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鼻咽癌基因治疗研究的新进展
目的:总结鼻咽癌基因治疗研究进展,为临床治疗及基础研究提供参考.方法:在万方、中国知网、pubmed数据库检索近年关于鼻咽癌基因治疗的研究资料,并进行综合分析.结果:鼻咽癌基因治疗在基础研究方面取得满意的效果,在临床应用中副作用少、医从性好.具体方法有免疫基因治疗,自杀基因治疗,基因替代治疗,基因沉默治疗和反义基因治疗.结论:基因治疗将成为鼻咽癌治疗的重要手段.
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KDR启动子驱动双自杀基因靶向杀伤人胃癌细胞的作用
目的:探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的双自杀基因体系对人胃癌细胞SCG7901的靶向杀伤作用.方法:应用重组腺病毒AdEasv-KDR-CDglyTK体外感染实验组SCG7901细胞株和对照组HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞杀伤效应及其旁观者效应.结果:携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SCG7901和未转染SCG7901的细胞在细胞生长方面无显著性差异(t=0.224,P=0.823).已转染腺病毒的HepG2细胞和未转染HepG2的细胞在细胞生长方面也无显著性差异(t=0.120,P=0.904).在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性,SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性(F=109.43,P=0.000).融合基因的疗效优于单一自杀基因(F=162.22,P=0.000).将感染腺病毒细胞与未感染细胞以不同比例混和培养,观察到该体系明显的旁观者效应.结论:KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并存在旁观者效应.
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大肠癌的基因治疗
大肠癌(colorectal cancer,CRC)是威胁人类生存的恶性肿瘤之一.由于大肠癌比较适于基因治疗,因此他是目前大肠癌研究的热点问题之一.基因治疗主要包括自杀基因治疗,与原癌基因和抑癌基因有关的基因治疗,免疫基因治疗和联合治疗等.有些研究已经进入临床试验阶段.本文介绍了大肠癌的基因治疗研究进展和存在的问题,为今后的医疗科研工作提供新的思路.
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胰腺癌等肿瘤的免疫治疗
胰腺癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,早期诊断率和手术切除率均较低,预后差,因此,开展胰腺癌基因免疫治疗研究具有特殊意义,特别是多基因转染胰腺癌形成的特异性胰腺癌瘤苗对胰腺癌的治疗,免疫基因治疗主要是有效地增强机体自身的抗肿瘤作用、清除术后残留肿瘤细胞、修复肿瘤突变基因.目前肿瘤基因治疗常用的策略有:细胞因子导入,肿瘤疫苗制备,自杀基因治疗,利用反义寡核苷酸技术封闭活化癌基因以及向靶组织转移抑癌基因等.现就wtP53、GM-CSF、B7-1对胰腺癌和相关肿瘤的基因免疫治疗作用进行综述.
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自杀基因治疗恶性肿瘤的载体效率及基因表达
如何利用基因载体选择性转移治疗基因,并促使治疗基因在靶细胞中充分表达是自杀基因治疗恶性肿瘤的关键所在.随着研究的深入发展,各种基因载体的多方面特性逐渐展现在人们面前,其携带外源基因进入靶细胞,并在靶细胞中表达的过程也逐步被更清楚了解.这些新认识指导科学者们在选择及改造载体,调整各种影响因素等方面作了大量尝试,取得诸多新认识,大大加强了自杀基因针对肿瘤细胞的靶向性、高效性表达.
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双自杀基因重组腺病毒对胰腺癌细胞特异性杀伤作用
目的 研究腺病毒介导的KDR启动子驱动CD/TK融合基因系统(Ad-KDR-CDTK)对胰腺癌细胞Capan-2特异性的杀伤作用.方法 重组腺病毒体外感染表达KDR的Capaw2细胞株,用不表达KDR的肝癌细胞HepG2做对照.观察其感染效率并以RT-PCR方法 检测转基因细胞CDTK的表达,然后给予不同浓度的前药更昔洛韦(ganciclovir,GCV)和5-氟胞嘧啶(5-fluorocy-tosine,5-FC),MTT法观察该体系对Capan-2和HepG2细胞生长增殖的影响及其旁观者效应;电镜观察细胞的病变;流式细胞仪检测细胞周期的变化和DNA含量的变化.建立Capan-2裸鼠皮下移植瘤模型,瘤内注射Ad-KDR-CD/TK,腹腔注射前药GCV(50 mg·kg-1·d-1)和5-FC(500 mg·kg-1·d-1)14 d,观察肿瘤生长抑制效应.结果 腺病毒对两种细胞株的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增.RT-PCR方法 检测发现转染Ad-KDR-CDTK的Capan-2细胞有目的 基因表达.MTT法检测显示前药呈剂量依赖性抑制Capan-2生长,而不表达KDR的肝癌细胞HepG2对前药不敏感,且观察到该体系对Capan-2明显的旁观者效应.电镜下可见Capan-2有凋亡改变.用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;细胞周期分析显示治疗后细胞G0-G1期比率增多,G2-M及S期细胞减少.在Capan-2裸鼠移植瘤模型中,该双自杀基因系统能够显著抑制肿瘤的生长.结论 KDR启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤胰腺癌细胞Capan-2,诱导胰腺癌细胞凋亡,并可显著抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长.
