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基于药物体系质量评价模式的白芷质量表征关联分析研究
目的：应用药物体系质量评价模式,对基于药物体系的白芷中各有效指标性成分进行含量测定并进行关联分析,全面表征与评价白芷质量。方法采用HPLC-PDA法对白芷中绿原酸、花椒毒酚、佛手柑内酯、欧前胡素、异欧前胡素等5种有效指标性成分的含量进行同时测定。结果基于药物体系质量评价模式,对白芷中有效指标性成分含量及其相对比值进行质量表征,同时将不同批次饮片与经过药效验证的基准批次饮片进行关联度分析。结果表明,批次2、3、13、17、21中有效指标性成分含量总体高于基准批次饮片20,批次1、5、9、11、22、24中有效指标性成分含量与批次20接近,批次5、11、1、24、9、3、13、19与批次20质量关联度较高。综合质量表征及关联分析结果,批次3、13、2、17、21、1、5、9、11、22、24质量优良度位于前列。结论基于药物体系质量评价模式,以具有确切药效的白芷饮片为基准,对白芷质量进行关联分析研究,可全面地评价白芷饮片质量,优选白芷资源。
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细胞膜色谱法与液相色谱-质谱联用筛选佛手的活性成分
目的从佛手中筛选对主动脉血管有舒张作用的有效成分。方法采用大鼠血管平滑肌细胞膜色谱模型(VSM/CMC)筛选，液相色谱-质谱(LC/MS)离线分析，并结合离体药理实验确定佛手舒张血管的有效成分。结果佛手柑内酯是佛手中作用于血管的活性成分，药理实验结果表明其具有舒张血管作用，化合物在VSM/CMC的保留特性和其药理作用有显著相关性。结论 VSM/CMC 模型可以反映化合物与细胞膜及膜蛋白(包括受体)的相互作用；VSM/CMC 和LC/MS技术联用，为从天然产物中快速寻找新的活性成分提供了途径。
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佛手柑内酯对鼻咽癌细胞周期的影响
目的 探讨佛手柑内酯对鼻咽癌细胞周期的影响及可能的作用机制.方法 利用CCK-8法测定佛手柑内酯对鼻咽癌细胞CNE-2和HONE-1的体外抑制活性,并绘制1、10、100 μmol·L-13个浓度的佛手柑内酯对2种鼻咽癌细胞作用后的生长曲线,然后利用PI染料法检测各组细胞的周期分布.利用Western blotting检测CDK4、CDK6、CDK2、Cyclin D1和Cyclin E2的蛋白表达量,并检测各组β-catenin、GSK-3β及GSK-3β的S9位点蛋白磷酸化水平.结果 佛手柑内酯对鼻咽癌细胞CNE-2和HONE-1具有较显著的体外抑制活性,呈明显的浓度依赖性(CNE-2:r=0.926,P＜0.05;HONE-I:r=0.959,P＜0.05)及时间依赖性(CNE-2:r =0.991,P＜0.05;HONE-1:r =0.963,P＜0.05),随着佛手柑内酯浓度的增加,两鼻咽癌细胞处于G0-G1期的细胞数目比例上升,S期与G2-M的比例下降.相对于对照组,佛手柑内酯能显著降低实验组细胞CDK4、CDK6、CDK2、Cyclin D1、Cyclin E2和β-catenin的蛋白表达量,但对GSK-3β的蛋白表达水平无显著影响,对GSK-3β的S9位点蛋白磷酸化水平的影响也无明显规律.结论 佛手柑内酯能通过阻滞鼻咽癌细胞周期运行抑制其体外增殖能力,这一过程可能与部分周期蛋白的下调及wnt/β-catenin信号通路的被抑制有关.
