Ⅱ和p62的表达水平,HE染色观察心肌组织形态改变.结果 与Sham组相比,I/R组大鼠心肌细胞内LC3-Ⅱ和p62的表达水平增高(P＜0.05);与I/R组相比,I/R+TMZ组大鼠心肌细胞内LC3-Ⅱ和p62的表达水平降低(P＜0.05).在第4周时心肌细胞中LC3-Ⅱ和p62的表达水平增高(P＜0.05);在第8周时心肌细胞中LC3-Ⅱ和p62的表达水平降低(P＜0.05).结论 TMZ的干预可能通过调节自噬流对大鼠损伤的心肌起保护作用,并存在一定的时间效应.
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系统性红斑狼疮患者外周血T、B细胞自噬水平及其临床意义
目的：探讨系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus，SLE）患者外周血T、B 淋巴细胞自噬水平及其临床意义。方法：入组就诊前4周内未用药的SLE 患者68例；用流式细胞术检测23例正常人和68例经激素和免疫抑制剂治疗前后的SLE 患者外周血T、B 淋巴细胞的自噬水平及其变化情况，并分析其与补体C3、SLEDAI 评分和血清Anti－dsDNA 水平的相关性。结果：治疗前SLE 患者T 淋巴细胞自噬水平显著高于正常人，活动组（SLEDAI score≥10）SLE 患者显著高于稳定组（SLEDAI score＜10），且活动组中初发组（即首次确诊）显著高于复发组（P 均＜0．05）。而SLE 患者B 淋巴细胞自噬水平显著低于正常人，活动组SLE 患者显著低于稳定组，且活动组中初发组显著低于复发组（P 均＜0．05）。相关性分析发现，SLE 患者T 淋巴细胞自噬水平与SLEDAI 评分呈正相关（rs ＝0．289，P＜0．05），B 淋巴细胞自噬水平与血清补体C3水平呈正相关（rs ＝0．371，P＜0．01）。经激素和免疫抑制剂治疗5 d 后，SLE 患者预后良好组（SLEDAI 降低≥4分）的T 淋巴细胞自噬水平即可显著降低（P＜0．05）；治疗3 d 后，SLE 患者预后良好组的B 淋巴细胞自噬水平即可显著升高（P＜0．05）；预后不良组治疗前后T、B 淋巴细胞的自噬水平变化无统计学意义。结论：SLE 患者外周血T、B 淋巴细胞自噬水平异常，其变化与疾病活动度相关，有望作为疾病活动度指标和潜在的临床治疗靶标。
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自噬相关基因Atg4 B及LC3－Ⅱ在肌萎缩侧索硬化症转基因鼠海马中的表达及意义
目的：观察自噬相关基因Atg4B及LC3－Ⅱ在肌萎缩侧索硬化症（ALS）转基因鼠海马组织中的表达变化，探讨细胞自噬机制在ALS发病中的作用及意义。方法选择SOD1－G93A转基因鼠进行试验，分别于发病早、中、晚期，通过 RT－PCR、免疫荧光检测小鼠海马组织中 Atg4B、LC3－Ⅱ在mRNA、蛋白水平的表达及变化。结果与野生型鼠相比较，转基因鼠的 Atg4 B在 mRNA及蛋白水平表达均下调；LC3－Ⅱ在蛋白水平表达上调，在mRNA水平变化不明显。结论自噬相关基因Atg4B及LC3－Ⅱ参与了ALS发病，ALS海马组织的病变与自噬异常有关。
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Beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠再灌注中的表达及意义
目的 研究自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠脑缺血再灌注海马中的表达及意义.方法 根据Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,将实验动物随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,缺血后处理组再按不同缺血后处理时间分为15 s、30 s、1 min 3个亚组.缺血2h再灌注24h后用免疫组织化学法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达情况,透射电镜观察神经细胞中自噬和溶酶体的激活以及细胞超微结构的变化.结果 与缺血再灌注组相比,缺血后处理组神经行为学评分明显降低(P＜0.05),脑梗死体积明显减小(P＜0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达细胞数明显增加(P＜0.01),自噬体形成和溶酶体激活量增加;缺血30 s亚组相比较15 s和1 min亚组上述指标(神经行为学评分除外)(P＞0.05),差异亦有显著性(P＜0.01).结论 脑缺血后处理的抗缺血再灌注损伤作用可能与上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达有关.
