风痛宁凝胶对佐剂性大鼠关节炎的影响

目的:研究风痛宁凝胶对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)的治疗作用.方法:采用Freund's完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎,经皮给药,观察风痛宁凝胶对大鼠双侧后足肿胀度的影响.结果:风痛宁凝胶可显著抑AA大鼠双侧后足跖肿胀.结论:风痛宁凝胶外用对大鼠AA有明显的治疗作用.

灸刺激对佐剂关节炎抗炎作用的免疫学机制

冬虫夏草水提取物对大鼠佐剂关节炎的影响

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠关节滑膜组织中VEGF-A mRNA表达的影响

目的 观察新风胶囊对佐剂关节炎大鼠关节滑膜组织血管内皮细胞生长因子-A(vascular endothelial growth factor,VEGF-A)mRNA表达的影响,探讨新风胶囊对类风湿性关节炎滑膜血管新生的作用机制.方法 将50只Wistar大鼠随机分成5组:正常对照组、模型对照组、甲氨蝶呤组、雷公藤多苷组、新风胶囊组,每组10只.除正常对照组外,其余各组均采用弗氏完全佐剂建立佐剂关节炎大鼠模型.造模成功后,各治疗组给予相应药物灌胃,连续30 d,采用SP免疫组化法滑膜微血管密度(microvessel density,MVD)计数,采用PCR法检测各组大鼠滑膜组织VEGF-A mRNA的表达.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数升高,滑膜组织MVD及VEGF-A mRNA表达水平显著升高(P＜0.01);与模型对照组比较,新风胶囊组MVD及VEGF-A mRNA表达水平均显著降低(P＜0.01),与新风胶囊组比较,甲氨蝶呤组MVD 升高(P＜0.05).结论新风胶囊可降低大鼠滑膜组织VEGF-A mRNA的表达,从而发挥抑制滑膜血管新生的作用.

羟基积雪草苷对佐剂关节炎大鼠滑膜成纤维细胞活化的影响

目的:研究羟基积雪草苷对佐剂关节炎大鼠滑膜成纤维细胞活化的影响.方法:将完全弗氏佐剂于大鼠右后足趾皮内注射0.1 mL致炎,建立佐剂关节炎大鼠模型,造模30 d后脱臼处死,取出关节处的滑膜,培养原代大鼠滑膜成纤维细胞(FLS),第3～6代细胞用于体外细胞实验.将对数生长期FLS以105个/mL接种于96孔板,利用白介素1β(IL-1β)诱导白介素-6(IL-6)的表达,羟基积雪草苷(终浓度1,5,10,20 μmol·L-1)和IL-1β(终浓度10 μg·L-1)作用24 h后收集上清.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中炎症因子IL-6的水平;实时定量PCR(Real time PCR)检测IL-6 mRNA的表达;蛋白印记法检细胞丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)、蛋白激酶C(PKC)、反应元件结合蛋白(CREB)的表达.结果:与正常组比较,模型组(IL-1β组)IL-6水平和IL-6 mRNA的表达明显升高.羟基积雪草苷预孵24 h后,浓度依赖性抑制IL-6的分泌并下调IL-6mRNA的表达.模型组中细胞外信号调节激酶(ERK)、p38及PKC的磷酸化水平显著提高,羟基积雪草苷逆转了IL-1β诱导的ERK、p38及PKC的磷酸化;同时抑制IL-1β引起的CREB磷酸化.结论:羟基积雪草苷抑制佐剂关节炎大鼠滑膜成纤维细胞活化,其机制可能与抑制MAPK和PKC通路活化,降低CREB的磷酸化有关.

