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秦皮乙素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡机制的研究
目的:研究秦皮乙素对SGC-7901细胞的作用及其作用机制.方法:首先通过MTT法考察秦皮乙素对胃癌SGC-7901细胞体外抑瘤作用,并用电镜法观察经不同浓度的秦皮乙素作用的SGC-7901细胞的形态特征,后用流式细胞仪法检测bcl-2 、bax蛋白的表达.结果:秦皮乙素具有一定的抗肿瘤作用,随着给药浓度的增加,SGC -7901细胞的生长率也随之降低,且有明显的凋亡形态学特征.药物作用24h后,用FCM法检测到bcl-2的表达随给药浓度的增加而降低,而bax表达呈上升趋势.结论:秦皮乙素对SGC-7901细胞有显著的抑制作用且诱导其凋亡.
关键词： 秦皮乙素 SGC-7901细胞 细胞凋亡 作用机制 -
秦皮乙素通过调控Smac、Survivin蛋白对SGC-7901细胞凋亡机制的研究
目的：研究秦皮乙素对活性氧、膜电位、Ca2+以及Smac、Survivin蛋白活性的影响，为进一步揭示其抗肿瘤作用机制提供帮助。方法：MTT法检测对肿瘤细胞生长的抑制作用；流式细胞仪检测细胞内活性氧、Ca2+以及膜电位变化情况；westenblot法测定对Surviving、Smac蛋白含量的影响。结果：秦皮乙素可显著提高SGC-7901细胞生长抑制率，升高活性氧和细胞内Ca2+浓度，降低线粒体膜电位，增加Smac蛋白含量，降低Surviving蛋白含量，与对照组比较具有统计学意义。结论：秦皮乙素可通过调控活性氧和细胞内Ca2+浓度，以及线粒体膜电位来启动线粒体凋亡通路，进而释放Smac蛋白，并与凋亡抑制蛋白Surviving蛋白结合，从而发挥其抗肿瘤作用。
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UPLC同时测定秦皮配方颗粒中7种成分
目的:建立UPLC同时测定秦皮配方颗粒中7种成分(秦皮甲素、毛柳苷、秦皮乙素、丁香苷、秦皮苷、秦皮素和东莨菪内酯)的方法,比较不同厂家及批次秦皮配方颗粒中7种成分含量的差异,为秦皮配方颗粒的科学质量控制提供依据.方法:采用Waters超高效液相色谱仪,Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),以甲醇(A)-0.1％磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～1 min,5％ ～10％A;1～10 min,10％ ～ 12％ A),流速0.4 mL·min-1,进样量2μL,柱温38℃,检测波长220 nm.结果:色谱峰纯度结果表明方法专属性良好.秦皮甲素、毛柳苷、秦皮乙素、丁香苷、秦皮苷、秦皮素和东莨菪内酯分别在各自范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系;平均回收率分别为100.0％(RSD 2.0％),99.5％ (RSD2.1％),99.9％ (RSD 1.5％),99.7％ (RSD 2.2％),99.4％ (RSD 1.4％),100.8％ (RSD 1.8％),99.4％ (RSD 2.6％).结论:该方法简便、准确,适用于秦皮配方颗粒中7种成分的同时定量测定,分析时间明显缩短,并对秦皮配方颗粒中除秦皮甲素和秦皮乙素之外的多种成分首次进行了定量测定,不同厂家及批次的秦皮配方颗粒主要成分含量存在一定的差异.
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HPLC测定清热卡森颗粒中秦皮乙素
目的:建立HPLC测定清热卡森颗粒中秦皮乙素含量的方法.方法:反相高效液相色谱法.色谱柱为KromasilC18(4.6 mm ×250 mm,5 μm),以乙腈-0.1%磷酸(10∶90)流动相,流速为1.0 mL·min-1,柱温为40 ℃,检测波长为346 nm,进样量 10 μL.结果:秦皮乙素的线性范围为0.010 1～0.253 2 μg(r=0.999 9).平均加样回收率99.1%,RSD 1.14%.结论:方法操作简单,灵敏,准确,重复性好,可用于清热卡森颗粒的质量控制.
