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miR-200c调控RhoA基因表达介导RMP7增加血肿瘤屏障通透性机制的研究
目的：研究miR?200c调控Ras基因家族成员A（RhoA）表达介导RMP7增加血肿瘤屏障（BTB）通透性的机制。方法应用real?time PCR检测RMP7作用BTB后人脑微血管内皮细（ECs）miR?200c的表达；应用miR?200c模拟物和miR?200c抑制物分别转染GECs（ECs和U87脑胶质瘤细胞共培养的细胞），测量跨内皮阻抗值（TEER）、辣根过氧化物酶（HRP）渗漏量，分析BTB通透性；应用Western blotting检测RhoA的表达；应用免疫荧光方法观察GECs中RhoA表达和分布；应用双荧光素酶报告基因检测miR?200c转录后水平调控RhoA机制。结果 RMP7作用GECs后，使GECs内源性miR?200c表达显著降低；miR?200c模拟物和miR?200c抑制物成功转染到GECs中；miR?200c模拟物显著抑制RMP7诱导TEER值的降低、HRP的升高；miR?200c模拟物显著减少RhoA的表达，促使RhoA在GECs细胞质和细胞核分布减少；miR?200c模拟物转录后水平负性调控RhoA基因表达。miR?200c抑制物与miR?200c模拟物实验结果相反。结论 miR?200c转录后水平负性调控RhoA表达，介导RMP7增加血肿瘤屏障通透性机制。
关键词： miR-200c Ras基因家族成员A RMP7 血肿瘤屏障 基因表达调控 -
心痛泰抑制动脉粥样硬化兔炎症反应的作用机理研究
目的 观察心痛泰对动脉粥样硬化兔Toll样受体4(TLR4)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、髓过氧化物酶(MPO)、Ras基因家族成员A(RhoA)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响,探讨心痛泰治疗动脉粥样硬化的可能作用机制.方法 采用高脂饲料喂养联合免疫损伤建立兔动脉粥样硬化模型,分别予生理盐水、瑞舒伐他汀、心痛泰高、中、低剂量进行干预,采用Western blotting、RT-PCR检测胸主动脉TLR4、p38 MAPK、MPO、RhoA、eNOS蛋白及mRNA的表达水平.结果 与空白组比较,模型组TLR4、p38 MAPK、MPO、RhoA蛋白、mRNA的表达均升高,eNOS蛋白、mRNA的表达降低,差异有显著统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,心痛泰低剂量组MPO蛋白、MPO mRNA、RhoA蛋白、mRNA、p38MAPK mRNA表达均降低,eNOS蛋白、eNOS mRNA表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,心痛泰中剂量组p38MAPK、MPO、RhoA蛋白、mRNA及TLR4 mRNA表达均降低,eNOS蛋白、mRNA表达均升高,差异有显著统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,心痛泰高剂量组TLR4、p38 MAPK、MPO、RhoA蛋白、mRNA的表达均降低,eNOS蛋白、eNOS mRNA的表达均上升,差异有显著统计学意义(P＜0.01);阳性组与心痛泰高剂量组比较,TLR4、p38 MAPK、MPO、RhoA、eNOS蛋白及其mRNA的表达虽有差异,但均无统计学意义(P＞0.05).结论 心痛泰可能通过降低TLR4、p38 MAPK、MPO、RhoA蛋白及其mRNA的表达,上调eNOS蛋白、eNOSmRNA的表达,抑制血管内炎症,保护主动脉血管内皮,达到治疗动脉粥样硬化的目的.
