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共表达口蹄疫病毒O型P1-2A-IL-18基因和Asia Ⅰ型P1-2A-3C基因重组鸡痘病毒的构建
目的 构建共表达口蹄疫病毒(FWDV)O型P1-2A-IL-18基因和Asia Ⅰ型P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒.方法 将酶切得到的FWDV O型P1-2A-IL-18基因和Asia I型P1-2A-3C基因克隆至鸡痘病毒表达载体pUTAL上,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-P1-2A-IL-18,与鸡痘病毒(FPV)282 E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过BrdU 3次加压筛选.挑选出单克隆重组病毒株,进行RT-PCR及间接免疫荧光(IFA)鉴定.结果 重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-P1-2A-IL-18经双酶切鉴定证明构建正确.经RT-PCR和IFA鉴定,证明所筛选的重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C-P1-2A-IL-18基因盒.结论 已成功构建了共表达FMDV O型P1-2A-IL-18基因和Asia Ⅰ型P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒.
关键词： 口蹄疫病毒 鸡痘病毒 P1-2A-IL-18基因 P1-2A-3C基因 -
Asia 1型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因真核表达质粒的构建及鉴定
目的 构建Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)P1-2A-3C基因真核表达质粒.方法 采集疫区牛的水疱液及水疱皮,经RT-PCR法扩增出Asia 1型FMDV的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切、连接,获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C.经酶切获得P1-2A-3C片段,插入真核表达载体pVAXⅠ pCMV启动子下游,构建pVAXI-P1-2A-3C真核表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,进行IFA检测.结果 Asia 1型FMDV真核表达载体pVAXⅠP 1-2A-3C,经酶切鉴定证明构建正确,转染HeLa细胞后,可见明显的黄绿色荧光,表明P1-2A-3C基因得到了表达.结论 pVAX Ⅰ-P1-2A-3C可作为Asia 1型FMD核酸疫苗的候选疫苗.
关键词： 口蹄疫病毒 P1-2A-3C基因 真核表达 核酸疫苗
