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基于等基线多波长覆盖融合的蛇床子多成分定量分析方法研究
目的 利用自主研发的全时段多波长融合软件,建立中药蛇床子有效成分的多波长融合指纹图谱,对蛇床子药材进行质量控制.方法 采用高效液相色谱法,Agilent poroshell SB-C18(100 mm×4.6 mm,2.7 μm)色谱柱,流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈,线性梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1;柱温25℃;DAD检测器波长为230、245、322 nm,使用Matlab软件编程,对3个波长下的“.dif”格式数据进行等基线数据多波长覆盖融合.结果 本方法各主要成分色谱峰之间有良好的分离度,佛手柑内酯、欧前胡素、蛇床子素分别在0.067～0.402μg、0.334～2.004 μg、0.799～4.794 μg与峰面积呈良好的线性关系.结论 该方法简便、合理、可靠、重复性好,可用于蛇床子药材的质量评价.
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不同产地、不同栽培品种无花果叶的品质评价研究
目的:建立对不同产地、不同栽培品种无花果叶品质评价的高效液相色谱法.方法:色谱柱Phenomenexhydro ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-水(53:47),检测波长:222 nm,流速:1.0 mL/min,柱温:32℃.结果:不同产地、不同栽培品种无花果叶中补骨脂素和佛手柑内酯的进样量分别在0.0552～0.552 μg、0.0420～0.2520 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为99.30％、98.95％,RSD分别为1.92％、1.18％.结论:不同产地、不同栽培品种无花果叶中补骨脂素和佛手柑内酯的含量均有明显差异.该方法简单、准确、重现性好,可为无花果叶的开发应用、品质评价及质量标准制订提供一定的科学依据.
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抗褐化剂对明党参悬浮细胞生长和次生代谢产物含量的影响
目的:探讨不同抗褐化剂对明党参悬浮细胞数目、发生褐化反应底物酚类及明党参的有效成分香豆素的影响.方法:在轻度褐化的明党参悬浮细胞中添加不同浓度的维生素C(VC)、活性炭(AC)、酸水解酪蛋白(AHC)、硫代硫酸钠(Na2S2O3)以及聚乙烯吡咯烷酮(PVP),利用紫外分光光度法和高效液相色谱法检测酚类、总香豆素及佛手酚、佛手柑内酯含量.结果:低浓度PVP、VC均不同程度促进明党参悬浮细胞的生长;不同抗褐化剂对酚类含量高低影响不同;VC处理后悬浮细胞中总香豆素含量明显增高,其中用2 mg/mL的VC处理后,总香豆素增长率为51.53％,是对照组的4.8倍,将该浓度VC添加到以水杨酸作为诱导子的明党参悬浮培养液中,改善了水杨酸的促进褐化现象,同时佛手酚、佛手柑内酯的含量提高了25.96％、33.33％.结论:VC为本研究中的佳抗褐化剂,能在抑制悬浮细胞褐化的同时,有效地促进细胞生长和次生代谢产物的积累.
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12种香豆素类化合物抑制鼻咽癌活性的筛选
目的 探讨12种香豆素类化合物体外抑制鼻咽癌细胞的活性.方法 利用CCK-8法测定不同浓度的12种香豆素类化合物对鼻咽癌细胞CNE-2和HONE-1体外抑制生长的活性,利用两点法求算对应的半数抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50).随后选定1、10、100 μmol/L浓度的蛇床子素及秦皮乙素分别处理两鼻咽癌细胞,利用CCK-8法绘制5d的生长曲线,并观察其对克隆形成能力的影响.结果 在CNE-2细胞中,蛇床子素、秦皮乙素和佛手柑内酯的IC50分别是(44.8+5.2) μmol/L、(129.6±8.9) μmol/L及(143.7±9.7) μmol/L;在HONE-1细胞中的IC50分别是(38.6±6.3) μmol/L、(62.7+7.0).μmol/L及(73.4±7.2) μmol/L.蛇床子素和秦皮乙素在选定的浓度下均对鼻咽癌细胞的生长曲线产生持续抑制的效果,并能显著抑制鼻咽癌细胞的克隆形成能力(P＜0.01).结论 蛇床子素、秦皮乙素和佛手柑内酯具有具有较为显著的体外抑制鼻咽癌细胞活性.