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高效液相色谱法测定秦皮中秦皮乙素的含量
目的:制订药材秦皮含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法测定秦皮中秦皮乙素的含量.结果:秦皮乙素在0.1164～0.5820μg范围内呈良好线性关系,平均回收率为98.46%,RSD为1.63%.结论:该方法简便易行,重视性好.
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大鼠尿液中秦皮甲素和秦皮乙素代谢物的HPLC-MSn分析
目的:探索秦皮乙素和秦皮甲素在大鼠尿液中的代谢物,以期阐明这2种药物在体内作用的化学基础.方法:单次灌胃给药秦皮乙素和秦皮甲素后收集48 h内大鼠尿液,经固相萃取法处理,采用HPLC-MSn检测代谢产物,色谱条件为流动相甲醇-0.2％甲酸(12∶88),流速1.0 mL· min-,进样量5 μL,柱温35℃,检测波长339 nm;质谱条件为电喷雾离子化方式,正离子扫描模式,喷雾电压3.0 kV,碰撞气流量0.16 mL·min-1,洗脱溶剂温度350℃,离子源温度450℃.结果:从大鼠尿液中发现并初步鉴定了5个代谢产物的化学结构,主要为秦皮乙素的水解产物、还原产物、甲基化产物及硫酸化产物.结论:推测秦皮甲素在体内先水解为秦皮乙素,再进行水解、还原、甲基化及硫酸化反应.
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星点设计-效应面法优选治前胶囊的提取工艺
目的：优选治前胶囊的提取工艺,为将该制剂开发成中药新药提供依据。方法以浸泡时间、加水量、提取时间为主要影响因素,以浸膏得率和秦皮乙素浸出量为评价指标,采用单因素试验和星点设计-效应面法优选治前胶囊的佳提取工艺。结果优选的佳提取工艺条件为：回流提取2次,第1次加10倍量水、提取2.5 h,第2次加8倍量水、提取2 h。结论优选的佳提取工艺条件对秦皮乙素提取效率高,经济、合理、简单可行。
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毛菊苣药材不同部位主要活性成分含量
目的:比较毛菊苣根、茎、种子3个部位中绿原酸、秦皮乙素、山莴苣素和山莴苣苦素的含量.方法:Inertsil ODS-SP色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流速1.0 mL·min~(-1),柱温32℃,流动相甲醇-0.2%甲酸,0～40 min,30%～70%甲醇梯度洗脱,进样量5 μL;检测波长分别为256,350,299和229 nm.结果:绿原酸、秦皮乙素、山莴苣素和山莴苣苦素的回收率分别为98.2%,99.57%,100.50%和99.46%,线性范围分别为0.97～97.2(r=1.000),2.2～88.0(r=0.998 9),21.0～210.0(r=0.999 8),和2.6～533.3 mg·L~(-1)(r=1.000),RSD分别为1.6%,1.5%,0.77%,2.0%.毛菊苣根山莴苣苦素和山莴苣素质量分数分别为0.678 9,0.752 0 mg·g~(-1),而种子里的分别为0.239 6,0.052 0 mg·g~(-1),种子中秦皮乙素、绿原酸的质分数分别为0.071 0,0.189 0 mg·g~(-1),而根中质量分数分别为0.004 8,0.004 3 mg·g~(-1).结论:本方法准确、快速、简便、重复性好,为毛菊苣质量控制提供了依据.
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秦皮的药理作用研究进展
秦皮(Cortex Fraxini)为常用中药,种类繁多,资源丰富,价格低廉,具有多种药理活性,且临床应用范围广,是极其重要并有很大开发利用价值的道地中药材.现代药理研究表明,秦皮具有抗病原微生物作用、抗炎镇痛作用、抗肿瘤作用、抗氧化作用以及神经保护和血管保护等作用.临床上秦皮主要用于治疗多种炎症、细菌性痢疾等疾病,并可用于清热解湿、止咳平喘.作者对秦皮的药理作用及其临床应用的国内外新研究现状作一综述,为我国道地药材秦皮的新药开发研究提供参考.