新风胶囊对佐剂关节炎大鼠肺功能、Th细胞及调节性T细胞的影响

目的:探讨新风胶囊(XFC)对佐剂关节炎(AA)大鼠肺功能及调节性T细胞(Treg)、Th细胞的影响.方法:将48只大鼠随机均分为正常对照(NC)、模型对照(MC)、雷公藤多苷片(TPT)、XFC组.除NC组外,其余各组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1mL致炎,致炎后第19天给药.NC组及MC组给予0.9％氯化钠溶液,治疗组分别给予XFC 2.4g/kg、TPT 10mg/kg,每天1次,连续给药30d.观察各组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数(AI),ELISA法检测血清细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-4(IL-4),流式细胞术检测外周血Treg,定量PCR及免疫印迹检测肺组织IFN-γ、IL-4、FoxP3表达.结果:与NC组比较,MC组大鼠足跖肿胀度、AI升高,肺功能降低,血清和肺组织IFN-γ、Th1/Th2升高,IL-4、FoxP3和外周血Treg降低(P＜0.05,P＜0.01).与MC组比较,XFC组足跖肿胀度、AI降低,肺功能升高,血清和肺组织IFN-γ(mRNA和蛋白)降低,外周血Treg和IL-4、FoxP3(mRNA、蛋白)升高,且优于TPT组(P＜0.05,P＜0.01).结论:新风胶囊通过调节Treg表达,促使Th1向Th2漂移,纠正Th1/Th2细胞失平衡状态,维持细胞免疫抑制状态,减少炎性介质对肺组织刺激,提高肺功能水平.

新风胶囊改善佐剂关节炎大鼠肺功能及调节T细胞功能的实验研究

目的:观察新风胶囊(XFC)对佐剂关节炎(AA)大鼠肺功能及调节T细胞(Treg)的影响.方法:将大鼠均分为正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多苷片(TPT)组和XFC低中高剂量(XFC-L、XFC-M、XFC-H)组,除NC组外,其余大鼠注射弗氏完全佐剂致炎,致炎后19天给药,NC、MC组给予0.9％氯化钠溶液,其余组分别给予MTX、TPT、XFC.用药30d后,采用肺功能仪检测大鼠肺功能,酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白介素-10 (IL-10)表达,流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Treg表达,RT-PCR和免疫印迹(Western Blot)法检测Foxp3基因和蛋白表达.结果:MC组大鼠足跖肿胀度(E)、TNF-α升高；肺功能、IL-10、CD4+CD25+Treg、Foxp3降低；各治疗组大鼠肺功能参数及IL-10、Treg、Foxp3的表达升高,E、TNF-α降低；XFC-M组变化较其他治疗组明显(P＜0.05,P＜0.01).结论:AA大鼠存在肺功能降低,新风胶囊能改善AA大鼠关节症状及肺功能,其机制是通过上调IL-10、Treg及Foxp3的表达,下调TNF-α的表达,降低免疫复合物的沉积,减少炎症反应对组织的损伤,从而提高肺功能.

不同配比马钱子和苏木对佐剂关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的:从细胞凋亡角度,探讨马钱子与苏木配伍(简称“马苏”)在影响佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡方面的机制.方法:建立AA模型,测量足跖的肿胀程度;HE染色法,观察滑膜组织的病理变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;Western blot法检测滑膜组织中Fas/FasL、Bcl-2/Bax、p53、Caspase-3蛋白的表达情况.结果:马苏1∶18、1∶24煎剂可不同程度地降低AA大鼠足跖肿胀(P＜0.0l,P＜0.05);改善滑膜组织增生和炎细胞浸润等病理变化;能明显上调Fas、Bax、Caspase-3的表达(P＜0.01,P＜0.05);抑制凋亡因子FasL、Bcl-2、p53的表达(P＜0.01,P＜0.05).结论:一定配比的马苏煎剂对AA具有防治作用,其作用机制与干预线粒体通路和死亡受体通路,促进滑膜细胞凋亡有关.

热痹清片诱导AA大鼠滑膜细胞凋亡的作用及机制

目的:探讨热痹清片治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制.方法:采用弗氏完全佐剂造成大鼠(AA)模型,设正常组、模型组、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多苷(TPT)组和热痹清片组.分别采用电子显微镜、免疫组化法和流式细胞术检测各组大鼠滑膜细胞凋亡情况.结果:电镜观察显示,热痹清片组可见滑膜细胞核染色质呈凝块状,边聚呈月芽状,胞浆内及胞膜外可见凋亡小体;免疫组化法观察显示,热痹清片组Fas和FasL表达显著增加、Bcl-2表达显著减少(P＜0.05),指标变化差异与TPT、MTX相当(P＞0.05).流式细胞术观察表明,热痹清片组滑膜细胞凋亡率显著高于TPT组及MTX组(P＜0.05).结论:热痹清片通过促进Fas、FasL表达,抑制Bcl-2的表达,促进了滑膜细胞凋亡,从而发挥治疗作用.

