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内皮—单核细胞激活多肽酶Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性的作用位点
目的 研究内皮—单核细胞激活多肽Ⅱ(EMAP-Ⅱ)增强血肿瘤屏障(BTB)的作用机制.方法 采集出生3~5 d的Wistar胎鼠大脑皮质,应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后,接种于培养皿中进行脑微血管内皮细胞(BMEC)的原代培养;将BMEC与C6脑胶质瘤细胞共培养,构建体外BTB模型;实验随机分为4组(每组6例):对照组、EMAP-Ⅱ组、寡霉素组和寡霉素+EMAP-Ⅱ组.测定跨内皮阻抗值和辣根过氧化物酶流量,评估各组BTB通透性变化;Western blot检测BMEC上紧密连接(TJ)相关蛋白ZO-1的表达水平;双重免疫荧光法检测EMAP-Ⅱ和α-ATP合成酶在BMEC上的分布.结果 EMAP-Ⅱ组BTB通透性较对照组和寡霉素组显著增高(P<0.01);与对照组和寡霉素组比较,EMAP-Ⅱ组TJ相关蛋白ZO-1的表达水平显著降低(P< 0.01);EMAP-Ⅱ组与寡霉素组比较,EMAP-Ⅱ的作用受到ATP合成酶抑制剂寡霉素的显著抑制(P<0.01);EMAP-Ⅱ与α-ATP合成酶在BMEC膜上共定位.结论 EMAP-Ⅱ通过开放TJ增强BTB的通透性,BMEC膜上的α-ATP合成酶是其作用的位点.
关键词: 内皮—单核细胞激活多肽酶Ⅱ 血肿瘤屏障 通透性 紧密连接 α-ATP合成酶