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呋喃妥因代谢物AHD单克隆抗体的制备及鉴定
目的 制备呋喃妥因代谢物AHD单克隆抗体,并进行鉴定.方法 利用对羧基苯甲醛合成1-氨基乙内酰胺脲(AHD)的衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(4-CPAHD),通过活性脂法将4-CPAHD与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,获得免疫抗原4-CPAHD-BSA和包被抗原4-CPAHD-OVA,采用紫外分光光度法检测偶联是否成功.将人工合成抗原4-CPAHD-BSA免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选能稳定产生抗体的细胞株;通过间接ELISA法检测该细胞株分泌的单克隆抗体的效价、邻硝基-PAHD (2-NPAHD)对单克隆抗体的半数抑制浓度(IC50),并分析抗体的特异性.结果 偶联后4-CPAHD-BSA的大吸收峰有较明显的偏移,表明4-CPAHD与BSA偶联成功,平均偶联比为17.4∶1.制备的单克隆抗体的效价为1∶64 000,2-NPAHD对单克隆抗体的IC50为1.45 μg/L,单克隆抗体与同类抗生素及其代谢物无交叉反应.结论 制备的AHD单克隆抗体各项指标均较好,为呋喃妥因代谢物免疫检测试剂的研发奠定了基础.
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胶体金试纸法研究及在硝基呋喃类代谢物应用
目的:通过对胶体金试纸条的研究,并用该方法对硝基呋喃类代谢物残留量中呋喃妥因代谢物(AHD)进行测定.方法:用胶体金试纸法测定牛奶中硝基呋喃类代谢物残留量中呋喃妥因,与ELISA法进行比较.结果:本方法的测定结果与ELISA法检测结果相符,总符合率达100％;另外,两种方法的测定结果经配对t检验,结果差异无显著性(P＞0.05);回收率在85％ ～ 92％之间,相对标准偏差14.5％.结论:胶体金试纸条法的建立与研究,并在牛奶中硝基呋喃类代谢物呋喃妥因残留量的应用;具有快速、准确、省时、灵敏与简便的特点.
