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蛋白激酶A催化亚单位β（PRKACB）在非小细胞肺癌内的表达及临床意义
目的：测定蛋白激酶A催化亚单位β（PRKACB）基因及蛋白在非小细胞肺癌中的表达情况，研究其临床意义。方法应用RT-PCR及免疫组织化学法测定58例非小细胞肺癌及部分对应的癌旁组织内PRKACB的mRNA和蛋白水平的表达情况，结合临床资料进行多因素分析。结果与癌旁组织相比，PRKACB在肺癌组织内mRNA和蛋白水平均呈现低表达，差异具有统计学意义（P<0.05）；并且PRKACB与肺癌的TNM分期有相关性。结论 PRKACB在非小细胞肺癌内呈现低表达，并与临床分期相关，可能成为非小细胞肺癌临床诊断的一个重要指标。
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PRKACB基因真核表达载体的构建及稳转细胞株的筛选
目的:克隆人cAMP依赖性蛋白激酶催化亚单位β基因(PRKACB),构建重组真核表达载体pEGFP-C1-PRKACB,并筛选其稳定转染肺癌细胞株.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人PRKACB的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功.将重组载体转至真核细胞,采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因PRKACB的表达.应用新霉素(G418)筛选出稳定转染pEGFP-C1-PRKACB的非小细胞肺癌细胞株.结果:测序结果证实成功将PRKACB基因克隆至真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(1 200bp).RT-PCR及Western blot结果显示:转染后的细胞中PRKACB在转录和翻译水平的表达均有明显提高.稳定转染pEGFP-C1-PRKACB的细胞株经Western blot证实其PRKACB蛋白上调显著.结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-PRKACB,并筛选其稳定转染后上调显著的细胞株,为进一步研究PRKACB的生物学功能奠定了基础.
