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  • Mu2蛋白亚细胞结构定位及其相互作用蛋白的筛选

    作者:霍云龙;王春玉;赵越

    目的:采用果蝇S2细胞表达FLAG-Mu2蛋白,观察其亚细胞结构定位并纯化鉴定FLAG-Mu2质粒蛋白复合物,为 Mu2蛋白的研究提供依据。方法:FLAG-Mu2转染果蝇 S2细胞后表达 FLAG-Mu2融合蛋白,共聚焦激光扫描显微镜下观察 FLAG-Mu2蛋白的亚细胞定位,并通过核浆分离蛋白提取实验观察细胞核提取物中FLAG-Mu2蛋白的表达情况;采用免疫沉淀技术沉淀FLAG-Mu2复合物,并对其进行纯化及质谱测序以确定蛋白复合物的组分。结果:共聚焦激光显微镜下观察, FLAG-Mu2蛋白主要表达于细胞核中。核浆分离蛋白提取检测,融合蛋白相对分子质量约为140000,主要存在于细胞核提取物中。纯化 FLAG-Mu2蛋白复合物并进行蛋白质质谱分析,FLAG-Mu2复合物中可能含有 pif1A、CG31782、mip120、CG31690和 G protein-sa60A。结论:FLAG-Mu2蛋白在果蝇 S2细胞中主要定位于细胞核, FLAG-Mu2蛋白复合物中有5种可能的蛋白组分。

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