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HPLC法测定五指毛桃药材中补骨脂素和佛手柑内酯的含量
目的 建立五指毛桃药材中补骨脂素和佛手柑内酯的高效液相色谱测定方法.方法 采用反相高效液相色谱法,Merck-lichrospher RP-18色谱柱(4 mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈-水(35:65),流速为1.0 mL/min,柱温:35℃;检测波长:222 nm.结果 补骨脂素在0.12μg～1.20μg范围内,线性关系良好;佛手柑内酯在0.03μg～0.30μg范围内,线性关系良好;补骨脂素和佛手柑内酯的平均回收率分别为100.9%和99.6%;RSD分别为2.9%和1.9%.结论 首次建立了同时测定五指毛桃药材中补骨脂素和佛手柑内酯的HPLC分析方法,本方法结果准确,重现性好,可作为五指毛桃药材的质量评价方法.
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HPLC法同时测定青娥丸中7种成分的含量
目的:建立同时测定青娥丸中补骨脂素、异补骨脂素、佛手柑内酯、欧前胡素、三甲基补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Kinetex-C18,流动相为甲醇-0.1%乙酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为248 nm,柱温为30℃,进样量为20μL.结果:补骨脂素、异补骨脂素、佛手柑内酯、欧前胡素、三甲基补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮检测质量浓度线性范围分别为1.012~101.2μg/mL(r=0.9999)、1.007~100.7μg/mL(r=0.9997)、1.010~101.0μg/mL(r=0.9999)、1.021~102.1μg/mL(r=0.9999)、1.002~100.2μg/mL(r=0.9996)、1.008~100.8μg/mL(r=0.9999)、1.025~102.5μg/mL(r=0.9998);定量限分别为0.15、0.15、0.30、0.30、0.15、0.30、0.30μg/mL,检测限分别为0.05、0.05、0.10、0.10、0.05、0.10、0.10μg/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;加样回收率分别为95.3%~99.6%(RSD=1.9%,n=6)、96.1%~99.3%(RSD=1.2%,n=6)、95.2%~98.4%(RSD=1.4%,n=6)、95.4%~99.2%(RSD=1.5%,n=6)、96.1%~99.3%(RSD=1.5%,n=6)、95.6%~98.9%(RSD=1.4%,n=6)、95.2%~99.6%(RSD=1.6%,n=6).结论:该方法简便、结果准确,适用于青娥丸中7种成分含量的同时测定.
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蛇床子及其制剂在临床上的新应用
蛇床子为伞形科植物蛇床 Cnidium monnieri （L 。）Cuss 。的干燥成熟果实，其性温、味辛苦，有小毒，归肾经。具有燥湿祛风，杀虫止痒，温肾壮阳之功能。用于阴痒带下，湿疹瘙痒，湿脾腰痛，肾虚阳痿，宫冷不孕等症［1］。蛇床子化学成分复杂，主要含有具生物活性的香豆素类化合物，包括蛇床子素、佛手柑内酯、异虎耳草素等。蛇床子及其制剂已广泛应用于临床，现将其近年来在临床上的新应用综述如下。
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河北道地药材北沙参HPLC - PDA指纹图谱研究
目的:建立河北道地药材北沙参HPLC - PDA指纹图谱分析方法,并与不同产地北沙参药材指纹图谱特征进行比较,为科学评价与有效控制北沙参药材质量提供新方法.方法:采用DiamonsilTM C18(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-,柱温30℃,检测波长295 nm.结果:13批道地药材的相似度在0.9以上,化学组成一致性较好；不同产地饮片相似度只在0.1 ～0.4之间.结论:本方法操作简便、快速、准确,为北沙参药材的鉴别和质量的全面控制提供了依据.
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HPLC法同时测定不同产地佛手中5个成分的含量
目的:建立HPLC波长切换法同时测定佛手药材中柚皮苷、橙皮苷、6,7-二甲氧基香豆素、5,7-二甲氧基香豆素和佛手柑内酯的含量.方法:采用Diamonsil C1s色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1％醋酸水(B),二元梯度洗脱(0～15 min,18％A→26％A;15～18 min,26％A→49％A;18～25min,49％A;25～28 min,49％A→100％A),流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,波长切换(0～15 min,在283 nm波长下检测柚皮苷和橙皮苷;15～28 min,在320 nm波长下检测6,7-二甲氧基香豆素、5,7-二甲氧基香豆素和佛手柑内酯).结果:柚皮苷、橙皮苷、6,7-二甲氧基香豆素、5,7-二甲氧基香豆素和佛手柑内酯的进样量分别在9.3～186.6 μg(r=0.999 8)、40.6～812.8 μg(r=0.999 8)、8.4～167.7 μg(r=0.999 9)、80.6～1 612.8 μg(r=0.999 9)和4.3～86.4 μg(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为95.5％、98.9％、95.8％、100.2％、97.7％,RSD分别为3.0％、2.6％、1.8％、2.6％、3.0％.11批佛手样品中柚皮苷、橙皮苷、6,7-二甲氧基香豆素、5,7-二甲氧基香豆素和佛手柑内酯含量测定结果分别为0.019％～0.068％、0.028％～0.275％、0～0.075％、0.094％～0.501％、0.002～0.034％.结论:本法可用于佛手药材中柚皮苷、橙皮苷、6,7-二甲氧基香豆素、5,7-二甲氧基香豆素和佛手柑内酯的含量测定.
