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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对苯诱导大鼠骨髓细胞周期改变的体外试验
目的 探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza)对苯处理大鼠骨髓细胞(BMC)周期的影响及其作用机制.方法 以指数生长期的正常大鼠BMC作为空白对照组,以10 mmol/L苯处理BMC 24 h为苯处理组,苯处理后用10 μmol/L 5-aza处理72 h为苯+5-aza处理组;运用流式细胞术检测细胞周期变化,实时定量PCR检测Cyclin D1和p27mRNA表达的变化,Western blot检测Cyclin D1和p27蛋白表达的变化.结果 与对照组比较,苯处理组细胞S期比例显著增高42.5%,G1期比例下降31.5%(P<0.01),同时伴随Cyclin D1 mRNA和蛋白表达显著增加,p27 mRNA和蛋白的表达显著下降(P<0.01);与苯处理组相比,苯+5-aza处理组G1期比例上升52.7%,S期比例下降56.2%(P<0.01),同时伴随Cyclin D1、p27 mRNA和蛋白的表达发生显著性的逆转(P<0.01).结论 5-aza逆转苯所致的细胞周期改变,伴有Cyclin D1和p27表达改变.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 苯 细胞周期 实时定量PCR -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对苯代谢物抑制K562细胞转铁蛋白受体表达的干预作用
目的 观察苯代谢物对K562细胞转铁蛋白受体表达的影响以及DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷的干预作用.方法 K562细胞用苯代谢物处理72 h,处理期间的后48 h加入5-氮杂-2'-脱氧胞苷进行干预,然后利用荧光标记抗体结合流式细胞技术分析细胞表面转铁蛋白受体的表达,应用半定量反转录PCR技术分析细胞转铁蛋白受体mRNA的表达水平.结果 苯代谢物苯酚(200～800 μmol/L)、氢醌(10～40μmol/L)和1,2,4-苯三醇(5～20 μmol/L)均能浓度和时间依赖性抑制转铁蛋白受体在细胞表面的表达和浓度依赖性抑制细胞内转铁蛋白受体mRNA表达;而5-氮杂-2'-脱氧胞苷可显著拮抗苯代谢物抑制转铁蛋白受体表达的作用.结论 苯代谢物可抑制红系祖细胞转铁蛋白受体的表达,而DNA甲基化可能参与其中,转铁蛋白受体的表达抑制会影响细胞铁的摄入,从而影响血红素合成,继而抑制血红蛋白合成影响红系分化.
关键词： 苯代谢物 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 转铁蛋白受体 -
多发性骨髓瘤细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白7的基因表达及甲基化调控
目的:研究多发性骨髓瘤细胞株U266中胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)的表达及甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dc)对其增殖的影响.方法:体外培养多发性骨髓瘤细胞株U266,并以健康查体者的骨髓单个核细胞(N-BMMNC)作为正常对照,提取RNA,采用实时RT-PCR检测IGFBP7的表达,提取细胞DNA甲基化修饰后采用甲基化特异性PCR (MSP)分析其CpG岛的甲基化状态,不同浓度的甲基转移酶抑制剂5-aza-dc(5、10和20 μmol/L)处理U266细胞株,在48 h收集细胞,用实时RT-PCR和蛋白印迹法检测各组IGFBP7 mRNA和蛋白表达,流式细胞术检测药物处理前后各组细胞的细胞凋亡及细胞周期.结果:U266细胞IGFBP7 mRNA表达较正常骨髓细胞降低;MSP检测显示U266 IGFBP7的启动子CpG岛明显甲基化;不同浓度的5-aza-dc处理U266细胞株48 h后,IGFBP7的mRNA表达呈剂量依赖性增高(r=0.952,P＜0.05),IGFBP7蛋白表达呈剂量依赖性增高(r=0.983,P＜0.05);随着药物浓度增高,U266在G0/G1期细胞逐渐增多(r=0.966),细胞凋亡率逐渐增加(r=0.958).结论:U266细胞中IGFBP7 mRNA较N-BMMNC低表达,与CpG岛的异常甲基化相关,5-aza-dc可以使U266细胞中IGFBP7 mRNA和蛋白表达恢复,并通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡发挥其对U266细胞的生长抑制作用.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合古曲霉素A对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226细胞增殖、凋亡及DLC-1基因表达的影响