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明党参根皮化学成分研究
目的 研究明党参Changium smyrnioides根皮的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、反相柱色谱以及LH-20凝胶柱色谱等多种技术进行分离纯化,并根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定.结果 从明党参根皮95％乙醇提取物中分离得到了15个化合物,分别鉴定为欧前胡素(1)、珊瑚菜内酯(2)、花椒毒酚(3)、5-羟基8-甲氧基补骨脂素(4)、香草酸(5)、别欧前胡素(6)、补骨脂素(7)、佛手柑内酯(8)、5-甲氧基-8-O-β-D-葡萄糖基补骨脂素(9)、异茴芹内酯(10)、咖啡酸(11)、橙黄胡椒酰胺乙酸酯(12)、vaginatin (13)、β-谷甾醇(14)、琥珀酸(15).结论 化合物6～13为首次从党参属植物中分离得到.
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白芷中呋喃香豆素类成分对葛根素、芍药苷、长春新碱肠道转运的影响
目的 考察白芷中呋喃香豆素类成分对难吸收药物葛根素、芍药苷、长春新碱吸收的影响,探讨白芷中呋喃香豆素类成分对不同结构药物吸收的影响规律.方法 采用Caco-2细胞模型,以各药物透过Caco-2细胞单层的表观渗透系数(Papp)为指标,分别考察白芷中呋喃香豆素类成分(欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯、氧化前胡素)对葛根素、芍药苷、长春新碱透过Caco-2细胞单层的影响.结果 4个呋喃香豆素类成分对3种单体成分转运的影响不同,欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素能显著促进葛根素透过Caco-2细胞单层转运(P＜0.05、0.01),佛手柑内酯对葛根素透过Caco-2细胞单层转运无明显影响;欧前胡素、佛手柑内酯对芍药苷透过Caco-2细胞单层转运无明显影响,但异欧前胡素、氧化前胡素显著抑制芍药苷透过Caco-2细胞单层转运(P＜0.05、0.01);欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素能显著促进长春新碱透过Caco-2细胞单层转运(P＜0.05、0.01),佛手柑内酯能显著抑制长春新碱透过Caco-2细胞单层转运(P＜0.05).结论 不同呋喃香豆素对同一药物的肠道转运的影响不同,虽然同为呋喃香豆素,对药物的转运可表现为完全相反的作用.同一呋喃香豆素与不同药物联合使用,其对联合用药物肠道转运的影响也不相同.
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白芷香豆素类化合物与P-糖蛋白体外亲和作用研究
目的 研究白芷香豆素类化合物(欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯、氧化前胡素)在体外对P-糖蛋白(P-gp)三磷酸腺苷(ATP)酶活性的影响,进而探讨白芷香豆素类成分影响P-gp介导药物转运的机制.方法 采用ATP酶活性测试法判断白芷香豆素类化合物是否为P-gp的底物.结果 欧前胡素和氧化前胡素各质量浓度组平均荧光强度值(ARLUTC)均大于基础平均荧光强度值(ARLUbasa1);异欧前胡素中、低质量浓度组及佛手柑内酯高、低质量浓度组ARLUTC小于ARkUbasal.结论 欧前胡素和氧化前胡素为非浓度依赖的P-gp ATP酶抑制剂,异欧前胡素、佛手柑内酯在低质量浓度时可抑制ATP酶活性,对P-gp具有抑制作用;在高质量浓度时可诱导ATP酶活性,对P-gp具有诱导作用.
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五指毛桃的质量标准研究
目的 控制五指毛桃Fici Hirtae Radix药材质量,制订药材质量标准.方法 通过植物形态、产地、历史沿革、功效、近年研究结果等的全面查考,修正《中国药典》1977年版五指毛桃药材的基原错误;采用性状、显微、薄层鉴别不同来源的商品药材;采用HPLC法测定药材中指标成分的量;按《中国药典》2010年版附录方法检测各检查项.结果 五指毛桃药材基原并非极简榕Ficus simplicissima Lour.,而是粗叶榕Ficus hirta Vahl.20批五指毛桃商品药材中除规定药用部位粗叶榕的根外,有约40％非药用部位的茎枝样品;不同部位性状、显微特征及薄层色谱区别明显.药材中补骨脂素量为0.00848％～0.150％,佛手柑内酯为0.005 87％～0.026 3％,根类样品2种指标成分量显著高于非药用部位的茎枝样品.药材水分量为4.73％～8.27％,总灰分为2.58％～4.37％,酸不溶性灰分为0.054％～0.710％,醇溶性浸出物为6.23％～8.34％.结论 修正《中国药典》1977年版五指毛桃药材基原错误,规范其药用部位为粗叶榕的根.建立的五指毛桃药材的质量标准可全面、有效地控制药材质量,为临床合理、有效、安全用药提供参考.
