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流感病毒超滤工艺的优化
目的 分析截留相对分子质量不同的超滤膜浓缩对流感病毒纯化效果的影响,以获得杂质含量低的高浓度病毒液.方法 将H1N1、H3N2、Bv和By 4个型别流感病毒分别接种9～11日龄鸡胚,经(34±1)℃培养72 h后,收获尿囊液,经连续流离心获得澄清的病毒液后,再进行截留相对分子质量1 000 000、300 000的超滤膜及其两种超滤膜组合的超滤浓缩,测定超滤前后的总蛋白含量、卵清蛋白含量和血凝滴度.结果 截留相对分子质量1 000 000的超滤膜超滤后,杂质去除率高,均在80％以上,截留相对分子质量300 000的超滤膜超滤后杂质去除率相对低,但后者病毒回收率较高,二者组合既能降低杂蛋白含量,又可提高病毒回收率.结论 流感病毒鸡胚尿囊液采用截留相对分子质量1000000+300000超滤膜组合超滤浓缩,病毒纯化效果较好.
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大量繁殖流感病毒的实验经验
目的大量增殖流感病毒,收集鸡胚尿囊液,满足微生物学病毒实验教学需要.方法对无菌的流感病毒毒种液进行一系列稀释,接种于9～11 d龄的鸡胚确定产生流感病毒血凝效价的佳接种浓度.结果效价1:640的毒种浓度稀释40～80倍接种鸡胚收获的尿囊液鸡红细胞凝集效价高.结论合适地毒种数感染鸡胚方可产生高效价的流感病毒数.
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ELISA法检测鸡胚中抗生素残留量的研究及其应用
用ELISA法测定氨苄青霉素、氯霉素在流感疫苗生产用海兰白鸡鸡胚中的残留.实验通过比较空白组0d龄全鸡胚和给药组0d龄全鸡胚中氨苄青霉素、氯霉素的残留量,说明了饮水给药的方法能够建立抗生素残留的动物模型.通过比较10d龄鸡胚尿囊液、卵黄中氨苄青霉素、氯霉素的残留量,说明尿囊液中的残留量明显高于卵黄.通过绘制残留曲线,可以看出氨苄青霉素、氯霉素在海兰白鸡体内蓄积迅速,却消除缓慢.通过实验初步摸索出了氨苄青霉素和氯霉素在鸡胚中的分布、代谢及残留规律,获得了部分生产用鸡胚尿囊液的抗生素残留量数据,为进一步控制流感疫苗生产用鸡胚质量提供技术保障.