本研究旨在探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-cdR)联合组蛋白去乙酰化抑制剂古曲霉素A(TSA)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞的生物学活性及DLC-1基因表达调控的影响.5-Aza-CdR及TSA单独或联合作用于RPMI 8226细胞系,用CCK-8法检测细胞增殖活性,实时定量PCR(RT-PCR)检测药物作用后DLC-1基因表达情况,ELISA检测药物作用后RhoA及Rac1蛋白表达水平.结果表明,5-Aza-CdR及TSA对多发性骨髓瘤细胞具有明显生长抑制作用并呈剂量依赖性(P＜0.05);与5-Aza-CdR及TSA单药组比较,联合用药组对细胞的抑制作用更强,细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);对照组RPMI 8226细胞DLC-1基因微弱表达,5-AzacdR组DLC-1基因表达增强,且呈剂量依赖性重新表达(P＜0.05),TSA虽不能诱导基因重新表达,但两药联合应用时可明显增强细胞DLC-1基因的表达;实验组与对照组多发性骨髓瘤细胞相比,rhoA及Rac1蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论:5-Aza-CdR及TSA能有效的逆转RPMI 8226细胞DLC-1基因的表达,并明显增强对多发性骨髓瘤细胞的生长抑制及促凋亡作用.这种抑制作用可能与其抑制Rho/ROCK信号途径有关.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对SW48结肠腺癌细胞生物学行为的影响
目的:研究去甲基化5-氮杂2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对SW48结肠腺癌细胞株生长周期及凋亡的影响,探讨其临床治疗的可能性.方法:分别使用浓度为0.4,1.6,6.4,25.6,102.4umo1/L特异型DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理大肠腺癌细胞株.通过MTT来检测5-Aza-CdR对大肠癌细胞株存活率的影响.应用流式细胞检测甲基化5-Aza-CdR对SW48结肠腺癌细胞株生长周期及凋亡的影响.RT-PCR检测处理前后抑癌基因RASSF1AmRNA表达的改变.结果:5-氮杂2'-脱氧胞苷在1.6μmol/L就可以明显的抑制SW48结肠腺癌细胞的增殖,细胞周期中处于G0/G1期的细胞明显的增多,阻滞于G1期,凋亡率增高,而且以上作用与药物作用浓度,时间在一定范围内呈正相关.5-Az3-CdR处理后,无RASSF1A表达的SW48结肠腺癌细胞株可检测出基因RASSF1A的重新表达.结论:5-氮杂2'-脱氧胞苷可消除某些抑癌基因启动子甲基化状态,使其重新表达而抑制SW48结肠腺癌细胞株的生长,并促进其凋亡.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 SW48结肠腺癌细胞 细胞周期 细胞凋亡 -
5-Aza-dC和TSA对胃癌细胞系p16和hMLH-1基因甲基化水平及表达的影响
目的:探讨5-Aza-dC及TSA对胃癌细胞系中抑癌基因p16和hMLH-1基因甲基化水平和基因表达的影响.方法:5-Aza-dC及TSA处理体外培养的MKN-45细胞和MGC-803细胞,应用逆转录PCR(RT-PCR)法及甲基化特异性PCR(MSP)法分别检测两株细胞药物干预前后抑癌基因p16和hMLH-1的表达及甲基化情况.结果:MKN-45和MGC-803细胞系经TSA,5-Aza-dC及联合作用后使原来不表达或有弱表达的抑癌基因p16和hMLH-1重新表达或表达增强.胃癌细胞系MKN-45和MGC-803均显示p16、hMLH-1基因启动子区存在高甲基化,其中p16基因在两种胃癌细胞系中均表现为甲基化,hMLH-1基因在胃癌细胞系MGC-803中表现为甲基化而在胃癌细胞系MKN-45中表现为半甲基化.在5-Aza-dC及TSA的作用下,MKN-45和MGC-803细胞系中p16及hMLH-1基因的甲基化状态得到逆转.结论:胃癌细胞系中抑癌基因p16和hMLH-1基因启动子甲基化可能是导致其基因失活的主要原因,5-Aza-dC单独作用和5-Aza-dC及TSA联合应用效果相似,均能显著增强甲基化的肿瘤抑制基因的重新表达.