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CD/5-FC自杀基因治疗胰腺癌的研究进展
胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,早期诊断困难,手术切除率低,预后差,发病率近年来有上升趋势,积极探讨胰腺癌的早期诊断和治疗方法是各国学者的研究方向.
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腺病毒驱动KDR启动子介导CD/TK融合基因系统对肝癌细胞的靶向杀伤作用
目的 研究腺病毒介导的KDR启动子驱动CD/TK双自杀基因系统(AdKDR-CDglyTK)对肝癌细胞选择性杀伤作用.方法 将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的BEL-7402细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5-FC和/或GCV,观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应.结果 所得病毒滴度为2.5×1012 pfu/ml.两种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的递增而增加.RT-PCR方法检测发现:感染AdKDR-CDglyTK的BEL-7402有目的基因CDglyTK的表达,感染AdKDR-CDglyTK的LS174T细胞无目的基因表达.表达KDR的BEL-7402细胞对前药具有较高的敏感性,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(F=750.03,P＜0.001).融合基因的疗效优于任一单自杀基因(F=275.89,P＜0.05).将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养,观察到该体系明显的旁观者效应.结论 KDR基因启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达KDR的肝癌细胞.
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Ad-KDR-CDglyTK双自杀基因系统对荷瘤鼠胃癌体内抑制实验
目的:探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对荷瘤鼠胃癌的体内抑瘤作用.方法:建立胃癌移植瘤动物模型,当肿瘤直径达0.5 cm时,随机分为A组:空白对照,不施加任何处理；B组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC和GCV;C组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK;D组:仅注射前药5-FC和GCV.治疗过程中绘制肿瘤生长曲线,观察该治疗体系的体内抑瘤效应；通过RT-PCR检测肿瘤组织内融合基因的表达；采用免疫组化行微血管密度检查.结果:接种肿瘤细胞后13d,裸鼠出现右臀区皮下瘤结节.治疗结束后A、B、C、D组间瘤质量差异有统计学意义(F=12 727.42,P=0.000),B组明显缩小.重组腺病毒转基因荷瘤鼠胃癌组织内可检测到CDglyTK融合基因产物的表达.肿瘤组织的MVD值在A、B、C、D组之间差异有统计学意义,F=27.04,P=0.000.结论:KDR启动子驱动双自杀基因体系对裸鼠皮下移植瘤有明显的抑瘤作用,表现为肿瘤的生长抑制和瘤体微血管密度减少等.
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wt-p53基因联合HSV-TK/GCV对C6鼠胶质瘤杀伤作用的实验研究
目的研究wt-p53基因联合自杀基因治疗恶性胶质瘤的可行性.方法体外试验以腺病毒为载体转导wt-p53和HSV-TK入C6鼠胶质瘤细胞,给以不同浓度的GCV,以MTT法检测细胞生存率.体内实验以C6鼠胶质瘤细胞和SD大鼠建立动物模型,原位注射腺病毒为载体的wt-p53和HSV-TK基因,腹腔给以GCV(15mg.kg-1day-1×14).观察荷瘤鼠生存期;强化MRI动态监测荷瘤鼠肿瘤大小;TUNEL法检测凋亡.结果wt-p53基因明显提高鼠胶质瘤细胞对HSV-TK/GCV的敏感性,p53联合HSV-TK基因转染C6的GCV ID100=0.01μg.ml-1,而单独HSV-TK转染C6的GCVID100=1μg.ml-1,约提高100倍;p53基因还可使C6细胞凋亡增加.体内p53基因联合HSV-TK/GCV治疗使荷瘤鼠生存期明显延长,凋亡明显增加(P＜0.001);强化MRI示4周肿瘤消失.结论p53基因和HSV-TK基因的联合基因治疗可作为临床上优化自杀基因治疗方案的一种可能选择.
