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生物活性小肽文献资料
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多拷贝GnRH类似物的原核表达及其纯化
目的 原核表达促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)类似物,并进行纯化.方法 人工合成8拷贝GnRH类似物基因,并利用同尾酶技术构建16拷贝的GnRH类似物基因,将8和16拷贝串联的GnRH类似物基因分别克隆至pGEX-2t原核表达载体上,构建GnRH类似物基因多拷贝串联表达的重组质粒,并转化大肠埃希菌BL21,利用优化后的IPTG诱导表达条件表达的重组GnRH类似物蛋白经Glutathione Sepharose 4B柱纯化并酶解后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 质粒pGEX-2t-8GnRH analogue和pGEX-2t-16GnRH analogue经双酶切及测序证明构建正确.当IPTG终浓度为0.2 mmol/L,37℃诱导2h时,破菌后上清中目的蛋白表达量高.表达的重组蛋白相对分子质量约37 000,可与兔抗GnRH单克隆抗体特异性结合,纯化后的重组蛋白相对分子质量约1 400,蛋白浓度约260 μg/ml.结论 已成功构建GnRH类似物多拷贝基因重组质粒,并在大肠埃希菌中高效表达,为多拷贝法生产生物活性小肽GnRH类似物奠定了基础.
