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自噬与视网膜疾病的研究现状
随着多年研究的进展,人们对自噬分子机制和形态特点的了解逐渐深入.自噬现象受到了越来越多的重视.无论是自噬过度还是自噬不足都可能导致各种疾病的发生.本文就视网膜病变中自噬作用的研究进展作一综述.
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阿托伐他汀对局灶性脑缺血大鼠脑组织中自噬及血管新生的影响
目的:观察阿托伐他汀对局灶性脑缺血大鼠脑组织中自噬及血管新生的影响.方法:雄性SD大鼠63只,随机分为假手术组、模型组、他汀组,每组21只.模型组和他汀组采用大脑中动脉栓塞法造模,假手术组不栓塞.术前1周,他汀组给予阿托伐他汀钙片4 mg/(kg·d)灌胃,其余两组给予等量生理盐水灌胃.术后24 h处死大鼠,TTC染色观察脑梗死面积,免疫组化法检测脑组织中CD105、IRE1的表达,RT-PCR检测血管内皮细胞生长因子(VEGF) mRNA,Western blot法检测自噬蛋白LC3-Ⅱ.结果:与假手术组相比,模型组及他汀组脑组织皮层及皮层下有明显梗死灶,缺血半暗带区CD105、IRE1、VEGF mRNA、LC3-Ⅱ表达升高(P＜0.05);他汀组上述变化较模型组更显著(P＜0.05).模型组、他汀组脑组织中VEGF mRNA与LC3-Ⅱ表达有明显线性正相关关系(r=0.837、0.850,P均＜0.05).结论:阿托伐他汀可通过增强自噬,促进局灶性脑缺血血管新生.
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犀角地黄汤对脑缺血大鼠自噬相关蛋白表达的相关研究
目的 探讨犀角地黄汤对内毒素诱导下持续性大脑中动脉栓塞模型(pMCAO)大鼠脑组织的自噬相关LC3-Ⅱ蛋白的表达;以及透射电镜下观察双层膜的自噬体.方法造模后进行分组,并采用不同剂量犀角地黄汤进行干预,分别在透射电镜下观察自噬体;检测自噬体膜标志性蛋白质LC3-Ⅱ的表达.结果 模型组有明显的空泡现象出现,中等剂量的犀角地黄汤治疗组有明显空泡现象.造模后第3天和第6天,LC3-Ⅱ蛋白表达增强,LC3-Ⅱ/LC3-l比值增加(P＜0.05).结论 细胞质LC3-Ⅰ脂质化形成LC3-Ⅱ.中高剂量组明显降低LC3-Ⅱ蛋白含量,中剂量组效果更佳,能更好地抑制自噬相关蛋白的表达.
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抑制自噬减少大鼠脊髓损伤后髓鞘碱性蛋白的丢失
目的：观察自噬抑制剂对脊髓损伤后髓鞘碱性蛋白（MBP）表达的影响。方法：将99只大鼠随机分成假手术组、损伤组和干预组各33只，各组再分成损伤后3、7、14 d 3个时间点，应用打击器制备 T10脊髓损伤模型。干预组造模前注射1μL 3-甲基腺嘌呤（3-MA）。假手术组不造成打击。提取脊髓样本进行 Western blot和实时定量荧光 PCR 检测自噬相关蛋白 LC3-Ⅱ和 MBP 的蛋白、mRNA 水平。用 BBB 行为学评分分别于伤后1、7、14 d 评估大鼠。结果：伤后14 d 时干预组的 BBB 评分明显高于损伤组（P=0.001）。损伤组各时间点大鼠脊髓损伤区域的 LC3-Ⅱ蛋白含量较假手术组明显增加（P<0.05），干预组损伤区域的 LC3-ⅡmRNA 和蛋白水平在伤后3、7、14 d 均比损伤组减少（P<0.05）。干预组大鼠损伤区域的 MBP mRNA 和蛋白水平在伤后3、7、14 d 均比损伤组增加（P<0.05）。结论：大鼠脊髓损伤后存在自噬的过度激活，自噬抑制剂可通过减少脊髓损伤后 MBP 的丢失发挥神经保护作用。
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天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠血管内皮细胞自噬相关信号通路Ca2+/AMPK/mTOR的影响