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硅胶柱色谱-高速逆流色谱法分离纯化羌活中佛手柑内酯
目的 以羌活的根和根茎为原料,建立硅胶柱色谱-高速逆流色谱(HSCCC)法制备分离羌活中佛手柑内酯的方法.方法 羌活粗提物先经过硅胶柱色谱初步分离,富集目标化合物;组分Q5再经过HSCCC分离,以正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水(5∶5∶4∶5)为溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相;经气-质及核磁共振氢谱、碳谱鉴定化合物的结构.结果 经过HSCCC分离后,从300 mg Q5样品中一次性分离得到佛手柑内酯37.6 mg,经HPLC检测其质量分数达到99.1％.结论 该方法操作简便、高效,为制备高纯度的佛手柑内酯提供了一条新途径.
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佛手柑内酯对双氧水诱导人脐静脉内皮细胞衰老的影响
背景：有效的中医药治疗可以缓解内皮细胞的衰老，传统的中医药提取较困难，佛手柑内酯提纯简练，价格经济，关于佛手柑内酯在延缓内皮细胞衰老的研究中尚未见报道。目的：观察佛手柑内酯对双氧水诱导人脐静脉内皮细胞衰老的影响。方法：将人脐静脉内皮细胞采用过氧化氢处理建立衰老细胞模型，并用0.1，1，10μmol/L佛手柑内酯预处理。通过Western blot法检测各处理组pRb，pAmpk，pS6，LC3-Ⅱ，Beclin-1蛋白，β-半乳糖甘酶染色确定各组衰老细胞数，细胞免疫荧光检测pS6阳性细胞数。结果与结论：①Western blot结果、β-半乳糖苷酶染色法和免疫荧光检测结果：采用佛手柑内酯后预处理的衰老细胞模型中，pS6，pRb蛋白表达降低，β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数和免疫荧光pS6阳性细胞数减少，pAmpk，Beclin-1，LC3-Ⅱ蛋白表达升高(P<0.05)；②结果说明，佛手柑内酯预处理对双氧水诱导的人脐静脉内皮细胞有一定抗衰老作用。
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HPLC梯度洗脱法同时测定壮血药酒中4种成分的含量
目的：建立同时测定壮血药酒中新北美圣草苷、柚皮苷、补骨脂素和佛手柑内酯4个主要成分含量的高效液相色谱检测方法。方法采用依利特C18柱；流动相A为乙腈-甲醇(1∶2),流动相B为0．4%冰醋酸溶液,梯度洗脱；流速为1．1 mL/min；柱温为25℃；检测波长λ1=283 nm (新北美圣草苷和柚皮苷),λ2=222 nm (补骨脂素和佛手柑内酯)。结果在优化的色谱条件下,新北美圣草苷、柚皮苷、补骨脂素和佛手柑内酯的线性范围分别为6．52~130．40μg/mL ( r =0．9997)、6．61~132．20μg/mL ( r =0．9993)、6．75~135．00μg/mL ( r =0．9996)、4．05~81．00μg/mL ( r =0．9999)；4种成分的平均加样回收率( n =6)分别为96．94%、99．14%、98．09%、96．87%,RSD分别为0．75%、0．52%、1．18%、1．02%。结论该方法简便快捷,回收率、重复性良好,可用于壮血药酒中新北美圣草苷、柚皮苷、补骨脂素和佛手柑内酯的含量分析。
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LC-MS/MS技术同时测定滋心阴口服液中6种化学成分