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5-Aza-CdR对人结肠癌裸鼠移植瘤抑制作用及其机制的研究
目的 观察DNA甲基化转移酶抑制剂5氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza CdR)对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用,探讨其与移植瘤细胞RUNX3基因表达和甲基化的相关性.方法 皮下接种SW480细胞建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型.应用随机数字表法分为3组,A组为对照组,腹腔注射磷酸盐缓冲液(2 μg/g);B组为低剂量实验组,腹腔注射5-Aza-CdR(1 μg/g);C组为高剂量实验组,腹腔注射5-Aza-CdR(2 μg/g).各组每周给药3次,连续给药4周,末次给药后处死裸鼠.观察各组移植瘤生长情况及病理形态学改变,并采用TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况,MSP法检测RUNX3基因的甲基化状态,Real time RT-PCR及免疫组化检测RUNX3的表达水平,分析组间统计学差异.结果 给药4周后,A组移植瘤体积为(3.63±1.00) cm3,B组(3.02±1.43) cm3,C组(1.80±0.80) cm3,C组与A、B组比较,差异有统计学意义,F=7.061,P=0.003.TUNEL法检测结果显示,C组移植瘤凋亡指数较高,为(5.66±0.70)％,与A组(1.14±0.45)％、B组(2.83±0.69)％比较,差异有统计学意义,F=53.631,P＜0.001.基因甲基化检测发现,A组有较高的RUNX3基因甲基化水平,而B组及C组的RUNX3基因的非甲基化务带明显扩增;而且在RUNX3基因表达上,A组mRNA相对表达量为14.84±0.53,明显低于B组的21.66±0.45、C组的46.72±2.64,差异有统计学意义,F=910.128,P＜0.001;A组RUNX3蛋白阳性表达率为(6.84±2.21)％,亦明显低于B组(14.54±3.98)％及C组(16.25±2.71)％,差异有统计学意义,F=10.745,P=0.004.结论 5-Aza-CdR可有效抑制人结肠癌裸鼠移植瘤的生长,诱导移植瘤细胞凋亡,其机制与逆转RUNX3基因的过甲基化状态,诱导移植瘤细胞RUNX3基因的重新表达相关.
关键词： 结肠肿瘤 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 RUNX3基因 DNA甲基化 免疫组织化学 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷序贯顺铂对MDA-MB-231细胞的影响
目的 探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(DAC)、顺铂(PDD)序贯应用对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖、周期及凋亡的影响.方法 实验分4组:对照组、DAC组(5μmol/L DAC处理)、PDD组(15 μmol/L PDD处理)、DAC序贯PDD组(2.5μmol/L DAC处理24h,再用8μmol/L PDD处理48 h).分别用MTT法、流式细胞仪测定各组MDA-MB-231细胞的增殖、周期及凋亡,并用金氏公式来评价两药联合效应.结果 DAC序贯PDD组较DAC组、PDD组增殖抑制率高(P＜0.01).DAC序贯PDD组48 h、72 h的q值分别为1.12、1.17,两药联合有增效作用.DAC序贯PDD组G1、S期细胞减少,G2/M期细胞增多,DAC序贯PDD组较DAC组、PDD组细胞凋亡率高(P＜0.01).结论 低剂量的DAC与PDD序贯应用可以抑制人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进MDA-MB-231细胞凋亡.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人结肠癌裸鼠种植瘤的抑制作用以及对种植瘤细胞CDH13表达和甲基化的影响
