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鲤鱼上皮瘤细胞和草鱼性腺细胞冻存效果的比较
鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)及草鱼性腺细胞(CO)可用于鱼类疱疹病毒、草鱼出血病病毒、鲤春病毒血症病毒等常见鱼类病毒的分离培养.探讨EPC及CO细胞的适宜冻存条件,可减少由于细胞在体外传代次数增加和外界环境的改变而引起的细胞生物学特性变化,从而提高上述病毒的分离效率.比较两种细胞的冻存效果,也可以从侧面了解两种细胞在培养特性上的差异.为此,本文进行了不同血清浓度和冻存方法对细胞贴壁率的影响试验,现报道如下.
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荧光RT-PCR检测鱼类鲤春病毒血症病毒的研究
本研究根据鲤春病毒血症病毒的核酸保守区序列,开发、设计多条引物和探针序列,从中筛选敏感、特异的引物、探针,在循环参数、病毒核酸提取方法及逆转录条件优化的基础上,建立了快速的检测鲤春病病毒的荧光RT-PCR检测技术.同时,又将该方法与一步法RT-PCR方法和细胞查毒方法进行了互相验证和对比研究,结果表明,荧光RT-PCR方法检测病毒悬液的灵敏度高,病毒悬液10-6稀释仍然可以检出,而细胞分离病毒方法测得的TCID50为10-4.本文还对北京地区出口渔场送检样品、人工实验感染该病毒鱼的病料进行了组织脏器中病毒分布和病毒含量的研究.结果显示,北京地区出口渔场送检样品未见细胞病变,所有检测样品均为阴性;病毒致死鱼的肠道病毒含量高,肠组织研磨稀释10-4倍仍然可以检出;其次是肾和鳃组织,检出极限为稀释10-3倍组织悬液;肉和脑组织中病毒含量较低,肉高能检出10-2倍组织悬液,而脑组织只能检出10-1倍组织稀释液.