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快速溶剂萃取-液质联用法同时测定6种白芷呋喃香豆素
目的:通过利用液质联用方法同时测定川白芷提取液中6种主要呋喃香豆素成分含量并比较3种不同提取方法的提取量,建立一种更高效可靠的中药材质量控制方法.方法:建立液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)定量测定白芷药材中的6种呋喃香豆素成分(欧前胡素、异欧前胡素、水合氧化前胡素、氧化前胡素、佛手柑内酯和花椒毒酚),采用CAPCELL PAK MGⅡC18色谱柱(2.0 mm×100 mm,3.0 μm),流动相为含0.1％甲酸乙腈-含0.1％甲酸、5 mmol·L-1甲酸铵水,梯度洗脱,运行4.0 min,流速0.3 mL·min-,柱温25℃,以ESI为离子源,在阳离子扫描多反应监测(MRM)模式下,对6种呋喃香豆素成分的离子对进行扫描检测,其中6种成分的定量离子对为欧前胡素m/z 271.1/147.0、异欧前胡素m/z 271.1/147.0、水合氧化前胡素m/z 305.0/203.0、氧化前胡素m/z 287.0/203.0、佛手柑内酯m/z 217.1/174.0、花椒毒酚m/z 203.0/147.0;运用正交设计试验优化快速溶剂萃取法(ASE)的提取工艺,并比较了ASE法、回流提取法和超声辅助提取法的萃取量.结果:欧前胡素、异欧前胡素、水合氧化前胡素、氧化前胡素、佛手柑内酯和花椒毒酚6种被测成分的质量浓度在0.05 ～1.6、0.05～1.6、0.02～0.64、0.02 ～0.64、0.02 ～0.64、0.02 ～0.64 μg· mL-1范围内线性关系良好(相关系数＞0.997);回收率在95.3％～102.4％之间,RSD均小于3.6％.正交试验设计优化ASE法,优化得到的萃取条件为萃取温度90℃,静态萃取时间6 min,保持循环次数为2次,萃取溶剂为95％乙醇溶液;其他参数设定为系统默认值.经条件优化后ASE萃取得到的白芷6种呋喃香豆素含量显著高于回流法和超声法,ASE萃取得到的主要成分(欧前胡素、异欧前胡素)的含量比其他2种提取方法高10％～ 20％,其他4种含量相对较低的成分萃取量提高显著,含量相比增加了1.4～2.2倍.结论:ASE法可快速高效萃取白芷香豆素成分,与液相色谱或液质联用法联合后,可用于中药材香豆素成分的质量控制和定量分析.
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羌活不同部位有机酸和香豆素类化合物含量的比较研究
目的:探究羌活不同部位有效成分的分布特征,为其药材质量评价和资源合理利用提供科学依据.方法:采用HPLC-DAD法同时测定羌活根部(根和根茎)、茎、叶片、叶柄、种子5个部位中绿原酸、阿魏酸、紫花前胡苷、补骨脂素、香柑内酯、欧前胡素、羌活醇和异欧前胡素的含量,并对测定结果进行分析比较.色谱柱:TSK gel ODS-80Ts QA C18柱(250 mm×4.6mm,5μm)；流速:0.6 mL·min-1；进样量:10 μL;流动相A相为纯甲醇,B相为0.3％的冰醋酸水溶液,梯度洗脱.结果:羌活不同部位间各活性成分的含量存在一定的差异,含量较高的羌活醇和异欧前胡素主要富集于根部,绿原酸在全草中广泛分布.不同部位中紫花前胡苷、补骨脂素和佛手柑内酯的含量均较少,且补骨脂素主要分布在叶片和叶柄中.结论:羌活根和根茎中活性成分总含量明显高于其他部位,与传统上以其根茎及根人药相符.地上部分绿原酸和一些未知成分的含量较高,也具有一定的开发价值.