目的 探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌细胞及其裸鼠种植瘤生长的抑制作用,以及对种植瘤组织中CDH13基因表达和甲基化状态的影响.方法 在光镜下观察5 -Aza-CdR干预前后人结肠癌HCT116细胞的形态变化,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞生长变化.建立HCT116细胞裸鼠种植瘤模型,比较给药组(腹腔注射5-Aza-CdR)和对照组(注射等量磷酸盐缓冲液)裸鼠种植瘤生长的变化.采用甲基化特异性聚合酶链反应、逆转录聚合酶链反应、Western blot和免疫组织化学方法,检测5-Aza-CdR对裸鼠种植瘤组织CDH13基因5'CpG岛甲基化状态、mRNA和蛋白表达的影响.结果 5-Aza-CdR对HCT116细胞的生长有抑制作用,随浓度的增加而增强.用药28 d后处死裸鼠时,给药组荷瘤裸鼠体重为(18.06±1.29)g,对照组为(17.07±0.84)g,两组差异无统计学意义(P＞0.10).给药组的肿瘤体积为(907.00±87.29)mm3,对照组为( 1370.93±130.20)mm3,两组差异有统计学意义(P＜0.01).给药组各肿瘤组织中出现非甲基化条带,对照组仅有甲基化条带扩增.给药组结肠癌种植瘤CDH13 mRNA和蛋白表达阳性,对照组未见CDH13mRNA和蛋白表达.结论 5-Aza-CdR能抑制人结肠癌细胞及其裸鼠种植瘤的生长,诱导种植瘤细胞CDH13表达,其机制可能为5-Aza-CdR使甲基化的CDH13启动子去甲基化,CDH13基因重新表达,从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖.
关键词： 结肠肿瘤 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 CDH13 DNA甲基化 -
DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷对食管鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响
目的 探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对食管鳞状细胞癌细胞株KYSE140和KYSE150生物学行为的影响.方法 KYSE140、KYSE150细胞分别设空白组、对照组和实验组,空白组细胞不做处理,对照组细胞中加入2 μmol/L二甲基亚砜(DMSO),实验组应用浓度为1、2、3、4 μmol/L 5-Aza-dC分别作用24、48、72、96 h.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对细胞增殖能力的影响,选择药物作用的佳浓度和时间;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变;流式细胞术检测药物对细胞凋亡和细胞周期的影响;蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3和周期调控相关蛋白CCNB-1、CCNE-1的表达.结果 MTT法检测结果显示5-Aza-dC对KYSE140和KYSE150细胞佳作用时间为96 h,佳浓度为4 μmol/L.在此条件下,肿瘤细胞迁移、侵袭能力下降,空白组、对照组、实验组KYSE140和KYSE150细胞的迁移细胞数分别为(193.3±8.6)、(184.0±10.4)、(61.7±7.1)个和(112.0±6.4)、(101.3±7.9)、(26.3±5.7)个,侵袭细胞数分别为(47.3±7.3)、(38.7±5.1)、(8.0± 3.9)个和(83.3±6.8)、(74.7±5.7)、(21.0±2.7)个,差异均有统计学意义(均P<0.05).5-Aza-dC促进KYSE140和KYSE150细胞凋亡,空白组、对照组、实验组细胞凋亡率分别为(2.8±0.3)%、(11.2± 0.7)%、(18.6±0.6)%和(2.7±0.4)%、(9.8±0.4)%、(17.7±0.5)%,实验组较空白组、对照组G2/M期细胞比例增加,差异均有统计学意义(均P<0.05).实验组中凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3剪切作用增强,周期相关蛋白CCNB-1表达升高,CCNE-1表达降低.结论 5-Aza-dC可以抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖,促进其凋亡.