目的:建立HPLC-ESI-MS方法同时测定滋心阴口服液(北沙参、赤芍、麦冬、三七)中6种化学成分.方法:采用多反应监测(MRM)模式同时监测4种香豆素类和2种苷类成分.ESI源,正、负离子同时检测,源喷射电压分别为5 500 V和-4 500 V,离子源温度为650℃.6种被测成分的监测离子对分别为479.1/121.0(芍药内酯苷)、525.2/449.1(芍药苷)、217.1/202.1(花椒毒素)、187.2/131.1(补骨脂素)、247.1/217.0(异茴芹内酯)和217.1/202.1(佛手柑内酯).色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱,流动相为甲醇-0.1‰甲酸,梯度洗脱,分析时间7.5 min.采用所建立的方法对4批滋心阴口服液进行了测定.结果:6种化学成分的峰面积和浓度在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,平均加样回收率为91.7%～108.7%,精密度RSD为1.1%～3.0%.结论:本法简便、快速、灵敏度高、专属性好,可用于滋心阴口服液中芍药内酯苷、芍药苷、花椒毒素、补骨脂素、异茴芹内酯和佛手柑内酯的含量测定.除芍药苷外,其它5种成分均为滋心阴口服液中首次测定.
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伊犁贝母鳞茎中非生物碱化学成分的研究
目的 研究伊犁贝母鳞茎的非生物碱类化学成分.方法 对伊犁贝母鳞茎的乙醇提取物采用正、反相硅胶柱层析及Sephadex LH-20层析等方法进行分离纯化,通过理化及光谱学方法鉴定化合物的结构.结果 分离得到7个非生物碱成分,分别为蛇床子素(1)、佛手柑内酯(2)、花椒毒内酯(3)、6,9,10-三羟基-7-十八烯酸(4)、5α,6β-二羟基胡萝卜苷(5)、胡萝卜苷(6)和β-谷甾醇(7).结论 化合物1～4为首次从贝母属植物中分离得到,化合物5～7为首次从该植物中分离得到,这也是首次从该属植物中分离得到香豆素类成分.
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蛇床子药材特征成分谱的RP-HPLC分析
目的:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法对10批不同来源蛇床子药材活性成分进行分离分析,建立评价其质量的特征成分谱.方法:采用十八烷基硅烷键合硅胶柱 DiamonsilTM C18色谱柱(150 mm × 4.6 mm, 5 μm),流动相为乙腈-10 mM 醋酸铵水溶液(用醋酸调节pH至4.0,体积比为5050);紫外检测波长320 nm.结果:以安定为内标,佛手柑内酯、欧前胡素、蛇床子素的回归方程分别为Y=0.068 5X-0.052 2,Y=0.020 4X+0.023 2,Y=0.057 9X-0.105 8;线性范围分别是4~100 μg/mL,4~100 μg/mL,10~200 μg/mL;平均回收率和RSD分别为98.1%、92.5%、98.4%和4.58%、5.73%、4.51%.结论: 本方法简便快速,回收率及重现性良好,适用于蛇床子药材中香豆素类化合物的优化分离及佛手柑内酯、欧前胡素和蛇床子素的定量分析,并为蛇床子药材的质量控制与道地性研究提供了简便的方法.
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HPLC同时测定西归中阿魏酸和佛手柑内酯的含量
目的 建立同时测定西归药材中阿魏酸和佛手柑内酯含量的方法.方法 采用色谱柱为PhenomeneX Gemini-NX C18110A柱(4.6 mm×250 mm,5μm)；流动相为甲醇-0.05％磷酸水溶液,梯度洗脱；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为322 nm;柱温为30℃.结果 阿魏酸在0.020 1～0.603 μg、佛手柑内酯在0.020 3～0.609 μg内线性关系良好；阿魏酸和佛手柑内酯的平均回收率分别为96.8％(RSD=2.0％)和98.7％(RSD=2.9％).结论 本方法首次建立了同时测定西归中阿魏酸和佛手柑内酯的HPLC分析方法,结果准确,重复性好,可作为西归药材的质量评价方法.
