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杂交胰岛β细胞系文献资料
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1种新型功能性杂交胰岛β细胞系的建立
目的 通过应用基因转染及细胞融合技术构建永生化细胞,建立1种功能良好、无致瘤性、增殖可控的杂交胰岛β细胞系.方法 通过脂质体介导逆转录病毒载体SSR69转染至原代成纤维细胞中,筛选稳定表达SV40 LTag的永生化细胞.提取大鼠胰岛,通过胰蛋白酶及DNA酶裂解成单胰岛细胞.对永生化成纤维细胞及单个胰岛β细胞进行电融合,通过有限稀释法获得杂交胰岛β细胞克隆.比较杂交及正常β细胞内胰岛素的含量及对葡萄糖刺激胰岛素释放反应.通过RT-PCR及Western blot分析杂交胰岛β细胞中SV40 LTag、insulin、葡萄糖激酶(GK)及葡萄糖转运体-2(Glut-2)基因的表达.结果 建立的永生化成纤维细胞系的增殖能力明显优于原代成纤维细胞(P＜0.05).成功获得杂交胰岛β细胞克隆,其细胞呈短梭形或扁圆形,且具有贴壁生长等特性.透射电子显微镜下可见细胞内胰岛素分泌颗粒,杂交与正常胰岛β细胞之间细胞内胰岛素含量、胰岛素释放指数及insulin、GK、Glut-2蛋白及mRNA表达水平无统计学差异(P＞0.05),但2种细胞内insulin、GK、Glut-2的表达水平显著高于RIN-m5F细胞(P＜0.05).结论 可通过永生化成纤维细胞及单个胰岛β细胞电融合诱导生成杂交胰岛β细胞,且杂交细胞能够对葡萄糖的变化产生应答反应.
