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十八烯酸对人胃癌组织的靶向作用
目的 研究十八烯酸对人胃癌移植瘤生长抑制的作用机制.方法 取胃癌患者的肿瘤组织,移植到重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠上,按照体重将移植胃癌组织的SCID小鼠随机分为3组(每组10只):模型组(腹腔注射等量菜籽油)、对照组(5-氟尿嘧啶:100 nmg·kg-1)和3个质量分数(十八烯酸:0.2,0.4,0.8 g· kg-1)实验组,连续4周.用酶联免疫吸附法检测肿瘤组织中环磷酸腺苷(cAMP)、抑癌基因p53(P53)及磷脂酰肌醇-3激酶(P13K)水平.结果 低中高3个质量分数实验组和对照组的人胃癌移植瘤生长抑制率分别升高了26.52％,58.75％,67.80％,46.25％,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).这4组人胃癌移植瘤中cAMP水平比模型组分别升高了35.61％,74.93％,130.48％,54.98％,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01).这4组的人胃癌移植瘤中P53水平比模型组分别降低了57.22％,79.45％,95.71％,80.10％,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01);这4组的的人胃癌移植瘤中P13K水平比模型组分别降低了33.11％,44.39％,97.42％,51.69％,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 十八烯酸对人胃癌移植瘤生长抑制的作用机制,主要与升高肿瘤组织内cAMP水平、抑制P53和P13K信号通路的活性有关.
关键词： 十八烯酸 人胃癌组织 重症联合免疫缺陷小鼠 -
不饱和脂肪酸对人胃癌细胞蛋白激酶B信号通路的调控作用
目的 研究不饱和脂肪酸对人胃癌细胞蛋白激酶B(PKB/Akt)信号通路的调控作用.方法 取胃癌患者肿瘤组织,移植到重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠上,将移植瘤组织酶解消化,分离出细胞进行传代培养.然后将传代细胞分为5组:低中高3个浓度实验组(不饱和脂肪酸0.3,0.6,1.2 mg· L-1),对照组(5-氟尿嘧啶10 mg·L-1),溶剂对照组(二甲基亚砜30 μL·L-1),给药后培养48 h.用噻唑蓝(MTT)法检测不饱和脂肪酸对人胃癌细胞的增殖抑制作用,用酶联免疫吸附法检测胃癌细胞中p21、双微体基因(MDM2)及PKB/Akt表达水平.结果 高中低3个浓度实验组入胃癌细胞增殖抑制率比对照组分别升高了31.7％,55.51％,68.28％;这3组的p21和MDM2水平比对照组分别升高了4.39％,80.12％,161.36％和19.81％,97.76％,207.35％;这3组的PKB/Akt水平比对照组降低了13.31％,57.69％,78.71％.结论 不饱和脂肪酸对人胃癌细胞增殖的抑制作用主要与升高肿瘤细胞内p21与MDM2水平和抑制PKB/Akt信号通路的活性有关.
关键词： 不饱和脂肪酸 人胃癌细胞 重症联合免疫缺陷小鼠 -
IL-21基因对宫颈癌HeLa细胞抑制作用的体外试验研究
目的 探讨白介素-21 (interleukin-21,IL-21)基因对宫颈癌细胞(HeLa细胞)的作用.方法 构建人源性IL-21质粒并电转染至体外培养的宫颈癌细胞(HeLa细胞),选择性培养获得表达IL-21的HeLa细胞(HeLa-IL-21).将96只重症联合免疫缺陷(severe combined immune deficiency,SCID)小鼠随机分为免疫重建组与非免疫重建组,每组各48只.采用人外周血淋巴细胞重建免疫重建组小鼠的免疫功能.再分别将两组小鼠随机均分为A、B、C3个亚组,每组各16只.其中A组小鼠接种HeLa细胞,B组小鼠接种HeLa-空载体细胞,C组小鼠接种HeLa-IL-21细胞.比较各组小鼠肿瘤生长情况、小鼠脾细胞与不同靶细胞作用时干扰素-γ(IFN-γ)表达水平及脾细胞毒性,以探究IL-21基因抗肿瘤的作用机制.结果 接种后第20、30、40天,非免疫重建A组小鼠肿瘤体积分别为(28.4±3.7) mm3、(95.7±13.0) mm3、(232.4±21.6) mm3,均明显大于免疫重建A组小鼠[(19.7±2.9)mm3、(65.7±12.7) mm3、(154.7±16.9) mm3] (P＜0.05),免疫重建C组小鼠肿瘤体积分别为(16.4±2.7) mm3、(48.5±11.0) mm3、(53.4±10.7) mm3,均明显大于免疫重建C组小鼠[(12.4±2.1) mm3、(22.7±5.6) mm3、(37.4±10.3)mm3,](P＜0.05),免疫重建C组小鼠肿瘤体积均明显小于免疫重建A组小鼠(P＜0.05),非免疫重建C组小鼠肿瘤体积均明显小于非免疫重建A组小鼠(P＜0.05).检测不同来源小鼠脾细胞与不同靶细胞作用时IFN-γ表达水平发现,HeLa细胞作为靶细胞时,各组小鼠IFN-γ高表达(P＜0.05);较非免疫重建组小鼠,免疫重建组小鼠对不同靶细胞IFN-γ高表达(P＜0.05);较免疫重建A、B组小鼠,免疫重建C组IFN-γ高表达(P＜0.05).小鼠脾细胞毒性实验发现,转染IL-21质粒能增加小鼠脾细胞对HeLa细胞的杀伤毒性.结论 细胞因子IL-21有一定的抗肿瘤作用,可能与其增强T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用有关,为宫颈癌患者的免疫治疗奠定了一定的研究基础.