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佛手柑内酯抑制p62/NF-κB信号轴增强顺铂对肝癌杀伤的影响
目的 观察佛手柑内酯与顺铂联用对肝癌细胞的凋亡及p62/NF-KB信号轴的影响.方法 利用低浓度(1 mol/ L)佛手柑内酯和1 mol/L顺铂联用或单用,处理体外培养的肝癌细胞HepG2和Bel-7402,观察两肝癌细胞的凋亡核形态和Annexin V阳性的凋亡细胞群比例.进一步利用荧光定量聚合酶链反应检测两肝癌细胞的抗凋亡相关基因表达变化,利用荧光素酶报告基因检测NF-kB转录因子的转录活性,利用Western blot法检测细胞内p65及p62的表达水平.结果 低浓度佛手柑内酯与顺铂联用能显著诱导HepG2和 Bel-7402的凋亡核形态和凋亡细胞群比例,两肝癌细胞的凋亡核形态比单用顺铂组分别增加1. 99倍和2. 00倍(P< 0.05),凋亡细胞群比例比单用顺铂组分别增加1.86倍和 2.00倍(P<0.05).低浓度佛手柑内酯与顺铂联用能不同程度降低抗凋亡基因BCL2、BCL2L1、XIAP和BIRC5的表达,并抑制NF-kB转录因子的转录活性和细胞内p65及p62的表达水平.结论 低浓度佛手柑内酯能增强顺铂对肝癌细胞凋亡的诱导,其可能原因与抑制p62/NF-KB信号轴相关.
关键词： 佛手柑内酯 肝癌 顺铂 p62/NF-KB信号轴 -
中药蛇床子的药理作用研究进展
中药蛇床子为伞形科蛇床属植物蛇床Cnidium monnieri(L.)Cusson的果实,具有温肾助阳、祛风、燥湿、杀虫之功效.临床上以外用为主,治疗滴虫性阴道炎、急性渗出性皮肤病等病症.蛇床子主要含蛇床子素、佛手柑内酯、异虎耳草素、花椒毒酚、欧芹属素乙等生物活性的香豆素类化合物及油酸、亚油酸、挥发油,此外含有Cu、Fe、Zn、Mn、Sr、Ca、Mg等微量元素.早期药理研究文献报道[1],中药蛇床子有抗真菌、抗病毒、驱蛔虫、抗滴虫及类性激素样作用.近十余年来,有关蛇床子尤其是蛇床子总香豆素、蛇床子素、花椒毒酚的药理研究获得了重大进展.现结合本教研室完成的有关研究工作作如下综述.
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蛇床子中佛手柑内酯和异虎耳草素含量的高效液相色谱-二级管阵列检测法同时测定
目的 建立同时测定蛇床子中佛手柑内酯和异虎耳草素含量的方法.方法 采用高效液相色谱(HPLC)法对其含量进行测定,色谱柱为Sino Chrom C18 (250mm×4.6mm,5μm,Elite),流动相为甲醇-0.1％醋酸(55∶45),流速1.0ml/min,柱温25℃;二极管阵列检测器(DAD)检测器,检测波长310hm.结果 佛手柑内酯在0.031 5～0.945 μg范围内呈良好的线性关系A=2385C-6.666 (r=0.9999),异虎耳草素在0.029 6～0.888μg范围内呈良好的线性关系A=1711C+1.203(r=0.999 9);平均回收率分别为99.2％和99.1％,相对标准偏差分别为0.91％和0.67％(n=6);在常温下8h内稳定性较好.结论 HPLC-DAD法简便快速,准确,重现性好,结果可靠,可作为蛇床子的质量控制方法.