目的 探讨天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮细胞自噬相关信号通路Ca2+/AMPK/mTOR的影响.方法 将30只雄性SHR大鼠随机分为SHR组、尼莫地平组(5.4 mg/kg)及天麻钩藤饮组(10.26 g/kg),另设京都种大鼠(WKY)作为对照组,灌胃体积为10 ml/kg,连续给药6周.采用无创血压仪分别检测各组给药前、给药2周后、给药4周后及给药6周后的大鼠尾动脉收缩压;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测给药6周后各组大鼠血浆血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)、白细胞介素1(IL-1)及钙调素(CaM)水平;采用Western blot检测给药6周后各组大鼠血管内皮细胞中自噬标志物(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链(LC3-Ⅱ)及自噬通路相关腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达情况;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测给药6周后各组大鼠血管内皮细胞中自噬通路相关AMPK、mTOR基因的表达情况.结果 与WKY组比较,SHR组大鼠尾动脉收缩压增高,血浆ANGⅡ、IL-1及CaM含量增加,血管内皮细胞中自噬标志物Beclin-1、LC3-Ⅱ和自噬通路相关AMPK、mTOR蛋白及mRNA表达水平均上调(P<0.05);与SHR组比较,尼莫地平组和天麻钩藤饮组大鼠血压均降低(P<0.05),血浆ANGⅡ、IL-1及CaM含量下降,且两者血管内皮细胞中自噬标志物Beclin-1、LC3-Ⅱ和自噬通路相关AMPK、mTOR蛋白及mRNA表达水平均降低(P<0.05).结论 天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠血管内皮细胞自噬相关信号通路Ca2+/AMPK/mTOR具有明显的调控作用,可能是其降压的重要机制之一.
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RhoA激酶1在氧化低密度脂蛋白诱导足细胞损伤中的作用
目的 观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对小鼠肾小球足细胞RhoA激酶1(ROCK1)表达和活性的影响,并初步探讨ROCK1在ox-LDL诱导的足细胞损伤中的作用.方法 体外培养小鼠条件永生性足细胞,以ox-LDL 20 μg/ml刺激足细胞24h,采用Western印迹法检测正常对照组、ox-LDL刺激组、ROCK1 siRNA+ox-LDL组以及ROCK1过表达(wtROCK1)+ox-LDL组磷酸化肌球蛋白磷酸化亚单位(p-MYPT)、nephrin、LC3-Ⅱ、p62、磷酸化(p)-ULK1(ULK1是一种丝/苏氨酸氨酸激酶)的表达水平;Dil-ox-LDL与足细胞共孵育4h,荧光显微镜观察各组足细胞脂质的含量情况.结果 与对照组相比,ox-LDL刺激增加足细胞ROCK活性,同时伴有nephrin、LC3-Ⅱ表达下降(P＜0.05),p62、p-ULK1表达上升(P＜0.05),细胞内胆固醇含量增加(P＜0.05).增加ROCK1表达能进一步增加ox-LDL诱导的p-MYPT水平,并进一步降低nephrin、LC3-Ⅱ的表达,增加p62、p-ULK1的表达(P＜0.05)和细胞内胆固醇含量(P＜0.05);与之相反,抑制ROCK1表达能抑制ox-LDL诱导的p-MYPT水平上调,同时上调nephrin、LC3-Ⅱ的表达(P＜0.05),下调p62、p-ULK1的表达(P＜0.05),降低细胞内胆固醇含量(P＜0.05).结论 ROCK1介导的脂质自噬障碍是ox-LDL诱导足细胞损伤的重要途径.
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三尖杉碱诱导肝癌细胞自噬的研究
目的 探讨三尖杉碱抑制肝癌细胞增殖的方式及机制.方法 采用MTT法检测三尖杉碱对肝癌细胞HepG2增殖抑制作用;吖啶橙染色观察细胞形态;Westemblot检测自噬标志性蛋白及与自噬有关蛋白的表达.结果 三尖杉碱以时间和剂量依赖方式抑制肝癌细胞HepG2增殖;吖啶橙染色显示酸性囊泡细胞器增加;随着三尖杉碱作用浓度增加,自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ以及Beclin-1表达上调.自噬抑制剂3-MA可抑制细胞增殖,下调蛋白LC3-Ⅱ以及Beclin-1表达.结论 三尖杉碱通过上调Beclin-1诱导肝癌细胞发生自噬,从而抑制肝癌细胞生长.
