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亚硫酸钠对人胚肾293细胞的毒性作用与胞内蛋白水平变化的关系
目的 研究食品添加剂亚硫酸钠(Na_2SO_3)对人胚肾293细胞(HEK293)的毒性作用与胞内重要蛋白质p53、增殖细胞核抗原(PCNA)和三磷酸腺苷(ATP)结合转运子G_2(ABCG_2)含量改变之间的关系.方法 采用细胞毒性试验(MTS)法观察Na_2SO_3对HEK293细胞的毒性作用,用蛋白印记法检测HEK293细胞中p53、PCNA和ABCG_2蛋白水平.结果 0.625～10 mmol/L NaSO_3处理组的细胞活性与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),说明NaSO_3对HEK293细胞有明显的毒性作用;蛋白印记分析发现高剂量组10 mmol/L Na_2SO_3可同时降低细胞内p53、PCNA和ABCG_2蛋白水平,而其余剂量组0.039～2.5 mmol/L Na_2SO_3对HEK293细胞内p53、PCNA和ABCG_2蛋白的水平无明显影响.结论 在本试验条件下,当Na_2SO_3的接触浓度达到一定水平时对人胚肾293细胞具有明显的毒性作用,这种毒性作用很可能与其降低肾细胞内的蛋白水平,干扰肾细胞的正常功能相关.
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不同浓度的多壁碳纳米管对HEK293细胞的影响
目的 研究多壁碳纳米管(MWCNT)对正常人胚肾293细胞的增生及细胞活性的影响.方法 采用离体培养的正常人胚肾293细胞株,接种人96孔板,细胞生长18h后加入不同浓度的单壁碳纳米溶液,碳纳米溶液作用于人胚肾293细胞48个h后,使用MTT(methyl thiazolyl tetrazoliun)比色法测每个孔的吸光值,计算人胚肾293细胞的生长抑制率并绘制细胞活性曲线.结果 不同浓度的多壁碳纳米管对人胚肾293细胞具有不同程度的抑制作用,且当其浓度达到0.5μg/ml时对细胞出现显著的抑制作用.结论 多壁碳纳米管能通过正常人胚肾293细胞膜进入细胞内,一定程度地影响细胞的活性,到达一定剂量时,细胞增生能力显著降低.因此,可以推测多壁碳纳米管对正常细胞生长作用有一定的安全剂量范围.
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茶多酚和维生素C对人胚肾293细胞缺糖缺氧损伤保护作用的比较
目的 从细胞水平研究茶多酚(TP)对人胚肾293细胞缺糖缺氧性损伤的保护作用,并与抗氧化剂维生素C(VC)进行比较.方法 采用缺糖培养基并以连二亚硫酸钠消除培养基中的氧,诱导产生缺氧缺糖损伤模型,测定细胞的存活率、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及总抗氧化能力,并计算IC50.结果 在细胞损伤模型中,TP和VC均表现出极强的抗氧化能力,TP能显著提高细胞的存活率、SOD活性和总抗氧化能力并抑制LDH的活性,TP的作用均大于VC.结论 TP和VC体外具有强大的自由基清除作用,且呈现明显的剂量依赖性,TP在细胞损伤模型中的抗自由基作用均大于VC.
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HEK-293细胞复苏培养及冻存
目的 通过对人胚肾293细胞的复苏培养及其冻存的研究,为进一步行干细胞标记实验奠定基础.方法 复苏培养人胚肾293细胞,倒置显微镜观察人胚肾293细胞的生长状况,计算细胞贴壁率,绘制细胞生长曲线,冻存保留细胞.结果 人胚肾293细胞在普通培养条件下生长良好,6h后大部分细胞已经贴壁,8h细胞已完全贴壁.结论 人胚肾293细胞采用改进方法复苏培养及冻存是简便可行的,为进一步行干细胞标记实验奠定了坚实的前期基础.
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磁性多肽纳米探针的新法制备及其在细胞分离中的应用
通过静电自组装方法,在磁性纳米颗粒表面依次修饰带正电的聚二甲基二烯丙基氯化胺(Poly(diallyldimethylammonium chloride), PDADMAC)和带负电的聚丙烯酸(Poly(acrylic acid), PAA),获得羧基化的磁性纳米复合粒子.进而将PAA上的羧基在1-乙基-3(3-二甲基胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1-ethyl-3(3-dimethylamino propyl)-carbodiimide ,EDC)活化下与多肽LyP-1(CGNKRTRGC)上的氨基发生反应,从而使多肽LyP-1成功地连接到磁性颗粒表面,获得的磁性多肽纳米颗粒可靶向分离肺腺癌SPCA-1细胞,但不识别正常人胚肾293细胞.