关键词： 胶质瘤 wt-p53 HSV-TK/GCV 自杀基因治疗 联合基因治疗 -
KDR启动子驱动双自杀基因诱导胃癌细胞凋亡的实验研究
目的 探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对胃癌细胞凋亡的诱导作用.方法 以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV和(或)5-FC,观察该体系对SCG7901细胞的杀伤效应.分别应用透射电镜、Hoechest33258/PI染色、流式细胞仪观察细胞超微结构、细胞凋亡率和细胞周期的变化.结果 携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体转染后,95%以上SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感(P＜0.01).两种前药联合应用优于任一前药单独应用的疗效(P＜0.01).流式细胞术检测表明该体系可抑制SCG7901细胞DNA的合成,表现为S期细胞比例增高及G2期细胞减少.同时,Hoechest33258/PI染色和电镜下可见SCG7901有凋亡改变.结论 KDR启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并且该体系可以诱导胃癌细胞凋亡.
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HSV-TK/GCV自杀基因系统联合γ射线放射治疗宫颈癌的实验研究
目的探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统协同60Co γ射线放射治疗对人宫颈癌细胞系的体内外联合杀伤作用,以及HSV-TK/GCV对放射治疗的增敏作用.方法分别以HSV-TK/GCV、60Coγ射线放射治疗及两者联合治疗人宫颈癌HeLa细胞系和裸鼠宫颈癌移植瘤模型,比较治疗效果;利用增敏效应比值(E/O)、克隆形成实验评价体内外HSV-TK/GCV对放射敏感性的影响.结果在体外实验中,自杀基因对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制率为45.8%,单纯放疗的抑制率为42.4%,而基因治疗与放疗联用的抑制率为87.5%,与前两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01);且联合治疗组对射线敏感性较单独治疗组明显增加,克隆形成率明显下降(P＜0.05);在体内实验中,单纯基因治疗与放疗对HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑瘤率分别为39.5%和35.8%,而基因治疗放疗联用的抑瘤率达到87.9%,与前两者比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);增敏效应比值(E/O)为3.2(＞ 1.4),提示HSV-TK/GCV对放疗具有增敏作用.结论HSV-TK/GCV自杀基因系统具有放射增敏作用,二者联合治疗可作为宫颈癌综合治疗的有效补充方法.
关键词： 单纯疱疹病毒-胸苷激酶 人宫颈癌 自杀基因治疗 放射治疗 -
肝癌自杀基因治疗新进展
自杀基因治疗是指利用基因工程技术将某些细菌或病毒基因<目的基因)与载体相结合,并导入肿瘤细胞中,在一定条件下目的基因持续高效表达,从而杀伤肿瘤细胞,所以又称为"病毒导向酶解药物前体疗法.这些病毒或细菌的基因表达产物(酶)能导致受体细胞的死亡,因此将这些基因称为自杀基因.本文就肝癌自杀基因治疗的新进展作一综述.
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骨肉瘤基因治疗研究进展
骨肉瘤是一种临床常见恶性骨肿瘤, 约占所有骨肿瘤的20%.其恶性程度高,好发于青少年,易复发和转移,预后较差.随着分子生物学理论和技术水平的提高, 尤其是肿瘤分子生物学的发展, 骨肉瘤的发生机制在分子水平有了一定的认识.目前,人们针对骨肉瘤及其肺转移已研究开展了免疫基因治疗、反义基因治疗、抑癌基因治疗、自杀基因治疗及其联合基因治疗或联合其他方法的治疗等诸多基辅前景的肿瘤基因治疗方法,现综述如下.
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自杀基因治疗肿瘤研究现状
自杀基因疗法是指利用转基因方法,将哺乳动物不含有的药物酶基因转入肿瘤细胞内,该基因表达的产物可以将无毒性的药物前体转化为有毒的药物,影响细胞的DNA合成,从而引起该细胞死亡.基因转导的方法有多种,如基因直接注射、电穿孔、脂质体转导,磷酸钙沉淀以及病毒载体转导方法.因为常以病毒作为载体,称为病毒介导的酶解药物前体治疗.
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尿嘧啶核苷磷酸化酶的表达在肿瘤诊断和治疗中的研究进展
尿嘧啶核苷磷酸化酶(Uridine Phosphorylase,UPase)是嘧啶补救通路中的一个关键酶,具有可逆性,催化尿苷转变为尿嘧啶的异化和磷酸化,调控血浆和组织中尿嘧啶核苷浓度的自我平衡,以及调控正常和异常新生组织中氟尿嘧啶的细胞毒作用,激活细胞内氟尿嘧啶.大多数正常组织中有UPase的存在,嘧啶核苷磷酸化酶包括UPase和胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(TP),在许多类型的实体肿瘤组织中高度表达,且其表达水平与疾病的进展有关,并可能是肿瘤细胞对嘧啶核苷类似物细胞毒性敏感的机制之一.以UPase、TP和尿嘧啶磷酸核糖基转移酶(UPRT)或称乳清酸磷酸核糖基转移酶(OPRT)基因转染为基础,激活氟尿嘧啶,导致高水平抗肿瘤活性的自杀基因,将是未来肿瘤治疗的研究方向.本文就UPase在肿瘤诊断和治疗方面的研究进展作一综述.
