首页 > 文献资料
-
HSV-gB、gD糖蛋白重组串联抗原表位蛋白的表达及鉴定
目的 制备HSV-gB、gD蛋白串联表位重组蛋白,为单纯疱疹病毒(HSV)疫苗的研制提供新型抗原蛋白以及新的抗原制备方法.方法 应用生物信息学软件laser gene DNASTAR分析HSV1-gB、gD和HSV2-gB、gD蛋白的抗原表位.选取9个表位,设计并合成表位串联重组蛋白编码基因X,构建其原核细胞表达重组体,在大肠杆菌BL21(DE3)表达该重组表位蛋白X,Western blot法(抗His标签)鉴定重组蛋白.结果 构建了HSV-gB、gD蛋白串联表位重组蛋白X的原核表达体,在BL21菌中表达了X蛋白,Western blot法(抗His标签)鉴定了重组蛋白X.结论 建立了制备HSV-gB、gD蛋白重组抗原表位蛋白的方法,为HSV疫苗的研制提供了可能的新型抗原蛋白.
-
人巨细胞病毒gB基因真核表达载体的构建与鉴定
目的克隆人巨细胞病毒(HCMV)gB基因并构建真核表达载体.方法根据Genebank中HCMV核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别加入BamH Ⅰ、Xho Ⅰ限制性内切酶位点,特异性扩增gB编码基因片段.TA克隆后经双酶切、PCR、测序等鉴定重组质粒,再经双酶切、连接构建含HCMV gB编码基因的真核表达载体,转染COS7细胞,通过间接免疫荧光法(IFA)检测该重组真核表达载体在COS7细胞中的表达.结果重组质粒经BamH Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切成大小为5.0kb与2.7kb的片段,表明表达载体pcDNA3.1中插入了HCMV gB基因片段,测序结果表明读码框正确.重组表达载体pcDNA3.1/gB转染COS7细胞后,经IFA检测胞浆中可见黄绿色荧光.结论成功构建了pcDNA3.1/gB真核表达载体,并可在COS7细胞中表达.
-
人巨细胞病毒gB基因真核表达载体在小鼠中的免疫效果
目的观察人巨细胞病毒(HCMV)gB基因真核表达载体在小鼠中的免疫效果.方法大量提取目的质粒,分3个剂量组进行多点肌肉注射免疫小鼠,利用MTT法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性,ELISA法检测小鼠血清中HCMV特异性抗体,中和试验检测小鼠血清中和抗体.结果 ELISA检测结果表明,与空白对照、空载体对照组相比,3个剂量组pcDNA3.1/gB质粒免疫后小鼠血浆中抗HCMV IgG抗体水平均明显增高(P＜0.05),中和抗体水平为1:20～1:40,而对照组血清中无中和抗体存在.淋巴细胞增殖指数免疫小鼠与正常小鼠差异无显著意义.结论已构建的HCMVgB基因真核表达载体可以诱导小鼠产生明显的体液免疫,为核酸疫苗研究奠定了基础.