关键词： 蛇床子 佛手柑内酯 异虎耳草素 高效液相色谱-二级管阵列检测法 -
佛手柑内酯对鼻咽癌细胞凋亡的影响
目的 探讨佛手柑内酯对鼻咽癌细胞凋亡的影响及可能的作用机制.方法 CCK-8法检测佛手柑内酯对鼻咽癌细胞CNE-2和HONE-1体外活性的抑制作用.Annexin V-FITC/PI双染法、JC-1染料法分别检测细胞的凋亡率及线粒体膜电位,并检测Caspase-3的活性水平.实时定量RT-PCR与Westernblot检测BAX与BCL2基因的mRNA水平和蛋白表达量,并检测STAT3蛋白表达量及其Y705位点的磷酸化水平.结果 在10μM和100 μM两个浓度佛手柑内酯作用下,CNE-2和HONE-1细胞凋亡率及Caspase-3活性明显上升(P＜0.05),线粒体膜电位明显下降(P＜0.05);BCL2基因的mRNA及蛋白表达水平降低,BA基因的mRNA及蛋白表达水平升高,STAT3蛋白表达量不变而其Y705位点的磷酸化水平下降.结论 佛手柑内酯能破坏鼻咽癌细胞线粒体功能并诱导其发生凋亡,这一过程可能与下调BCL2基因、上调BA基因及抑制STAT3磷酸化有关.
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高效液相梯度洗脱法同时测定情安喘定片5种成分
目的：采用高效液相梯度洗脱法,同时测定情安喘定片中芸香苷、槲皮苷、补骨脂素、佛手柑内酯和芹菜素含量。方法采用依利特Hypersil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm)；流速：0.9 mL·min-1；以甲醇( A)-0.1％磷酸溶液( B)为流动相进行梯度洗脱；检测波长：芸香苷和槲皮苷为254 nm,补骨脂素、佛手柑内酯和芹菜素为269 nm,柱温为35℃。结果芸香苷、槲皮苷、补骨脂素、佛手柑内酯和芹菜素质量浓度分别在6.06~121.20μg·mL-1(r=0.9999)、5.80~116.00μg·mL-1(r=0.9992)、4.65~93.00μg·mL-1(r=0.9997)、7.10~142.00μg·mL-1(r=0.9995)、6.30~126.00μg·mL-1(r=0.9993)时与其峰面积呈良好的线性关系；芸香苷、槲皮苷、补骨脂素、佛手柑内酯和芹菜素的平均加样回收率分别为99.26％,98.28％,97.12％,98.05％,96.72％,RSD(n=6)分别为0.76％,1.54％,0.64％,0.87％,0.61％。结论该方法是一种快速、灵敏、准确的分析方法,可用于情安喘定片的质量控制。
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HPLC波长切换技术同时测定息喘丸中补骨脂素、佛手柑内酯、去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯的含量
目的：：建立HPLC法同时测定息喘丸中补骨脂素、佛手柑内酯、去甲蟛蜞菊内酯、蟛蜞菊内酯4个有效成分的含量。方法：采用依利特C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm)；以甲醇-乙腈(2∶1)与0.5%冰醋酸溶液为流动相进行梯度洗脱；流速为1.1 ml·min-1；柱温为25℃；检测波长(0~20 min、在222 nm波长下检测补骨脂素和佛手柑内酯；20~40 min、在351 nm波长下检测去甲蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯)。结果：4个有效成分的线性范围分别为：补骨脂素5.380~107.600μg·ml-1( r=0.9995)、佛手柑内酯6.870~137.400μg·ml-1(r=0.9997)、去甲蟛蜞菊内酯4.580~91.600μg·ml-1(r=0.9992)、蟛蜞菊内酯7.300~146.000μg·ml-1(r=0.9999)；平均回收率分别为96.82%、98.81%、99.06%、98.39%,RSD分别为0.77%、1.40%、1.20%、0.80%(n=6)。结论：该方法操作准确稳定、灵敏度高、重复性好,可用于息喘丸中上述4个有效成分的定量测定。