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HSV-TK和IL-12联合基因对宫颈癌的杀伤作用
目的 观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统联合IL-12基因对人宫颈癌hela细胞系体外杀伤作用.方法 采用脂质体转染法将HSV-TK及IL-12联合基因转染hela细胞,并将其用于体外实验,观察GCV对转染联合基因的Hela的杀伤作用及旁观者效应等.结果 加入GCV后体外培养联合基因转染的Hela细胞,24 h后细胞明显发生形态上改变,正常对照组细胞生长旺盛;随着GCV剂量的加大,转染联合基因的Hela细胞的存活率呈逐渐下降的趋势,GCV对转染细胞的杀伤作用较对正常细胞的杀伤作用明显增强.并观察到自杀基因系统具有明显的旁观者效应.结论 脂质体可介导HSV-TK及IL-12联合基因转入人宫颈癌hela细胞并获得稳定表达,GCV对HSV-TK及IL-12联合基因转染的hela细胞具有明显的杀伤作用.
关键词： 单纯疱疹病毒胸苷激酶 人宫颈癌 自杀基因治疗 -
与放疗联合的自杀基因治疗的现状
1 自杀基因的概念目前国际上已有200多个基因治疗项目应用于临床,其中恶性肿瘤的基因治疗占了2/3,而自杀基因治疗又占恶性肿瘤基因治疗的1/5以上.
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基因导向的药物前体治疗在胰腺癌中的应用
基因导向的酶解药物前体治疗(gene directed enzymeprodrug therapy,GDEPT)亦称自杀基因治疗,即将非哺乳类的基因导入肿瘤细胞,该基因表达时可将全身给药的非毒性药物前体转变成毒性代谢产物,在肿瘤局部产生高浓度毒性作用以杀伤肿瘤细胞而全身反应较轻.胰腺癌的GDEPT治疗落后于肺癌、脑肿瘤、大肠癌及乳腺癌等疾病,目前尚处于体外和少部分小动物的体内实验研究阶段.本文就这一方面的研究现状作一综述.一、单纯疱疹病毒(HSV)-胸苷激酶(TK)基因 HSV Ⅰ型或Ⅱ型TK基因编码的TK能特异性地将核苷类似物,如羟甲基无环鸟苷(GCV)磷酸化,其产物在胞内进一步代谢成三磷酸GCV,后者可抑制细胞DNA聚合酶并作为DNA合成的终结者.
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胞嘧啶脱氨酶基因突变体D314A对人结肠癌细胞的抑制作用
目的:构建大肠埃希菌胞嘧啶脱氨酶(E. coli cytosine deaminase,EC-CD)基因突变体D314A(即EC-CD基因开放阅读框第314位氨基酸由天冬氨酸突变为丙氨酸)并研究其抗肿瘤作用.方法:构建含EC-CD基因的真核表达质粒pcDNA3.1-CD~(wt),应用点突变技术将pcDNA3.1-CD中EC-CD基因开放阅读框第314位氨基酸的碱基由A突变为C,即构成pcDNA3.1-CD~(D314A).用Lipofectamine ~(TM) 2000将EC-CD基因或D314A基因转入人结肠癌细胞系LoVo细胞,以G418筛选出稳定表达的阳性克隆LoVo-CD~(wt)及LoVo-CD~(D314A).应用MTT法检测EC-CD基因及D314A基因对LoVo细胞的直接杀伤作用及旁观者效应.结果:成功构建EC-CD基因突变体D314A并经测序确认.LoVo细胞转染EC-CD基因及D314A基因后均能表达相应的mRNA,Lovo-CD~(D314A)细胞对5-FC的IC_(50)为(85.13±0.60)mmol/L,显著低于LoVo-CD~(wt)细胞的(689.76±0.45)μmoL/L,(P=0.000);在旁观者试验中,当LoVo-CD~(wt)细胞和LoVo-CD~(D314A)细胞比例均为30%时,细胞存活率分别为(48.5±0.49)%与(17.3±0.40)%(P=0.000).结论:EC-CD基因突变体D314A的抗LoVo细胞作用显著强于野生型EC-CD基因,有望成为新的肿瘤基因治疗候选基因.
