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利用同源片段交换提高腈水合酶的热稳定性
目的 通过计算机辅助半理性设计对热不稳定的恶臭假单胞菌Psedomonas putida NRRL-18668腈水合酶(EC4.2.1.84,nitrile hydratase,简称NHase)分子进行改造,提高酶催化的热稳定性和活性.方法 以嗜热假诺卡菌Pseudonocardia thermophila JCM3095和睾丸酮丛毛单胞菌Comamonas testosterone 5-MGAM-4DNHase作为模板,利用位点靶向氨基酸重组(site-targeted amino acid recombination,STAR)软件和分子动力学模拟分析选择合适的同源靶片段,通过同源交换替换Pseudomonas putida NRRL-18668NHase相应的片段,构建7株分别含有3种不同来源片段的新型杂合NHase,检测其热稳定性及活性;圆二色光谱分析野生酶和杂合酶3AB的二级结构.结果 7株杂合NHase (1A、2B、2C、2BC、3AB、3AC、3ABC)经50℃热处理10 min后,与野生型NHase相比,热稳定性分别提高了1.5～3.5倍,其中杂合NHase 3AB的热稳定性提高了3.5倍,酶活力提高了1.4倍;野生酶和杂合酶3AB二级结构中α螺旋含量分别为(34.56±3.21)％和(36.88±1.41)％,,β折叠含量分别为(19.78±3.21)％和(18.69±1.74)％.结论 通过利用热稳定性的同源片段来替换相应的热不稳定结构域这种理性设计的方法,成功将不耐热的NHase改造成耐热杂合NHase,同时提高了酶的比活力,并能维持NHase分子的基本二级结构不改变.
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吡嗪酰胺的研究进展
目的 介绍吡嗪酰胺的研究进展.方法 本文对吡嗪酰胺的化学合成法和微生物催化转化法进行了综述,并对两者进行了比较.同时,对吡嗪酰胺的应用也作了探讨.结果 与化学法生产吡嗪酰胺相比,微生物法催化转化 2-氰基吡嗪生产吡嗪酰胺,具有反应条件温和,产物产率高和纯度高等优点.结论 吡嗪酰胺是一种重要的抗结核药物.由于在医药和化工方面的广泛应用.其研究越来越引起人们的重视.
