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鸦胆子素D对高危型HPV16感染细胞的增殖抑制作用及对HPV16E6、HPV16E7mRNA表达的影响
目的 探讨鸦胆子素D对高危型人乳头瘤病毒(HPV) 16感染细胞的增殖抑制作用及对HPV16 E6、HPV16 E7mRNA表达的影响.方法 以人宫颈鳞状上皮永生化细胞株(Ect1/E6 E7)作为HPV16型感染的体外实验模型,而宫颈癌细胞株Caski作为阳性对照,不同浓度的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24 h、48 h、72 h,采用噻唑篮(MTT)法测定细胞体外增殖活性,采用Real-time PCR法检测HPV16 E6、HPV16 E7基因mRNA的表达.结果 与同期对照组相比,观察组不同浓度的鸦胆子素D作用的细胞生长抑制率(CGIR)均明显增高,另外,与同一浓度作用24 h相比,作用48 h、72 h的CGIR均明显增高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).即鸦胆子素D的浓度越高及作用时间越长,对Ect1/E6E7细胞生长的抑制作用越强.Ect1/E6E7细胞中,观察组不同浓度的HPV16 E6、HPV16 E7 mRNA的表达比较差异无统计学意义,两组比较差异亦无统计学意义(均P＞0.05).而随着鸦胆子素D溶液的浓度上升,Caski细胞中HPV16 E6、HPV16 E7 mRNA的表达升高,两组比较差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 鸦胆子素D可抑制HPV16 E6、HPV16 E7 mRNA表达和HPV16细胞的增殖.
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鸦胆子素D对HPV16感染细胞株的作用及其可能机制
目的：研究鸦胆子素D对高危型人类乳头瘤病毒（HPV）16感染细胞的增殖抑制作用、促凋亡作用及其可能机制。方法：以人宫颈鳞状上皮永生化细胞株（Ect1/E6E7）作为HPV16型感染的宫颈癌前病变的体外实验模型，用1、5、10、15、30μmol/L的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72 h，用3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法测定细胞增殖活性改变；以1、5、10μmol/L的鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72 h后，Cell cycle staining solution检测细胞生长周期变化，Hoechst 33258细胞核荧光染色法观察细胞凋亡情况，Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率。宫颈癌细胞株Caski含有完整的HPV16型E6、E7基因序列，以此作为阳性对照，通过实时荧光定量PCR技术检测两种细胞内HPV16 E6、E7基因mRNA的表达。结果：鸦胆子素D对Ect1/E6E7细胞具有明显的抑制体外增殖作用，MTT结果显示抑制作用呈时间和浓度依赖性（P＜0.05）。经1、5、10μmol/L鸦胆子素D体外作用48 h后，细胞生长周期停滞于G1期。流式细胞仪检测显示，各实验组细胞经鸦胆子素D作用48 h后，细胞凋亡率分别为（6.25±0.76）%（、20.21±1.32）%和（8.61±1.59）%，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。Hochest33258细胞核染色法显示细胞出现凋亡形态学改变。Real-time PCR技术检测结果显示Ect1/E6E7中HPV16 E6、E7 mRNA表达水平无明显下降，与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。而Caski中HPV16 E6、E7 mRNA表达水平下降，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：鸦胆子素D能有效地抑制Ect1/E6E7细胞增殖，其机制可能是通过抑制HPV16 E6、E7 mRNA表达从而促进细胞凋亡。