关键词： 磁性纳米颗粒 多肽 细胞分离 肺腺癌SPCA-1细胞 人胚肾293细胞 -
负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒对人肝癌细胞株增殖的影响
目的 包装负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒(Ad-miR149),并检测其对人肝癌细胞株增殖的影响.方法 全基因合成microRNA-149前体核苷酸序列,插入腺病毒穿梭质粒的多克隆位点,随后与包装质粒共转染人胚肾293细胞,包装负载microRNA-149的复制缺陷型腺病毒;采用MMT方法检测Ad-miR149对人肝癌细胞株增殖的影响.结果 成功包装负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒,采用倍比稀释法检测病毒滴度为5× 109 pfu/ml.采用电子显微镜技术,观察到HEK293细胞中大量包装病毒颗粒.采用PCR扩增,Ad-miR149可获得腺病毒及microRNA-149特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出腺病毒特异片段;采用MTT方法发现,Ad-miR149可显著抑制肝癌细胞株增殖.结论 成功包装负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒并初步证实其对肝癌细胞增殖的抑制作用.
关键词： 人胚肾293细胞 腺病毒 hsa-microRNA-149 微小RNAs 肝癌 -
先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A定点突变及蛋白表达研究
目的 构建先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体,并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达.方法 采用一步法构建SCN5 A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体PEGFP-delQKP-hH1,用脂质体转染法将野生型和突变型质粒分别转染HEK293细胞,激光共聚焦显微镜观察钠通道蛋白在HEK293细胞的表达与定位,Western blot检测其蛋白表达.结果 经电泳及DNA测序显示突变型1507-1509位点成功缺失9个碱基,野生型与突变型均在HEK293细胞膜上表达,且表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建钠通道基因SCN5 A-delQKP 1507-1509突变型真核表达载体,并在HEK293细胞中表达,为进一步研究其功能奠定基础.
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溶质转运体26A家族在HEK-293细胞中的表达和功能
目的：构建能在HEK-293细胞膜上表达的溶质转运体26A家族（SLC26A）的蛋白质粒，并对其生理功能进行检测。方法构建多种人类SLC26A转运体－绿色荧光蛋白的融合质粒，并使用瞬时转染技术将其表达在人胚肾293细胞（HEK-293）中。用全细胞膜片钳技术记录表达有SLC26A蛋白的HEK-293细胞的膜电容。结果每个SLC26A转运体均能在HEK-293细胞的细胞膜上表达，并表现出和离子相互作用的生理功能。SLC26A转运体与离子结合的数目与其在细胞膜上的表达程度正相关并具有一定的离子选择性。结论 SLC26A转运体家族能够在HEK-293细胞上表达并具有与转运离子结合的生理功能。在HEK-293细胞系中表达SLC26A转运体家族的研究方法，为进一步研究此家族成员转运功能及其转运机制提供了可能。
关键词： 人胚肾293细胞 溶质转运体26A家族 全细胞膜片钳 非线性膜电容 -
人CD7 cDNA在HEK293细胞中的表达
目的建立表达人白细胞分化抗原CD7蛋白的哺乳动物细胞模型,为深入研究CD7的功能奠定基础.方法采用PCR方法扩增CD7 cDNA,将目的片段定向克隆于真核表达载体pcDNA3,限制性内切酶酶切分析重组质粒并进行序列测定;通过电穿孔法将重组真核表达载体pcDNA3/CD7转染于人胚肾293细胞(HEK293),经G418筛选得到抗性克隆;利用FCM检测CD7分子在HEK293细胞的表达.结果得到了含CD7全长cDNA的重组真核表达载体pcDNA3/CD7.FCM分析表明:转染了pcDNA3/CD7的HEK293细胞表达人CD7蛋白.结论为深入研究CD7的作用机制提供了条件.
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负载人miR-29a复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定
目的 包装负载人miR-29a前体全长cDNA(pre-miR-29a)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR29a).方法 将pre-miR-29a全基因合成后,插入腺病毒穿梭质粒pDC315,与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1、3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装重组慢病毒Ad-miR29a,扩增、收集并纯化.对纯化后的Ad-miR29a进行滴度测定、感染性鉴定及PCR鉴定.结果 包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5 x 109pfu/ml.PCR鉴定Ad-miR29a可扩增出pre-miR-29a特异片段,而对照Ad-LacZ不能扩增出pre-miR-29a特异片段.Ad-miR29a感染人胃癌SGC-7901细胞后,可明显提高miR-29a的表达丰度.结论 成功包装了负载miR-29a的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究microRNAs在肿瘤发生发展中的作用,以及miR-29a在肿瘤治疗中的价值奠定了基础.