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子痫前期孕妇自噬蛋白表达与胎盘CD8+T细胞浸润相关性研究
目的 分析子痫前期孕妇胎盘剥离面母体血液中自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达量及胎盘CD8+T细胞浸润程度,并探究两者间的相关性.方法 30例正常孕妇作为对照组,28例重度子痫前期孕妇与34例轻度子痫前期孕妇作为实验组.应用ELISA法检测各组孕妇胎盘剥离面母体血液中自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达量,流式细胞术分析胎盘CD8+T细胞数量,并对两组数据进行相关性分析.结果 实验组孕妇血清自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达量及胎盘CD8+T细胞数量均明显高于对照组(P＜0.01),其中重度子痫前期组各检测结果均显著高于轻度子痫前期组(P＜0.01);实验组Beclin-1蛋白表达量与CD8+T细胞数呈正相关,其中轻度子痫前期组两者间相关系数r=0.495,P＜0.01,重度子痫前期组两者间相关系数r=0.563,P＜0.01;实验组LC3-Ⅱ蛋白表达量与CD8+T细胞数呈正相关,其中轻度子痫前期组两者间相关系数r=0.637,P＜001,重度子痫前期组两者间相关系数r=0.584,P＜0.01.结论 子痫前期孕妇血清自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达量及胎盘CD8+T细胞数量均高于正常孕妇,相关数值随着发病程度加重而升高,白噬蛋白水平及胎盘CD8+T细胞数量呈正相关.
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风湿性瓣膜病患者主动脉瓣组织Beclin1及LC3-Ⅱ的表达及意义
目的:探讨自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)在风湿性瓣膜病组织中的表达及意义.方法:选取2015年10月至2017年10月广西医科大学第一附属医院收治的风湿性心瓣膜病主动脉瓣狭窄或风湿性心脏病联合瓣膜病变主动脉瓣狭窄病例为实验组,同期选取A型主动脉夹层需行Bentall手术或Bentall+Suns手术健康主动脉瓣病例为对照组;主动脉根部切开,灌注心脏停搏液,心脏停跳后即刻切取主动脉瓣;采用免疫组化染色及western blotting检测瓣膜组织中Be-clin1和LC3-Ⅱ蛋白的定位及表达差异.结果:实验组的主动脉瓣膜组织中Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达含量高于对照组(P<0.05).结论:风湿性瓣膜病存在自噬现象,自噬因素可能参与风湿性瓣膜病的发病.
关键词： 自噬 风湿性瓣膜病/风湿性心脏病 Beclin1 LC3-Ⅱ -
肢体缺血后处理在脑缺血再灌注中激活自噬时间窗的研究
目的:探讨肢体缺血后处理在脑缺血再灌注中激活自噬佳时间窗.方法:用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,于大鼠脑缺血2h再灌注24h后进行神经功能缺损评分、脑梗死体积测定及HE染色、免疫组化检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ.结果:与假手术组(Sham)比较,缺血再灌注组(I/R)出现明显神经功能缺损症状及脑梗死改变,LC3-Ⅱ表达不明显,与I/R组比较,肢体缺血后处理组(LpostC)神经功能缺损症状有所改善,脑梗死体积显著缩小,LC3-Ⅱ表达明显增加,且在LpostCOmin亚组增加显著(P＜0.05).结论:肢体缺血后处理对脑缺血再灌注损伤有保护作用,并且再灌注即刻干预激活自噬显著.
