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Thermomonospora fusca文献资料
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重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A在毕赤酵母中的表达及纯化
目的 在毕赤酵母中表达Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.方法 提取Thermomonospora fusca基因组DNA作模板,PCR扩增纤维素酶Cel6A基因,克隆到毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,用电击法将线性Cel6A-pGAPZαA核酸片段转化毕赤酵母X-33株,克隆PCR鉴定法筛选阳性转化株,培养传代.选择稳定株,培养3 d后取培养液上清,用His-Bind Quick Cartridge 300提取表达的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.结果 一步His-Bind Quick Cartridge 300层析可提取电泳纯的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A,SDS-PAGE分析显示相对分子质量约为60 000,收率为200mg/L,用羧甲基纤维素法测活性为500 U/mg,用滤纸法测活性为1 U/mg.结论 已在毕赤酵母中成功表达了Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.