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秦皮乙素促进成骨细胞分化延缓增龄性骨质疏松的研究
目的 探讨秦皮乙素对成骨细胞分化的调控及对增龄性骨质疏松症的治疗作用.方法 取7月龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、秦皮乙素200 mg/kg组与秦皮乙素400 mg/kg组,分别灌胃给予生理盐水与秦皮乙素.给药3个月后取材,X射线检测小鼠胫骨骨密度,qPCR检测成骨细胞分化标记基因表达,成骨诱导液诱导28 d后茜素红染色检测成骨细胞矿化结节形成能力,胫骨组织HE染色观察骨组织形态.结果 10月龄时灌胃给予200 mg/kg秦皮乙素的小鼠胫骨骨密度略高于对照组,而灌胃给予400 mg/kg秦皮乙素的小鼠胫骨骨密度明显高于对照组.HE染色结果同样显示400 mg/kg组小鼠骨小梁显著多于对照组.成骨诱导分化与茜素红染色结果显示,秦皮乙素400 mg/kg组骨髓来源间充质干细胞矿化结节形成能力增强.qPCR结果表明秦皮乙素剂量依赖地促进成骨细胞分化标记基因碱性磷酸酶、骨涎蛋白、Col1与Runx2的表达,同时发现经典Wnt信号关键基因Dkk1与Lef1表达也明显升高.结论 秦皮乙素促进成骨细胞分化能力,进一步延缓增龄性骨质疏松症,其可能与调控经典Wnt信号相关.
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秦皮乙素对人肺癌H460细胞体外增殖与凋亡的影响
目的 探讨秦皮乙素对人肺癌H460细胞体外增殖与凋亡的影响.方法 将体外培养人肺癌H460细胞分为4组:空白对照组、秦皮乙素0.2 mg/ml组、秦皮乙素0.4 mg/ml组、秦皮乙素0.8 mg/ml组.给药干预48 h后,MTT法观察细胞增殖抑制率;流式细胞仪分析细胞凋亡率和周期;比色法检测Caspase-3的活性.结果 不同浓度的秦皮乙素均能抑制人肺癌细胞H460的体外增殖,并使细胞阻滞于S期,Caspase-3的活性上升,上述结果均呈剂量依赖性.结论 秦皮乙素能抑制人肺癌H460细胞的体外增殖,并能诱导H460细胞的凋亡,具有良好的抗肿瘤作用.
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高效液相色谱法测定消炎片中秦皮乙素的含量
建立高效液相色谱法消炎片中秦皮乙素的含量测定方法 .采用SHIMADZU VP-ODS色谱柱;乙腈-0.1%磷酸溶液(12:88)为流动相;流速0.8 mL/min;检测波长:353 nm;秦皮乙素的进样量在0.124 1～1.241μg范围内线性关系良好,r=0.999 9.秦皮乙素平均回收率为100.10%,RSD为1.49%.
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HPLC法同时测定蒲丁合剂中秦皮乙素和咖啡酸的含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定蒲丁合剂中秦皮乙素和咖啡酸的含量测定方法.方法:采用HPLC法对蒲丁合剂中的秦皮乙素和咖啡酸进行含量测定.色谱条件为:C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈-甲醇-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长350 nm.结果:秦皮乙素和咖啡酸色谱分离良好,浓度与峰面积呈良好线性关系,线性范围分别为秦皮乙素7.5～67.5 mg·L-1,r=0.999 6(n=6);咖啡酸7.5～45.0 mg·L～,r=0.999 9(n=6),平均加样回收率分别为96.7%(n=9,RSD=1.5%)、98.1%(n=9,RSD=1.5%).结论:本方法测定了3批蒲丁合剂的秦皮乙素和咖啡酸的含量,该方法分离度好、快速、简便、重现性好.
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HPLC测定紫花地丁中秦皮乙素的含量
目的:建立高效液相色谱法测定紫花地丁中秦皮乙素的含量的方法.方法:采用phenomenex C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸(8:92);流速:1.0ml/min;检测波长:350nm;进样量:对照品及样品各20μl.结果:线性范围是0.0824～1.236μg(r=0.99998,n=5).平均回收率:100.4%,RSD=1.6%.结论:本法简便、快速、精确、重现性好.