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葛根素对脑外伤大鼠神经保护作用及对p38MApK通路和GLT-1表达的影响
目的 观察葛根素(pue)对脑外伤(TBI)大鼠神经的保护作用,并探讨其潜在的分子作用机制.方法 随机选取10只大鼠作为假手术组,其余大鼠建立TBI模型,造模成功后分为模型组、纳洛酮组(0.4 mg/kg)、葛根素低剂量组(20 mg/kg)、葛根素中剂量组(40 mg/kg)、葛根素高剂量组(60 mg/kg),假手术组及模型组给予等量容积0.9%氯化钠注射液,注射治疗2周后,甲苯胺蓝染色检测脑损伤周围存活的皮质神经元数目、使用实时荧光定量pCR和免疫荧光染色检测LC3- Ⅱ的表达水平,采用蛋白免疫印迹检测p38MApK、p-p38MApK和谷氨酸转运体-1(GLT-1)表达情况.结果 葛根素组大鼠的皮质神经元存活率显著高于模型组(P<0.05),葛根素组大鼠脑组织中LC3-Ⅱ和p-p38MApK 表达水平显著低于模型组(P<0.05),葛根素组大鼠GLT-1表达水平显著高于模型组(P<0.05),呈现剂量依赖性.结论 葛根素对TBI大鼠神经具有保护作用,这一作用可能通过抑制p38MApK通路和上调GLT-1的表达水平实现的,为脑外伤靶向药物的开发和治疗供一定的理论基础.
关键词： 葛根素 脑外伤 LC3-Ⅱ p38丝裂原活化蛋白激酶 谷氨酸转运体-1 -
自噬体在紫绀型先天性心脏病患儿心肌中的表达
目的 检测紫绀型先天性心脏病患儿心肌细胞中自噬体的表达,探讨细胞自噬作用在心肌慢性缺氧适应中的意义.方法 人选行手术矫治的先天性心脏病患儿18例,其中紫绀型先天性心脏病患儿10例,非紫绀型先天性心脏病患儿8例.取手术中切除的右室流出道心肌组织作为标本,采用透射电镜技术观察心肌细胞超微结构的改变,应用western blot检测自噬体特异性标志物LC3一Ⅱ的表达情况.结果 紫绀组患儿术前血氧饱和度明显低于非紫绀组(P<0.01):紫绀组患儿心肌细线粒体数量增多、排列紊乱,内质网肿胀,可见典型自噬体形成;与非紫绀组相比,紫绀组患儿LC3-Ⅱ蛋白表达显著增高(P<0.01).结论 紫绀型先天性心脏病患儿心肌细胞自噬作用增强,可能参与慢性缺氧条件下心肌细胞的适应性调节.
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雷公藤甲素调节佐剂关节炎大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织细胞自噬的实验研究
目的 观察雷公藤甲素(TP)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜脾脏胸腺自噬相关基因(Atg)/自噬标记蛋白(LC3-Ⅱ)、Beclin1表达和血清细胞因子水平的影响.方法 将大鼠随机分为4组:正常对照(NC)组,模型对照(MC)组,来氟米特(LEF)组,雷公藤甲素(TP)组,每组12只,后3组复制成AA大鼠模型.致炎后第13d开始给药.NC组、MC组给予生理盐水灌胃,每天1次;LEF组按5 mg/kg的剂量灌胃,每天1次;TP组按50 μg/kg的剂量,每天1次.连续给药30 d.观察大鼠关节及其病理形态学变化,ELISA法检测血清细胞因子B淋巴细胞刺激因子(BAFF)、白介素(IL)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-15、IL-10表达,RT-PCR法检测大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织Atg5 、Atg7、Atg12 mRNA,Western blot法检测大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达.结果 治疗后,TP组和LEP组大鼠足跖肿胀度(E)和关节炎指数较MC组降低.与NC组比较,MC组大鼠血清BAFF、IL-1、TNF-α升高,IL-15、IL-10降低,滑膜Atg5、Atg12 mRNA降低,脾脏Atg5 mRNA降低,脾脏Atg7、Atg12mRNA及胸腺Atg12 mRNA升高,滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin1下降(P＜0.05或0.01).与MC组比较,TP组滑膜Atg7、Atg12 mRNA降低,脾脏Atg5、Atg7、Atg12 mRNA及胸腺中Atg5、Atg7 mRNA降低,Atg12mRNA升高;滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin 1升高(P＜o.05).与LEF组比较,TP组TNF-α、BAFF降低,E、IL-15升高(P＜0.05或0.01).TP组滑膜Atg7 mRNA及胸腺Atg5、Atg7 mRNA表达降低,胸腺Atg12mRNA及脾脏Atg5、Atg7、Atg12 mRNA表达升高.结论 TP通过调节滑膜、胸腺、脾脏组织细胞自噬,改善关节滑膜炎症反应.