马钱子与白术配伍对关节炎大鼠免疫机制研究

目的:探讨马钱子与白术配伍(简称马术)防治佐剂性关节炎(AA)大鼠的免疫机制.方法:建立AA大鼠模型,将马钱子与白术不同配比水煎剂连续灌胃给药32 d,取血和滑膜组织观察滑膜组织病理形态学变化,血清中风湿因子(RF)、白介素-1β、-6、-10(IL-1β、IL-6、IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、循环免疫复合物(CIC)、C型反应蛋白(CRP)和滑膜组织中前列腺素E2(PGE2)、皮质醇(Cor)的变化.结果:配伍组能不同程度地改善滑膜组织充血、坏死、炎细胞浸润、纤维组织增生,降低RF、IL-1β、IL-6、CIC、CRP、Cor的含量.结论:马术防治AA的免疫机制为抑制炎性细胞因子和Cor,控制炎症反应,其较佳配比为1∶6.

三妙丸中牛膝对关节炎大鼠引药作用的机制研究

目的:研究三妙丸中牛膝对关节炎大鼠引药作用的机制.方法:用弗氏完全佐剂和湿热处理法制备大鼠湿热痹症关节炎模型,造模成功的大鼠分为3组:模型组,含牛膝的三妙丸(18 g·kg-1)组,不含牛膝三妙丸(10 g·kg-1)组.HPIJC法测定三妙丸中主要成分小檗碱在心脏、关节组织中的分布情况,体积法测定大鼠足关节肿胀度,同时观察组织病理变化;测定血浆血液流变学指标.结果:含牛膝三妙丸组在给药后2,4,6 h和多次给药14 d后关节浓度均高于不含牛膝组,关节/心脏小檗碱浓度比显著大于不含牛膝组.含牛膝的三妙丸明显改善关节炎模型大鼠的关节肿胀和组织病理改变.含牛膝三妙丸组明显改善关节炎大鼠血液流变学指标,与不含牛膝三妙丸组比P＜0.01,与模型组相比也有显著性差异(P＜0.01).结论:牛膝能够引导三妙丸中主要有效成分小檗碱的靶组织分布,并与其药效作用相吻合.其促进小檗碱组织分布的作用和其活血作用可能有一定关系.

静脉注射丙种球蛋白对佐剂关节炎的作用

观察静脉注射丙种球蛋白(IVIG)对佐剂关节炎的作用及其机制.建立佐剂关节炎模型,分别在接种完全弗氏佐剂(CFA)后第8天(IVIG1组)或第15天(IVIG2组)尾静脉注射IVIG,10mL/(kg·d),疗程均为14 d.第6周末处死大鼠,观察关节病理改变,免疫组化检测滑膜组织中TNF-α和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果显示TNF-α、VEGF阳性细胞数均与关节病理积分呈正相关,接种CFA后IVIG1组和IVIG2组尾静脉注射IVIG均可抑制TNF-α和VEGF的表达,减轻滑膜炎症.表明 IVIG可通过抑制滑膜组织中的TNF-α和VEGF蛋白表达,减轻滑膜炎症.

健脾化湿通络方对佐剂关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

目的：观察健脾化湿通络方对佐剂关节炎大鼠滑膜血管 PI3K／AKT／mTOR 信号通路及缺氧诱导因子（HIF-1α）、血管内皮细胞生长因子 A（VEGF-A）、滑膜微血管密度（MVD）、内皮抑素（ES）的影响。方法50只大鼠随机均分成5组：正常对照组，模型对照组，甲氨蝶呤组，雷公藤多苷片组，健脾化湿通络方组。除正常对照组外，其余各组均采用弗氏完全佐剂建立佐剂关节炎大鼠模型。造模成功后，各治疗组给予相应药物灌胃，连续30 d。采用免疫组化法检测滑膜血管 MVD 表达，酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-6（IL-6）、IL-10、HIF-1α、VEGF-A 表达，免疫印迹法检测滑膜血管 PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、ES 蛋白表达。结果与正常对照组比较，模型对照组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数升高，滑膜组织 MVD 计数升高，血清 IL-6、VEGF、HIF-1α和滑膜血管 PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、ES 表达显著升高，IL-10降低（P ＜0．05或 P ＜0．01）。与模型对照组比较，健脾化湿通络方组 MVD 计数和血清 VEGF-A、HIF-1α、IL-6表达降低，滑膜 PI3K、p-AKT、mTOR、ES降低，血清 IL-10升高。结论健脾化湿通络方通过调节 PI3K／AKT／mTOR 通路、HIF-1α及 ES 表达改善滑膜血管新生。