关键词： 食管鳞状细胞癌 DNA甲基化 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 细胞凋亡 细胞周期 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合曲古菌素A对人胃癌细胞株化疗敏感性的协同增强作用
目的 探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CAR)联合曲古菌素A(TSA)协同增强人胃癌细胞MKN-74化疗敏感性的作用及机制.方法 以MTT法观察5-Aza-CAR和(或)TSA与氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇(PTX)、奥沙利铂(OXA)、伊立替康代谢产物SN38或吉西他滨(GEM)联合应用对MKN-74细胞生长的抑制;流式细胞术分析细胞凋亡情况;RT-PCR检测p21、caspase3、Rb和p16基因表达,经Bandsean 4.3分析软件进行条带灰度分析,计算目的 基因与GAPDH灰度比值.结果 5-Aza-CdR联合TSA可进一步增强5-Aza-CdR对5-FU、PTX、OXA或GEM的化疗增敏作用,也可以增强TSA对OXA、GEM的化疗增敏作用.TSA+OXA组、5-Aza-CdR+OXA组与5-Aza-CAR+TSA+OXA组的细胞凋亡率分别为28.07%±2.37%、25.33%±2.84%及38.37%±3.23%;TSA+GEM组、5-Aza-CdR+GEM组与5-Aza-CAR+TSA+GEM组的细胞凋亡率分别为17.20%±2.07%、19.30%±2.95%、29.57%±3.10%(P＜0.05),说明5-Aza-CdR联合TSA协同可以促进OXA或GEM诱导MKN-74细胞凋亡.5-Aza-CAR联合TSA还可以增强caspase3、p16、Rb和p21基因的表达,与对照组(以其灰度值为1.00)相比,4种基因的表达分别为2.67、2.28、2.39和2.75.结论 5-Aza-CAR联合TSA可能通过协同调控基因表达、诱导细胞凋亡,提高胃癌细胞的化疗敏感性.
关键词： 胃肿瘤 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 曲古菌素A 药物疗法 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷体外对黑素瘤细胞系肿瘤相关抗原和免疫分子表达的影响
目的 探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)对4种体外培养建系的黑素瘤细胞肿瘤相关抗原和免疫分子表达水平的影响.方法 将手术切除或细针穿刺活组织检查获得的黑素瘤组织体外培养建系;应用流式细胞术检测5-aza-CdR用药后黑素瘤细胞表面人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-Ⅰ类、-Ⅱ类、-A2以及细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)表达的变化;采用实时定量RT-PCR检测用药后一系列重要的肿瘤相关抗原表达的变化.结果 5-aza-CdR用药后,4种黑素瘤细胞系HLA-Ⅰ类、-Ⅱ类和-A2的表达与对照组相比无明显变化;TC12A和TC13细胞ICAM-1表达明显升高;TC12A、TC13和TC69B细胞肿瘤相关抗原黑素瘤抗原基因(MAGE)-4和NY-ESO-1的表达水平明显升高.结论 5-aza-CdR不影响黑素瘤细胞HLA的表达水平,对ICAM-1和某些黑素瘤相关肿瘤抗原的表达有明显上调作用,提示化疗药物5-aza-CdR不会阻碍抗肿瘤免疫中黑素瘤细胞的抗原呈递能力,为化疗联合免疫治疗肿瘤提供了理论前提.