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柴胡皂苷 d诱导肝癌细胞株 HepG2发生自噬的研究
目的：研究柴胡皂苷d诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬并对其产生的影响。方法体外培养肝癌细胞株HepG2，用不同浓度的柴胡皂苷d（5、10、25、50μmol／L）作用于HepG2细胞，MTT法检测细胞增殖，Western blot法检测HepG2细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（ LC3Ⅱ）的表达，并用单丹磺酰尸胺（ MDC）染色在激光共聚焦显微镜下观察HepG2细胞内自噬体的形成情况。结果柴胡皂苷d可显著抑制肝癌HepG2细胞增殖，Western blot结果显示柴胡皂苷d处理后LC3－Ⅱ表达增多且呈剂量依赖关系，柴胡皂苷d（25μmol／L组）在24h时间段激光共聚焦显微镜下观察到自噬小体形成。结论柴胡皂苷d可抑制人肝癌HepG2细胞生长，其机制可能为上调LC3－Ⅱ表达并诱导自噬有关。
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五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响
目的 明确五味温通除痹胶囊(桂枝、茯苓、淫羊藿,等)对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响,探讨其防治类风湿关节炎的可能机制.方法 雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、五味温通除痹胶囊(0.80、1.60、3.20 g/kg)组、阳性药雷公藤多苷片(40 mg/kg)组,每组10只.除正常组外,采用弗氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎大鼠模型.致炎后第12天灌胃给药,连续12 d.实验结束后,取非致炎侧踝关节,HE染色观察病理学改变,实时定量荧光PCR测定滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ mRNA的表达,免疫荧光组织化学染色和Western blot法检测滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达.结果 与模型组相比,五味温通除痹胶囊(1.60、3.20 g/kg)不仅可减轻佐剂性关节炎大鼠关节病理损伤程度,还可显著升高Beclin-1、LC3-ⅡmRNA和蛋白的表达水平.结论 五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与促进细胞自噬,减少滑膜细胞的过度增殖,从而减轻关节软骨损伤有关.
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SP600125对蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经细胞自噬及神经细胞丢失的影响
目的 适度自噬有利于提高神经细胞的存活率;而自噬过度又会引起细胞的调亡.文中旨在探讨SP600125对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马区神经细胞自噬及神经细胞丢失的影响. 方法 将健康雄性清洁级SD大鼠40只按随机化数字表法分为假手术组、模型组、二甲基亚砜(DMSO组)、SP600125组,每组10只.模型组、DMSO组和SP600125组应用血管内穿刺法制成大鼠SAH模型.采用3-0缝合线引入到右颈外动脉,通过颈内动脉推进刺破大脑前动脉和大脑中动脉分叉处,建SAH模型.假手术组除不刺破血管,其余操作均与模型组一致.SP600125组于造模前30min,利用脑立体定位仪行侧脑室注射3μg/μL SP600125溶液10μL.假手术组和模型组均注射等体积等渗盐水,DMSO组注射等量的DMSO.24h处死,HE染色观察各组海马区神经元形态及数量;免疫组化染色及Western blot法对p-JNK蛋白以及自噬标志物Beclin-1和LC3-Ⅱ进行定性定量检测. 结果 HE结果显示,与假手术组比较,模型组海马区神经元排列紊乱、细胞多呈多边形、数量明显减少;与模型组比较,SP600125组海马区神经元损伤程度有所减轻、细胞明显增多.与假手术组大鼠海马区Beclin-1、LC3-Ⅱ、p-JNK蛋白平均光密度值(1.56±0.28、1.60±0.30、1.58±0.32)比较,模型组(14.66±4.40、12.62±3.46、12.82±3.68)、DMSO组(13.85±3.85、11.59±4.52、13.03±3.53)和SP600125组(9.86±3.14、6.78±2.56、5.60±2.42)明显升高(P<0.05);SP600125组较模型组明显降低(P<0.05).与假手术组大鼠海马区Beclin-1 、LC3-Ⅱ、p-JNK蛋白表达(0.136±0.014、0.126±0.012、0.102±0.009)比较,模型组(0.474±0.122、0.668±0.130、0.496±0.124)、DMSO组(0.432±0.102、0.628±0.113、0.416±0.094)和SP600125组(0.264±0.106、0.332±0.113、0.219±0.104)明显升高(P<0.05);而SP600125组较模型组明显降低(P<0.05). 结论 SP600125对SAH后神经元细胞具有保护作用,其机制可能与SP600125通过抑制JNK信号通路的活性使自噬适度激活有关.
