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速率比浊法测定13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量
目的 建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量,并对方法进行验证.方法 采用免疫化学系统(IMMAGE 800),选择非竞争性浊度模式,样品或标准品20μl,血清20μl,反应缓冲液200μl,增益系数为4,反应时间为2.5 min;样品离心沉淀后用缓冲溶液复溶,经NaOH解吸附法处理样品和标准品.对方法进行线性、重复性、准确性、专属性、适用性验证,并采用建立的方法检测3批13价肺炎球菌结合疫苗样品中的各型多糖抗原含量.结果 在设定的条件下,各型多糖抗原浓度在1～6 μg/ml范围内,线性良好(相关系数＞0.99);各型多糖抗原含量重复检测的相对标准偏差(RSD)均低于8％;13型多糖结合抗原含量的回收率在70％～ 130％之间;6A与19A型特异性血清与其他12型多糖抗原有交叉反应,但与阳性对照的比值均较低(＜5％),其他12种特异性血清特异性良好,无交叉反应;除1、3型抗原外,其余型别的游离多糖抗原基本不干扰结合抗原的检测结果.结论 建立的速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的结合多糖抗原含量重复性、准确性良好,1、3型结合抗原不适用于直接离心沉淀获得.
关键词： 速率比浊法 13价肺炎球菌结合疫苗 结合多糖抗原含量 -
速率比浊法测定13价肺炎球菌结合疫苗中的各型多糖含量
目的:建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗各型多糖含量.方法:采用免疫化学系统(IMMAGE 800),选择非竞争性浊度模式,样品或标准品20 μL,血清20 μL,反应缓冲液200 μL,增益系数为4,反应时间为2.5 min;用氢氧化钠解吸附法处理样品和标准品.结果:在本文条件下,1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型肺炎球菌荚膜多糖浓度在1～6 μg·mL-1检测范围内,线性良好(r＞0.99);重复性RSD均低于7％;各型多糖含量回收率在70％～ 130％;专属性考察结果显示,除9N型多糖的存在会干扰9V型多糖含量检测外,13价肺炎球菌结合疫苗中不包含的多糖(2、8、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F型)对此方法没有影响;耐用性研究结果显示,氢氧化钠解吸附法处理样品和标准品时,控制在10 s左右即中和解吸附过程中加入的氢氧化钠;用所建立速率比浊法检测13价肺炎球菌结合疫苗中的1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型肺炎球菌荚膜多糖含量,结果显示4批成品检测值在理论值的70％ ～ 130％之间.结论:所建立的检测方法准确,重复性好,可作为13价肺炎球菌结合疫苗的质控标准.