关键词： 白介素-21 宫颈癌 Hela细胞 重症联合免疫缺陷小鼠 -
γ-分泌酶抑制剂对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226细胞小鼠移植瘤的抑制作用
目的 探讨通过γ-分泌酶抑制剂MRK003抑制Notch1及蛋白激酶B(AKT)表达,观察其对人多发性骨髓瘤(MM)小鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 将MM细胞系RPMI8226细胞皮下注射给NOD/SCID小鼠,建立人MM小鼠移植瘤模型.将成瘤小鼠分为两组,实验组小鼠瘤体内每日注射γ-分泌酶抑制剂MRK003 5 mg.kg-1.d-1(0.2 ml),连续注射14d;对照组小鼠瘤体内注射等量的生理盐水,观察肿瘤生长情况.于末次注射第2天颈椎脱臼法处死小鼠后取瘤组织制作石蜡切片,应用免疫组织化学和Western blot方法检测Notch1、AKT表达.结果 RPMI8226细胞小鼠皮下注射后5～7 d成瘤,10～12 d肿瘤生长明显.注射MRK003前两组小鼠肿瘤平均体积分别为509.2和511.2 mm3(p＞0.05)；连续给药第9天测量实验组、对照组肿瘤平均体积分别为636.6和691.2 mm3(P＞0.01)；末次给药后的第2天实验组肿瘤体积为683.5mm3,明显小于对照组的1798.7mm3(p＜0.01)；免疫组织化学染色显示实验组小鼠肿瘤组织Notch1及AKT阳性率为11.1％和13.3％,明显低于对照组的95.6％和93.3％(P值均＜0.01)；Western b1ot结果显示实验组小鼠肿瘤组织Notch1及AKT蛋白的表达明显低于对照组.结论 γ-分泌酶抑制剂MRK003可抑制人MM小鼠移植瘤的生长,其作用可能是通下调Notch1信号通路蛋白的表达实现的.
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硫酸葡聚糖预处理方案在脐血移植中应用的初步研究
目的:进一步了解脐血造血细胞回巢潜能及硫酸葡聚糖(DS)的动员作用机制.方法:重症联合免疫缺陷小鼠经亚致死剂量γ射线照射或DS预处理后,进行经冻存后的人脐血移植,利用人粒-单系祖细胞培养及流式细胞术,检测植入小鼠骨髓、脾脏等器官中的人源性细胞.结果:与未预处理组相比,DS或照射预处理组移植受体鼠内人源CD45+,CD34+及CD19+细胞植入水平明显提高;DS预处理组植入水平虽较照射预处理组差,但毒性较低,小鼠存活率高达100%.结论:DS是一种安全、有效的预处理方案;DS对造血干细胞既有动员作用又有促进龛位腾出以供移植干细胞回巢的作用.
关键词： 造血干细胞移植 重症联合免疫缺陷小鼠 硫酸葡聚糖 -
应用人脐带血间充质干细胞修复小鼠皮肤缺损创面
目的 探讨人脐带血间充质干细胞(hUCB MSCs)在体分化为皮肤细胞、修复皮肤缺损创面的可能性. 方法 分离hUCB MSCs,体外培养、扩增并用BrdU标记后,种植于重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠背部全层皮肤缺损创面(治疗组),并设同体PBS对照组.于术后7,14 d观察并比较愈合率;于术后7,14,28 d创面活检,行常规病理组织切片HE染色、免疫组织化学染色检测BrdU及人角蛋白19的表达. 结果 术后7,14 d治疗组创面愈合率为(56.06±3.04)%和(94.75±1.89)%,对照组为(36.99 ±2.17)%和(84.63 ±2.28)%,治疗组高于对照组(P＜0.01).HE染色显示治疗组活检组织表皮层明显增厚,细胞及表皮嵴数目显著增多;在再生表皮的毛囊内层以及表皮基底层、棘层可见BrdU阳性标记细胞连续分布,且有部分细胞表达人角蛋白19;并在治疗组活检组织中发现有皮肤附属器形成. 结论 hUCB MSCs可在体分化为皮肤细胞与组织,可应用于皮肤创面的修复.