关键词： 黑色素瘤 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 HLA抗原 ICAM-1 肿瘤相关抗原 -
关键词：
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人胃癌细胞株BGC803生长及死亡相关蛋白激酶基因表达的影响
目的：探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人胃癌细胞BGC803增殖、凋亡及对死亡相关蛋白激酶(DAPK)mRNA表达水平的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理BGC803细胞，设立不含5-Aza-CdR的对照组及3个实验组：5-Aza-CdR 1μmol/L组、5-Aza-CdR 5μmol/L组、5-Aza-CdR 10μmol/L组。CCK-8检测细胞的增殖情况，AnnexinⅤ/PI双染及流式细胞术检测药物处理后细胞凋亡的情况，RT-PCR检测用药前后DAPK mRNA的表达水平变化。结果实验组BGC803细胞增殖速度显著低于对照组，细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。RT-PCR结果显示，BGC803细胞中DAPK基本无表达，5-Aza-CdR处理后，细胞中DAPK mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05)。结论5-Aza-CdR抑制BGC803细胞增殖，并促进细胞凋亡，可能与其诱导DAPK基因表达有关。
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 死亡相关蛋白激酶 胃癌 细胞增殖 细胞凋亡 -
甲基化抑制剂对肾癌细胞株中γ-caenin蛋白表达的影响
目的 研究甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾癌A498细胞增殖及γ-连环蛋白(γ-catenin)表达的影响.方法 使用不同浓度(10-7、10-6、10-5 mol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理A498肾癌细胞株.MTT检测5-Aza-CdR对肾癌细胞株A498抑制作用.细胞免疫化学检测5-Aza-CdR处理A498肾癌细胞株后γ-catenin表达的变化.结果 5-Aza-CdR能明显抑制肾癌细胞的增殖,且与药物浓度及作用时间有关.药物处理后γ-连环蛋白表达增加.结论 γ-catenin蛋白表达受甲基化的抑制,提示5-Aza-CdR可使γ-catenin基因去甲基化而抑制A498肾癌细胞株增殖.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 肾癌A498细胞株 γ-连环蛋白 免疫组化 -
5-aza-2'-deoxycitydine影响胃癌细胞MGC803对奥沙利铂敏感性及其机制
目的:探讨DNA甲基化抑制剂5-aza-2'-deoxycitydine(5-aza-dC)影响胃癌细胞MGC803对奥沙利铂(Oxaliplatin,OXA)的化疗敏感性,及其与Ⅱ相代谢解毒酶GSTP1表达的相关性.方法:5-aza-dC处理MGC803,RT-PCR和Western-Blot方法检测GSTP1基因mRNA和蛋白表达.MSP法分析GSTP1基因启动子区甲基化状态.MTT法检测药物敏感性.结果:5-aza-dC诱导GSTP1基因启动子去甲基化,上调GSTP1 mRNA和蛋白表达,降低了MGC803细胞对OXA的敏感性,24h IC50值分别为对照组(13.15±1.7)μg/L、1μM 5-aza-dC处理组(24.54±2.1)μg/L、5μM 5-aza-dC处理组(30.81±1.3)μg/L及10μM 5-aza-dC处理组(51.72±1.6)μg/L,P值＜0.01,差异有统计学意义.结论:5-aza-dC降低胃癌细胞对奥沙利铂的敏感性,其机制与增强GSTP1表达有关.
关键词： 胃癌 DNA甲基化 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 谷胱甘肽转硫酶 奥沙利铂 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合紫杉醇对中分化胃腺癌细胞株SGC-7901的作用
目的:探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)联合紫杉醇对中分化胃腺癌细胞SGC-7901作用,及对抑癌基因PTEN和E-cadherin(E-cad)表达的影响.方法:应用MTT、流式细胞术、RT-PCR方法检测5-Aza-CdR和紫杉醇单用和联用后对细胞的增殖抑制、周期分布、凋亡率,以及对抑癌基因PTEN和E-cad mRNA表达的改变.结果:紫杉醇和5-Aza-CdR可抑制胃腺癌细胞的生长,呈浓度依赖性.联合作用后,协同效应明显.紫杉醇可以使细胞阻滞在G2/M期,而5-Aza-CdR可以使细胞阻滞在S期,联合作用后,细胞同时阻滞在S和G2/M周期,凋亡率也增加.紫杉醇对抑癌基因PTEN,E-cad mRNA的表达与对照组相比差异无显著性,5-Aza-CdR可使其重新表达,两药联合作用后,PTEN和E-cad的表达量增多.结论:5-Aza-CdR可增强紫杉醇对胃癌细胞的增殖抑制作用;5-Aza-CdR可以使胃癌细胞阻滞在S期,而紫杉醇使细胞阻滞在G2/M期,两药联合应用后,胃癌细胞在这两个周期的分布以及凋亡率都明显高于单药的应用;5-Aza-CdR可以使胃癌细胞中的抑癌基因PTEN mRNA和E-cad mRNA重新表达,而紫杉醇则不能,但能促进5-Aza-CdR对抑癌基因的重新表达作用.