催乳素对佐剂关节炎大鼠滑膜组织MMP-9表达的影响

目的:探讨催乳素(PRL)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,为进一步阐明PRL在类风湿性关节炎(RA)发病过程中的作用机制及为RA的治疗提供实验依据.方法:雄性wistar大鼠32只分为4组(n=10):①正常对照组(A组)(n=10);②佐剂关节炎对照组(B组)(n=10);③高催乳素血症佐剂关节炎组(C组)(n=10);④低催乳素血症佐剂关节炎组(D组).放射免疫法测定各组血清PRL含量;明胶酶谱法测定MMP-9的活性;免疫组织化学方法检测各组滑膜组织MMP-9免疫反应变化;western blot测定各组滑膜组织MMP-9的表达.结果:B组滑膜组织MMP-9的活性及表达明显高于A组,C组MMP-9的活性及表达高,D组较B组有所减少,但仍高于A组.结论:PRL影响滑膜组织MMP-9分泌是其影响RA发病过程的一种作用机制.

丝裂原活化蛋白激酶及核因子κB在佐剂关节炎大鼠滑膜中的表达

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)为一种自身免疫性疾病,其病理改变主要为滑膜组织的增生,炎性细胞浸润以及骨和软骨的进行性不可逆性破坏.许多研究表明滑膜中多种炎性细胞因子的表达增加,如肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8,细胞粘附分子(ICAM)-1及基质金属蛋白酶(MMP)等.且滑膜细胞的凋亡减少,从而导致滑膜的增生及破坏.那么这种炎性细胞因子增加及凋亡减少的机制如何,研究表明与信号传导系统--鞘磷脂通路有关.而丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及核因子Kappa B (nuclear factor κB,NF-κB)在该信号传导通路中起着重要的中介作用,MAPK及NF-κB被激活可上调许多炎性细胞因子基因的表达[1].本实验初步观察了佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜中MAPK及NF-κB的表达情况,以探讨RA滑膜病变的机制.

佐剂关节炎大鼠心功能损伤评价及代谢组学样品处理

类风湿关节炎不但引起关节的破坏,随着病程的延长会出现关节外病变,其基本病理表现为血管炎,心脏富含丰富结缔组织,从而而心脏受累几率增加,后期易出现心室衰竭,严重影响患者生命,既往研究多是以局部研究为主,缺乏将关节炎和心血管系统结合研究,从整体角度探求类风湿关节心脏损伤的内在机制尤为重要.代谢组学是以生物整体、系统的内源性代谢物质网络为对象,研究类风湿关节炎体系受外部刺激后所产生的所有代谢产物种类、数量及变化规律.因此,将代谢组学与类风湿关节炎心功能损伤的结合研究,势必开拓本领域研究范围.从类风湿关节炎模型系统评价心功能损伤,并从代谢组学技术角度阐述模型大鼠组织、体液样品的前期处理,对大鼠尿液、血液、滑膜及心脏组织的采集与储存方法进行总结.