关键词： 蛛网膜下腔出血 LC3-Ⅱ Beclin-1 自噬 c-JunN末端激酶 -
LC3-Ⅱ和Beclin1在糖尿病脑缺血后处理大鼠海马CA1区表达及意义
目的 糖尿病会使毒性物质在脑内蓄积、内源性保护性物质生成减少以及重要蛋白表达或活性改变.探讨糖尿病对脑缺血后处理脑保护作用的影响及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1在其中所发挥的作用. 方法 将80只雄性SD大鼠随机数字表法分为假手术组、全脑缺血再灌注组、脑缺血后处理组、糖尿病脑缺血后处理组,每组20只.脑缺血后处理组大鼠即采用改良Pulsinelli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注大鼠模型,恢复再灌注前即刻给予再灌注15s/缺血15s,重复3次.糖尿病脑缺血后处理组组大鼠即采用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,剩余同脑缺血后处理模型.造模成功后1、6、24、48、72h光镜下观察海马CA1区神经元细胞形态变化,免疫组化法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达的变化.比较脑缺血后处理对血糖正常大鼠与糖尿病大鼠海马CA1区LC3-Ⅱ、Beclin1表达的影响. 结果 HE染色结果显示,与假手术组比较,其他3组大鼠海马CA1区神经元细胞结构破坏,各时间点存活神经元细胞数量下降(P＜0.05);与脑缺血再灌注组比较,脑缺血后处理组、糖尿病脑缺血后处理组大鼠海马CA1区神经元细胞结构损伤减轻,各时间点存活神经元细胞数量明显增多(P＜0.05);与脑缺血后处理组比较,糖尿病脑缺血后处理组大鼠海马CA1区神经元细胞结构损伤加重,缺血再灌注1、6、24、48、72h存活神经元细胞数量明显下降[(124.24±2.63)/HPvs (104.27 ±2.18)/HP,(117.80±3.37)/HP vs(95.13±4.22)/HP,(106.28 ±2.15)/HP vs(82.84±3.31)/HP,(92.20±4.61)/HP vs(68.11±2.45)/HP,(71.14±3.94)/HP vs(60.99 ±2.11)/HP,P＜0.05].免疫组化染色结果显示,与假手术组比较,其他3组大鼠各时间点海马CA1区LC3-Ⅱ、Beclin1表达增加(表达变化为1、6、24h表达量逐渐上升,24 h表达到高峰,48、72 h表达量逐渐下降),与脑缺血再灌注组比较,脑缺血后处理组、糖尿病脑缺血后处理组大鼠各时间点海马CA1区LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达明显增加(P＜0.05);与脑缺血后处理组比较,糖尿病脑缺血后处理组大鼠组缺血再灌注1、6、24、48、72 h海马CA1区LC3-Ⅱ表达明显下降[(16.45 ±0.24)/HP vs(12.33±0.16)/HP,(24.88±0.45)/HP vs(19.70±0.61)/HP,(36.40±0.47)/HP vs(30.93±0.78)/HP,(31.36±0.59)/HP vs(25.78 ±0.80)/HP,(27.59 ±0.65)/HP vs(22.21 ±0.21)/HP,P＜0.05]、Beclin1蛋白表达明显下降[(14.60±0.43)/HP vs (9.42±0.34)/HP,(20.28±0.45)/HP vs(15.70±0.61)/HP,(30.40±0.47)/HP vs(24.93±0.78)/HP,(26.56 ±0.69)/HP vs(21.78 ±0.80)/HP,(23.89 ±0.38)/HP vs(18.21±0.21)/HP,P＜0.05]. 结论 糖尿病弱化了脑缺血后处理的脑保护效应,其机制可能与下调LC3-Ⅱ、Beclin1表达有关.