关键词： 胃肿瘤 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 紫杉醇 上皮细胞钙黏蛋白 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对胶质瘤细胞系U251凋亡的调节
目的 甲基化与胶质瘤的发生和发展关系密切,本研究的目的是探讨去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine)对胶质瘤细胞系凋亡的调节.方法 将浓度分别为10 μM、25μM和50μM的5-氮杂-2'-脱氧胞苷加入胶质瘤细胞系U251细胞中,应用RT-PCR法检测U251细胞系经不同浓度的5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后细胞内胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,应用流式细胞术(Annexin V-FITC染色)检测不同药物浓度处理组中U251细胞的凋亡率.结果 5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后,U251细胞内caspase-3的转录水平明显上调(P＜0.01),具有较为明显的剂量依赖性.流式细胞术结果显示U251细胞经5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后细胞的凋亡率显著上调,且具有剂量依赖性.结论 5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理具有剂量依赖性上调胶质瘤细胞系U251 caspase-3表达,促进细胞凋亡.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 胶质瘤 凋亡 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对子宫内膜癌细胞系HEC-1A、Ishikawa细胞增殖及胰岛素样生长因子结合蛋白7表达的影响
目的 研究甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对子宫内膜癌细胞系HEC-1A、Ishikawa细胞增殖及胰岛素样生长因子结合蛋白7 (IGFBP7)表达的影响.初步探讨甲基转移酶抑制剂5-Aza-dC治疗子宫内膜癌的可能性.方法 体外培养子宫内膜癌细胞系HEC-1A、Ishikawa细胞,采用CCK-8法检测不同浓度(2.5 μmol/L、5μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L)甲基转移酶抑制剂5-Aza-dC在不同时间(24 h、48 h、72 h)对HEC-1A、Ishikawa细胞的生长抑制作用,实时RT-PCR法及蛋白印迹法分别检测5μmol/L 5-Aza-dC对HEC-1A、Ishikawa细胞中IGFBP7 mRNA和蛋白表达的影响.结果 ①甲基转移酶抑制剂5-Aza-dC在一定浓度范围内能够抑制HEC-1A、Ishikawa细胞的增殖,且具有时间和剂量依赖性,差异均具有统计学意义(P值均＜0.05).②5μmol/L甲基转移酶抑制剂5-Aza-dC处理HEC-1A、Ishikawa细胞72 h后,IG.FBP7 mRNA和蛋白的表达均上调,差异具有统计学意义(t=8.42,P＜0.05;t=6.01,P＜0.05;t=21.77,P＜O.05;t=27.90,P＜0.05).结论 甲基转移酶抑制剂5-Aza-dC能够上调IGFBP7基因表达进而抑制子宫内膜癌细胞系HEC-1A、Ishikawa细胞的生长,异常的DNA甲基化可能参与IGFBP7基因表达调控.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对卵巢癌细胞系CP70顺铂耐药性的逆转作用
目的:探究5-氮杂-2'-脱氧胞苷体外逆转卵巢癌铂类耐药细胞系CP70对顺铂的耐药性,并探讨与SOCS-2表达的关系.方法:免疫细胞化学和Western blot方法检测使用5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理细胞前后细胞内SOCS-2表达水平.MTT法检测单独使用5-氮杂-2'-脱氧胞苷或顺铂及两药联合使用对CP70细胞的抑制作用.结果:两药联合处理CP70细胞后顺铂耐药逆转倍数为1.34、1.63、2.34,联合处理组的细胞中SOCS-2表达明显升高.结论:5-氮杂-2'-脱氧胞苷可以部分逆转CP70细胞对顺铂的耐药性,且此作用可能与增加细胞的SOCS-2表达有关.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 卵巢癌 顺铂 耐药性
