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甘氨酸甜菜碱转运蛋白文献资料
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中度嗜盐菌Halobacillus Y5甘氨酸甜菜碱转运蛋白opuD基因的克隆及功能分析
目的 克隆中度嗜盐菌Halobacillus Y5甘氨酸甜菜碱转运蛋白(betaine-choline-carnitine transporter,BCCT)opuD基因,对其结构及蛋白功能进行分析,并通过耐盐碱特性试验明确其功能.方法 将经过Sau3A Ⅰ部分酶切回收的Halobacillus Y5基因组总DNA,与用BamH Ⅰ酶切并去磷酸化的线性pUC18载体连接,电转化法导入E.coliKNabc感受态细胞中,涂布在含0.2 mol/L NaCl、Amp50的LBK固体培养基上,筛选阳性克隆,提取质粒测序后,进行生物信息学分析及耐盐碱特性检测.结果 已从中度嗜盐菌-喜盐芽孢杆菌Halobacillus Y5中成功克隆了1个新的耐盐碱基因,将其命名为HY5_opuD,该基因是1个新的甘氨酸甜菜碱转运蛋白基因,其编码的蛋白氨基酸序列和结构不同于以往报道的OpuD转运蛋白,且该基因能够使KNabc在0.2 mol/L NaC1、5 mmol/L LiCl及碱性pH8.0环境下生长.结论 成功克隆了1个新型的opuD转运蛋白基因,为开发利用中度嗜盐菌的耐盐碱基因奠定了理论基础.
关键词： 中度嗜盐菌 甘氨酸甜菜碱转运蛋白 基因克隆
