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B型肉毒神经毒素文献资料
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B型肉毒神经毒素重链C-端片段的修饰及表达
目的 修饰、克隆B型肉毒神经毒素重链C-端(BoNT/b HC)片段,并在大肠杆菌中进行表达.方法 以B型肉毒梭状杆菌8806株基因组DNA为模板,PCR扩增B型肉毒神经毒素重链的转膜区和结合区,并以高频密码子替换BoNT/b HC基因N-端的5个低频密码子.将目的 片段克隆入表达载体pET-42b,转化E.coli BL21(DE3)PlysS,IPTG诱导表达后.进行Western blot鉴定及可溶性分析.结果 重组表达质粒经PCR及酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为80 000,表达量占菌体总蛋白的32.6%,主要以包涵体形式存在;重组蛋白可被相应的抗BoNT/b全毒素的多克隆抗体所识别.结论 已成功修饰并表达了B型肉毒神经毒素重链C-端片段,为进一步研制重组疫苗及高特异性的诊断试剂奠定了基础.
