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E0蛋白文献资料
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牛病毒性腹泻病毒E0和E2蛋白的融合表达及纯化
目的 在大肠埃希菌中融合表达牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E0和E2基因,并进行纯化.方法 采用RT-PCR法分别扩增BVDV BA株的E0和E2基因片段,通过酶切位点将二者串联并克隆至原核表达载体pET-28a上,构建重组表达质粒pET-28a-E0-E2,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的融合蛋白E0-E2经镍离子亲和层析纯化后,进行Western blot分析.结果 重组表达质粒pET-28a-E0-E2经双酶切和测序证明构建正确;表达的融合蛋白E0-E2相对分子质量约为68 500,表达量约占菌体总蛋白的20％,主要以包涵体形式存在;纯化的融合蛋白纯度达95％,可与牛病毒性腹泻病毒阳性血清发生特异性反应.结论 在大肠埃希菌中融合表达了BVDV E0和E2蛋白,纯化后的融合蛋白纯度较高,为BVDV抗体ELISA检测方法的建立及新型疫苗的研制奠定了基础.