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自噬在肾间质纤维化小鼠中的表达趋势
目的:观察肾间质纤维化单侧输尿管梗阻模型(UUO)术后不同时间点自噬的表达趋势.方法:32只清洁级健康雄性ICR小鼠随机分组:假手术(Sham)组、UUO模型(UUO)组,分别在UUO术后3、7、14 d处死小鼠,假手术组7 d处死,每组小鼠8只.留取血清检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),肾组织行HE和Masson染色,观察光镜病理结果,电镜超微结构观察自噬体的形成,Westernblot检测肾组织LC3蛋白和P62蛋白的表达.结果:UUO术后梗阻侧肾脏皮质变薄,小管萎缩,间质纤维化,单个核细胞浸润,肾小球无明显病变,病理变化以UUO术后14 d突出.与Sham组相比,LC3-Ⅱ蛋白含量从3 d开始逐渐增高,7 d时达峰值,14 d时下降;而P62与LC3-Ⅱ相反,3 d开始下降,7 d达低值,14 d又逐渐恢复,表明自噬在7d这个时间点表达显著.电镜显示UUO术后7 d出现自噬小体和吞噬泡现象.结论:UUO术后自噬的表达有一定的时间依赖性,在7d时表达显著,自噬与病理严重程度不平行.
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葫芦素E抑制HeLa细胞mTORC1的活性并诱导细胞自噬
目的：研究葫芦素E诱导HeLa细胞发生细胞自噬的作用机制。方法改良MTT法测定葫芦素E对HeLa细胞增殖的影响，免疫印迹法检测mTORC1下游信号蛋白的磷酸化以及自噬相关蛋白的表达。结果葫芦素 E对 HeLa细胞增殖有剂量依赖性抑制作用，其24 h 的 IC50为4.01μmol·L-1。通过对mTORC1底物磷酸化水平的检测发现，葫芦素E对p70S6K的磷酸化(活化)作用有明显的剂量和时间依赖性抑制作用。同时，葫芦素E增加自噬小体标志物LC3-Ⅱ的表达，氯喹能进一步提高其水平；葫芦素E还能降低p62/SQSTM1的水平，表明诱导了完整的细胞自噬过程。细胞自噬的诱导与mTORC1下游底物ULK1 S757磷酸化水平的下降有正相关性。结论葫芦素 E 可能通过抑制mTORC1活性而诱导细胞发生自噬作用。
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BNIP3影响自噬水平对胃癌的影响
目的：探讨 BNIP3蛋白表达在肿瘤低氧环境中对胃癌的作用及探讨其影响自噬水平的机制。方法胃癌手术标本取材18例，分别通过免疫组化和免疫印迹检测 BNIP3和LC3的蛋白表达水平在癌组织和正常组织中的差异；培养中分化的人胃癌细胞系 SGC-7901，在氯化钴（CoCl2）引发的低氧环境中，观察 BNIP3 siRNA 干扰后对自噬相关蛋白 LC3的表达变化，以及使用自噬阻滞剂3-甲基腺嘌呤（3-methylade-nine，3-MA）后对细胞活力的影响。结果免疫组化和免疫印迹检测中均可见肿瘤组织 BNIP3蛋白表达量较正常组织增高，同时肿瘤组织中 LC3-II 表达水平也明显上调。BNIP3 siRNA 使胃癌细胞 SGC-7901中 LC3-Ⅱ蛋白表达下调，而且自噬水平降低后，在低氧环境中细胞活力明显提高。结论BNIP3蛋白能够通过调控自噬水平对胃癌细胞在乏氧环境中细胞死亡发挥重要的作用。
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自噬相关蛋白 LC3-Ⅱ在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义
目的：本研究检测微管轻链Ⅰ蛋白3-Ⅱ型(LC3-Ⅱ)在不同卵巢肿瘤组织中的表达情况,探讨其与浆液性卵巢癌及粘液性卵巢癌发生、发展的相关性和意义。方法选取204例上皮性卵巢肿瘤标本,其中,卵巢浆液性囊腺瘤46例,交界性浆液性肿瘤28例,浆液性囊腺癌40例,黏液性囊腺瘤32例,交界性黏液性囊腺瘤30例,黏液性囊腺癌28例,另选取正常卵巢上皮组织28例作为对照。使用 SP 法检测正常卵巢上皮组织、上皮性卵巢肿瘤组织中 LC3-Ⅱ的表达,并结合浆液性癌、黏液性癌临床病理因素进行分析。结果①正常卵巢上皮中 LC3-Ⅱ无表达,卵巢良性浆液性囊腺瘤、交界性浆液性肿瘤及浆液性癌中 LC3-Ⅱ的阳性率分别为4．5%、71．0%、95．0%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中 LC3-Ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(P <0．01)。卵巢良性黏液性囊腺瘤、交界性黏液性肿瘤及黏液性癌中 LC3-Ⅱ的阳性率分别为6．7%、66．7%、92．9%,交界性浆液性肿瘤和浆液性癌中 LC3-Ⅱ的表达明显高于良性浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(P <0．01)；②在40例卵巢浆液性癌、28例卵巢黏液性癌中,LC3-Ⅱ表达与患者年龄、FIGO 分期及病理学分级等临床病理特征均无关。结论 LC3-Ⅱ在卵巢上皮性交界性肿瘤、癌中表达增高,自噬活性增强,可能与卵巢上皮性恶性肿瘤的进展有关。
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染料木素磺酸钠对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响
目的:初步探讨染料木素磺酸钠是否对大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的自噬起调控作用.方法:采用MCAO动物模型和谷氨酸损伤的原代培养大鼠皮层神经元模型,给予GSS处理后,分别提取大脑皮层半暗带区组织或细胞总蛋白样本,运用Western blot方法测定样本中Beclin1、p-Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白的表达情况.结果:与对照组相比,模型组Beclin1磷酸化水平及LC3-Ⅱ蛋白的表达均明显升高,经染料木素磺酸钠治疗后,相应表达量显著下降.结论:染料木素磺酸钠可能通过调控自噬对脑缺血再灌注损伤大鼠起神经保护作用.