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高原低氧环境下大鼠心肌组织细胞自噬变化
目的 本文旨在观察高原低氧环境下大鼠心肌组织细胞自噬变化,并探讨自噬变化在心肌细胞凋亡损伤中的作用及机制.方法 60只雄性Wistar大鼠,随机分为对照组(西宁,2260米)与实验组(低压氧舱,5000米),实验组根据低氧暴露时间不同,分为低氧1、7、14、21、28 d五组,每组各10只,取各组大鼠心肌组织,行HE染色并在显微镜下观察心肌组织大体形态变化及细胞凋亡情况;分别采用免疫组化法、Real-time PCR法检测各组大鼠心肌组织Beclin-1、LC3-Ⅱ的蛋白及mRNA表达水平.结果 随着低氧暴露时间的逐渐延长,心肌组织细胞凋亡坏死数量逐渐增加,损伤程度逐渐加重,心肌组织Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达水平逐渐升高,其蛋白与mRNA表达水平变化趋势基本一致.结论 高原低氧环境暴露可诱导大鼠心肌组织细胞发生自噬变化;高原低氧可能通过增加自噬水平致大鼠心肌组织细胞凋亡损伤.
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自噬相关蛋白mTOR、LC3-Ⅱ及HIF-1α 与PM/DM的相关性
目的 检测自噬相关蛋白mTOR和LC3-Ⅱ及HIF-1α在PM/DM患者肌肉组织中的表达水平,进一步探讨自噬相关蛋白mTOR、LC3-Ⅱ及HIF-1α在PM/DM发病机制中的作用及意义.方法 应用免疫组化法测定PM/DM患者肌肉组织中mTOR、LC3-Ⅱ、HIF-1α的表达水平,并行相关研究.结果 PM和DM组肌肉组织中mTOR蛋白的阳性表达水平均低于Control组(P＜0.05);PM和DM组肌肉组织中LC3-Ⅱ蛋白的阳性表达水平均高于Control组(P＜0.05);PM组和DM组中mTOR与LC3-Ⅱ蛋白的表达水平均呈负相关(P＜0.05);DM组中HIF-1α蛋白的阳性表达水平高于PM组和Control组(P＜0.05);PM和DM组MDAAT+VAS评分与LC3-Ⅱ蛋白表达水平均呈正相关(P＜0.05).差异均有统计学意义.结论 自噬相关蛋白mTOR、LC3-Ⅱ可能参与了PM/DM的发病,LC3-Ⅱ与疾病的活动度有关;HIF-1α参与了DM的发病.
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骨关节炎软骨组织中的自噬水平降低并与凋亡呈负相关
目的:研究骨关节炎软骨组织中的白噬水平降低并与凋亡呈负相关.方法:取10例OA膝关节软骨组织(骨关节炎组)及7例正常膝关节组织(对照组)作为研究对象,实时定量用免疫组织化学及western blot方法检测凋亡指标PARP p85及自噬指标LC3-Ⅱ在膝关节软骨中的表达与分布,并对凋亡和自噬进行相关性分析,后PCR (real-time PCR)检测自噬调节因子miR-30a的表达.结果:骨关节炎组关节软骨组织中LC3-Ⅱ的表达量明显低于正常对照组(P＜0.01),PARP p85在骨关节炎组的表达显著高于正常对照组(P＜0.05),PARPp85与LC3-Ⅱ的软骨组织中表达呈负性相关(r=--0.612,P＜0.05),miR-30表达高于正常对照组(P＜0.01).结论:miR-30a的高表可能抑制骨关节炎软骨细胞自噬的发生,减弱软骨细胞对各种应激的抵抗能力,促进软骨的退行性变.
