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猪γ干扰素文献资料
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猪γ干扰素基因的合成、表达及纯化
目的 通过人工合成猪γ干扰素(poIFN-γ)基因的编码序列,提高目的蛋白的表达.方法 根据poIFN-γ的氨基酸序列,选择大肠杆菌所偏爱的密码子,设计并合成了24个寡核苷酸片段.通过重叠区扩增法,利用PCR合成poIFN-γ的成熟蛋白编码基因,克隆人pGEM-7Zf(+)载体,转化大肠杆菌TG1.经测序证实后,构建原核表达载体pBV222/poIFN-γ,并转化大肠杆菌DH5γ,经诱导表达后,进行SDS-PAGE分析及纯化.结果 酶切及测序结果表明表达载体构建成功,工程菌诱导表达后的电泳图谱在相对分子质量约16 500的位置出现明显的目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的55%,占包涵体中总蛋白的80%,经Ni2+-NTA亲和层析纯化,纯度达90%以上.结论 已获得了纯度较高的目的蛋白,为下一步对猪γ干扰素进行复性及活性研究奠定了基础.