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苦参碱诱导肝癌HepG2细胞自噬的作用与机制
目的 探讨苦参碱对肝癌HepG2细胞自噬的作用,进一步研究苦参碱诱导HepG2细胞自噬的机制.方法 将0.0(对照组)、0.4、0.8、1.6 g·L-1苦参碱及0.4 g·L-1苦参碱+10 mmol·L-1自噬特异抑制剂(3-MA)分别作用于肝癌HepG2细胞,构建体外模型.采用免疫印迹法(Western blotting)检测自噬基因LC3-Ⅱ的表达,实时荧光定量PCR(Realtime-PCR)检测自噬基因WIPI1的表达,Annexin V FITC-PI流式细胞术检测HepG2细胞凋亡率,电镜观察HepG2细胞自噬体变化与凋亡情况.结果 0.4、0.8、1.6 g·L-1苦参碱作用的HepG2细胞LC3-Ⅱ表达相比对照组均显著增加(P<0.05),其中0.4 g·L-1苦参碱作用的HepG2细胞LC3-Ⅱ表达水平高;0.4 g·L-1苦参碱作用的HepG2细胞自噬体、WIPI1 mRNA表达水平较对照组明显增加(P<0.05).0.4 g·L-1苦参碱联合3-MA作用的HepG2细胞凋亡率较单纯0.4 g·L-1苦参碱作用的凋亡率显著增加(P<0.05).结论 苦参碱诱导HepG2自噬且减少细胞凋亡,与WIPI1的表达相关.自噬抑制剂可抑制苦参碱诱导的自噬,促进肝癌细胞凋亡,二者联合可成为临床治疗肝癌的新措施.
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HIF-1α介导缺氧环境下肝癌Bel-7402细胞自噬的激活
目的:探讨缺氧环境肝癌细胞自噬的激活与HIF-1 α的关系.方法:将肝癌Bel-7402细胞分为常氧组、缺氧+Con shRNA组和缺氧+HIF-1 α shRNA组,将慢病毒介导的HIF-1 α shRNA转染细胞,继续培养36 h,Western blot检测HIF-1 α蛋白表达;吖啶橙(AO)荧光染色检测自噬溶酶体的形成,丹酰尸胺(MDC)荧光染色检测自噬小体的形成,并应用流式细胞技术定量自噬溶酶体或者自噬小体的荧光强度;Western blot检测自噬激活的标志蛋白LC3-Ⅱ表达.结果:慢病毒介导的HIF-1 αshRNA降低了缺氧诱导的肝癌细胞中HIF-1 α蛋白的生成(缺氧+HIF-1 α shRNA组vs缺氧+ConshRNA组,P＜0.01),HIF-1 α降低后,细胞中自噬小体及自噬溶酶体明显减少(缺氧+HIF-1 αshRNA组vs缺氧+Con shRNA组,P＜0.01),自噬激活标志蛋白LC3-Ⅱ明显减少(缺氧+HIF-1 αshRNA组vs Con shRNA组,P＜ 0.01).结论:缺氧环境下HIF-1 α介导了肝癌细胞自噬的激活.