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HPLC法测定复方南板蓝根冲剂中秦皮乙素的含量
目的:建立复方南板蓝根冲剂中秦皮乙素的含量测定方法.方法:色谱柱为Diamonsil C18分析柱,流动相为甲醇-乙腈-三乙胺-磷酸-水(3:10:1:1:85),检测波长为353nm,流速为1.0ml/min,柱温为室温.以甲醇超声提取,HPLC法测定样品中秦皮乙素的含量.结果:样品中秦皮乙素得到了很好的分离.线性范围为0.25μg～1.00μg(r=1.000),平均回收率为100.2%,RSD为0.8%(n=6).结论:本法可作为制剂质量控制的有效手段.
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3种秦皮香豆素的毛细管区带电泳快速分析
目的 考察秦皮香豆素在不同实验条件下的提取与电泳行为,建立其中主要活性成分秦皮苷、秦皮甲素、秦皮乙素的毛细管区带电泳快速定量方法 .方法 采用50 mmol·L-1硼砂溶液为运行缓冲溶液,熔融石英毛细管有效长度45 cm(75 μm×53.5 cm),以对羟基苯甲酸丙酯为内标,操作电压18kV,柱温25℃,于210 nm波长处测定.结果 在优化的电泳条件下,3种秦皮香豆素在10 min内完全分离.秦皮苷、秦皮甲素、秦皮乙素的线性范围分别为:6.0～96 mg·L-1(r=0.9997,n=5),7～112 mg·L-1(r=0.999 6,n=5)和4.7～75.2 mg·L-1(r=0.999 4,n=5);平均加样回收率分别为101.74%,100.92%和102.44%,相应的RSD分别为2.18%,1.97%,2.66%(n=9).结论 本实验为秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的同时定量提供了一种快速简便的检测方法 .
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反相-高效液相色谱法同时测定消炎颗粒中绿原酸与秦皮乙素的含量
目的：建立反相-高效液相色谱法同时测定消炎颗粒中绿原酸、秦皮乙素的含量，为更好地控制药品质量提供参考。方法：采用Inertsil ODS-3色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液（V∶V＝10∶90），流速为1.0 ml／min，柱温为30℃，检测波长分别为327 nm（绿原酸）、353 nm（秦皮乙素）。结果：指标成分绿原酸、秦皮乙素进样量各在0.103～0.821、0.107～0.854μg范围内呈良好的线性关系（r≥0.9998），加样回收率分别为99.57％（RSD＝1.06％）、101.06％（RSD＝1.27％）。结论：本法简便可靠、重复性好，适用于该制剂的质量控制。
关键词： 反相-高效液相色谱法 消炎颗粒 绿原酸 秦皮乙素 含量 -
藏药秦皮接骨胶囊提取工艺研究
目的 优选秦皮接骨胶囊的提取工艺.方法 采用正交试验法,以秦皮甲素与秦皮乙素总量和西贝母碱总量为指标,结合直观分析和方差分析综合优选秦皮接骨胶囊的提取工艺.结果 选定的佳工艺为加70%乙醇提取2次,每次加8倍量乙醇,提取3 h.结论 优选的工艺合理、稳定,适合工业化生产.
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HPLC法同时测定消炎片中绿原酸和秦皮乙素的含量
目的:建立反相高效液相色谱法同时测定消炎片中绿原酸和秦皮乙素的含量.方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.04%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长为328 nm;流速1.0 ml/min;进样量10μl;柱温35℃.结果:绿原酸和秦皮乙素的线性范围分别为2.515～30.18 μg/ml(r=0.999 9,n=5)和6.388μ～76.65μg/ml(r=1.000 0,n=5);提取回收率分别为98.99%(RSD为0.2%,n=6)和98.93%(RSD为0.5%,n=6).结论:本法操作简便、快速、结果准确,可用于消炎片的质量控制.
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秦皮化学成分的研究
在前报[1]中,作者从苦枥白蜡树树皮中分离到2个化合物,秦皮乙素(I)和秦皮素(Ⅱ),现又从该树皮中分到3个化合物,6,7-二甲氧基-8-羟基香豆素(Ⅲ),秦皮苷(Ⅳ)和秦皮甲素(V).
