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  • 一种靶向治疗肺癌的TV-BIKDD质粒的纯化及检定

    作者:饶桂荣;石燕飞;黄彬;张换敬;范谕敏;莫国玉;陈光明;王洪敏;杨富强

    目的 提取、纯化靶向治疗肺癌的质粒TV-BIKDD,并进行质量检定.方法 采用碱裂解法对工程菌DH5α/TV-BIKDD菌体进行质粒初提,通过两步整体柱层析(离子柱层析和疏水柱层析)进行质粒纯化,并检测质粒含量、DNA超螺旋比例;用该方法连续纯化3批以超螺旋质粒DNA为样品的溶液制剂,对纯化后的质粒进行质量检定.结果 质粒初提液经离子柱层析纯化后,去除了大量的RNA和蛋白质,再经过疏水柱层析纯化,终获得的质粒DNA超螺旋比例为95.21%以上,质粒总回收率为78%.纯化后的3批溶液制剂全面质量检定结果均符合美国FDA标准以及我国人基因治疗用产品的技术指导原则规定.结论 建立了稳定的TV-BIKDD质粒的纯化工艺,为进一步制备临床药用级样品的规模化工艺研究奠定了基础.

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