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人呼吸道合胞病毒与结核分枝杆菌融合蛋白TB10.4-F1的免疫原性
目的 在大肠杆菌中表达并纯化人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的融合蛋白TB10.4-F1,检测其免疫原性.方法 将重组工程菌TB10.4/pET28a/BL21和TB 10.4-F1/pET30a/BL21经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达形式;表达的融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1经His TrapTM HP层析柱进行亲和层析一步纯化后,免疫BALB/c小鼠.小鼠分为TB10.4(30 μg/只)、TB10.4-F1(30 μg/只)及PBS(200μl)组,分别于0、2、4周免疫小鼠,于每次免疫前1d经尾部取血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中特异性的IgG水平;于末次免疫2周后摘眼球取血,分离血清,ELISA法检测特异性IgG水平及中和抗体滴度.结果 表达的重组融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1的相对分子质量分别约13 300和59 600,均以包涵体形式表达,表达量分别占菌体总蛋白的53.9％和12％;纯化后的重组融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1纯度分别可达95％和80％;与TB10.4组相比,TB10.4-F1组IgG水平明显升高,IgG1/IgG2a值明显降低,但仍大于1;TB10.4-F1组小鼠血清中RSV特异性中和抗体滴度可达log102.699.结论 融合蛋白TB10.4-F1免疫原性强,能激发出较为平衡的Th1/Th2反应,并产生抗HRSV的中和抗体.融合蛋白TB10.4-F1有望成为预防HRSV感染的候选疫苗.