佐剂性关节炎大鼠ApoA1 HDL血管内皮超微结构的变化及新风胶囊对其的影响

目的:观察佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠ApoA1、HDL和VEGF、E选择素及血管内皮超微结构的变化及新风胶囊(XFC)对其的影响.方法:用弗氏完全佐剂(Freund's complete adjuvant,CFA)诱发大鼠产生关节炎,观察AA大鼠ApoA1、HDL、VEGF、E选择素、细胞因子、关节肿胀度、关节炎指数(arthritis index,AI)及血管内皮超微结构的变化以及XFC对其的影响,并进行相关性分析.结果:AA大鼠ApoA1、HDL差异率的变化:模型组ApoA1、HDL升高率明显高于正常组、XFC组、MTX组(P＜0.05),与TPT组无显著差异(P＞0.05).XFC能下调AA大鼠ApoA1、HDL的表达(P＜0.05).XFC组与正常对照组无显著差异(P＞0.05).AA大鼠VECF、E选择素及IL-1β、IL-10、CRP的变化:与模型对照组相比,正常组、XFC组VEGF、E选择素、IL-1β、CRP显著降低(P＜0.01或P＜0.05),IL-10显著升高;XFC能显著下调AA大鼠VEGF、E选择素、IL-1β、CRP的表达,上调IL-10的表达.AA大鼠血管超微结构的变化:与正常对照组相比:模型组、XFC、甲氨喋呤(MTX)、雷公藤多苷片(TPT)组血管内皮超微结构均出现不同程度破坏:与模型对照组相比:XFC、甲氨喋呤(MTX)、雷公藤多苷片(TPT)组血管内皮超微结构改善明显,XFC组改善明显优于TPT组、MTX组.XFC对AA大鼠足跖肿胀度、关节炎指数的影响:与模型对照组相比,XFC、甲氨喋呤(MTX)、雷公藤多苷片(TPT)组肿胀度均明显下降(P＜0.05),与正常对照组相比无明显差异(P＞0.05);与模型对照组相比,各组AA大鼠的关节炎指数均显著降低(P＜0.05),XFC组与TPT组相比无明显差异(P＜0.05).AA大鼠ApoAl、HDL与足跖肿胀度、关节炎指数、VECF、E选择素及细胞因子的相关分析:模型对照组ApoA1、HDL与VEGF、E选择素、IL-1β呈显著负相关(P＜0.05或P＜0.01),与足跖肿胀度、关节炎指数、CRIP呈显著正相关(P＜0.05或P＜0.01),与IL-10无明显相关.结论:免疫应激引起AA大鼠ApoA1、HDL的改变,从大鼠ApoA1、HDL的改变与疾病的活动度、细胞因子的紊乱、血管内皮的损伤相关,ApoA1、HDL参与了血管内皮损伤的过程,XFC可下调ApoA1、HDL的表达及改善血管内皮的损伤,明显优与MTX组与TPT组.其机制可能是通过调节细胞因子间接下调ApoA1、HDL改善血管内皮的损伤.

马钱子配伍苏木对佐剂性关节炎大鼠炎症反应及血液流变学的影响

目的:观察马钱子配伍苏木(简称“马苏”)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用并探讨其机制.方法:马苏不同配比水煎剂连续灌胃给药32 d,游标卡尺测定大鼠两后足足跖厚度;摘取胸腺和脾,计算免疫器官系数;检测血流变和血清超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量,滑膜组织中皮质醇(Cor)和前列腺素E2(PGE2)含量;HE染色法观察滑膜组织病理变化.结果:0.11 g/kg马苏1∶4、1∶6煎剂可明显抑制AA大鼠关节肿胀度,保护滑膜组织和免疫器官,改善血流变、滑膜组织病理变化.结论:马苏煎剂对AA具有防治作用,其作用机制与改善血流变、清除自由基和炎性介质、恢复抗氧化酶活性有关.

有丝分裂原激活蛋白激酶p38在佐剂关节炎大鼠滑膜及肺组织的表达

目的 研究有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)-p38在佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜及肺组织中表达,探讨类风湿关节炎(RA)的发病机制.方法 给大鼠右后足跖部皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)复制RA的动物模型-AA.用原位杂交法检测p38mRNA在AA大鼠滑膜及肺组织中的表达.结果 AA大鼠滑膜和肺组织p38mRNA阳性细胞的平均灰度值(0～255,深～浅)明显低于正常大鼠(P＜0.01).AA大鼠滑膜的巨噬细胞,成纤维细胞和淋巴细胞的胞浆内均有p38mRNA的表达.肺组织中p38mRNA主要表达于巨噬细胞,单核细胞及浸润的淋巴细胞中. 结论 AA大鼠p38mRNA过表达与AA的滑膜及肺部病变有关,可能在RA的发病中有重要作用.

佐剂关节炎大鼠关节软骨明胶酶-B的表达及PRL的调节作用

目的 探讨佐剂关节炎(AA)大鼠关节软骨明胶酶-B的表达及催乳素(PRL)对其表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠40只均分为4组:正常对照组(A组),AA对照组(B组),高催乳素血症AA组(C组),低催乳素血症AA组(D组).放射免疫法测定各组血清PRL含量,明胶酶谱法测定MMP-9的活性,免疫组织化学法和Western Blot测定明胶酶-B的表达.结果 B组关节软骨明胶酶-B的活性及表达明显高于A组,C组明胶酶-B的活性及表达高,D组较B组减少,但仍高于A组,低于C组.结论 类风湿性关节炎(RA)时,明胶酶-B过表达,PRL上调明胶酶-B的表达,是其影响RA发病过程的一种可能机制.