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针刺对更年期脑缺血大鼠GFAP和OX42表达的影响
目的:研究针刺对更年期脑缺血大鼠缺血区脑组织GFAP和OX42蛋白表达的影响,探讨针刺对神经损伤的保护作用及可能机制.方法:雌性SD大鼠,经筛选为自然更年期,随机分为假手术组、缺血模型组和针刺组,采用右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)法建立脑缺血动物模型.针刺治疗后,采用Berderson神经体征评分法,观察大鼠神经行为学变化,光镜观察脑组织的病理学变化；免疫组织化学法检测脑组织中GFAP和OX42蛋白表达.结果:针刺能明显改善大鼠脑缺血后24h和7d的神经损伤症状；改善脑组织病理形态学损伤状态；对缺血24h和7d脑组织中GFAP和OX42蛋白表达有不同程度降低,与模型组相应时间点相比较,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01).结论:针刺能够抑制胶质细胞GFAP和OX42的活化,减轻脑缺血后的炎症级联反应,从而改善脑组织病理学损伤状态,起到神经保护作用.
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大鼠束缚后脑内小胶质细胞的反应
目的探讨大鼠束缚后脑内小胶质细胞的反应及其时程变化.方法将大鼠束缚于小的塑料桶内1,3或6 h,于解束后30 min被处死,脑组织进行抗OX42(小胶质细胞的特异性标记物)免疫组织化学染色.结果正常大鼠脑内的小胶质细胞一般为静息状态(静息型),其特点是OX42为阴性或浅染,在切片上不易发现或细胞形态不清晰.束缚1 h后,小胶质细胞为轻度反应,OX42浅染,细胞形态隐约可见,仅于下丘脑的视上核、室旁核和弓状核有散在的表达.束缚3 h后,小胶质细胞的反应达到高峰,由静息状态变为早期反应状态(早期反应型),OX42深染,细胞形态清楚,突起上可见到小棘.早期反应型小胶质细胞广泛分布于前脑:扣带回、新皮质浅层、隔外侧核、海马CA3、齿状回、杏仁中央核;间脑:下丘脑视前区、视上核、室旁核、第三脑室周区、弓状核、丘脑室旁核、外侧膝状体、内侧膝状体;脑干:中脑的上丘视性层、中脑导水管周围灰质、下丘的皮质部;脑桥的外侧臂旁核、蓝斑、A5区;延髓的延髓内脏带(MVZ)和三叉神经脊束核等处;束缚6 h后,小胶质细胞反应减弱,OX42浅染,分布范围减少,主要出现于扣带回、隔外侧核、海马、视上核、室旁核、中脑导水管周围灰质、脑桥的臂旁外侧核、蓝斑、延髓的延髓内脏带(MVZ).结论大鼠被束缚后脑内与应激相关核团的小胶质细胞由静息状态变为早期反应状态,反应的时程变化是束缚3 h明显,6 h次之,1 h少.
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LPS激发大鼠前脑神经元FoS和小胶质细胞OX42表达改变
目的探讨单次腹腔注射LPS后前脑神经元和小胶质细胞的可塑性变化和相互关系.方法应用抗Fos、抗TH或抗OX42单一、以及抗Fos/抗TH/抗OX42三重免疫组化标记方法,观察大鼠单次腹腔注射LPS后,Fos阳性神经元、Fos/TH阳性神经元、OX42阳性小胶质细胞在脑内的表达分布及时程变化,以及Fos阳性神经元或Fos/TH阳性神经元与OX42阳性小胶质细胞之间的关系.结果 Fos阳性神经元分布在额、顶皮质,扣带回和梨状皮质,外侧隔核腹侧部,杏仁中央核,海马CA2区、CA3区、齿状回,下丘脑室旁核、视上核、下丘脑外侧区和第三脑室周围灰质等.Fos阳性神经元在注射后30 min出现表达,注射后1～3 h为表达高峰.反应阳性小胶质细胞首先于脑室周围灰质出现,注射后6 h达到高峰,胞体变大,突起变粗,OX42呈阳性深染,密集分布于Fos阳性神经元的表达区域.下丘脑Fos/TH/OX42三重染色切片显示:由LPS激活的Fos/TH阳性神经元周围被OX42阳性细胞包绕并接触,表明神经元和小胶质细胞在对LPS刺激的反应中关系密切.结论在外周免疫刺激下,下丘脑、扣带回、梨状皮质和海马内的神经元和小胶质细胞可能参与免疫调节.
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氯胺酮鞘内给药对神经病理性痛大鼠脊髓背角小胶质细胞活化、TNF-α和IL-1β产生的影响
目的:探究鞘内注射氯胺酮(ketamine,KTM)对坐骨神经结扎(CCI)神经病理性疼痛大鼠模型行为、脊髓背角肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)以及小胶质细胞标记蛋白OX42表达的影响.方法:(1)建立CCI模型大鼠,鞘内注射KTM或MI(米诺四环素)进行干预,测定大鼠机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).(2)运用ELISA法检测TNF-α和IL-1β表达水平.(3)使用Western Blot法检测OX42的表达情况.结果:(1)KTM组和MI组大鼠MWT和TWL值较CCI组显著升高;KTM组大鼠MWT和TWL值高于CCI组(P＜0.05).(2) KTM组和MI组TNF-α和IL-1β表达水平低于CCI组(P＜0.05);其中KTM组TNF-α和IL-1β表达水平显著高于MI组(P＜0.05).(3) KTM组和MI组OX42表达水平显著低于CCI组;KTM组OX42表达水平高于MI组(P＜0.05).结论:鞘内KTM可以抑制脊髓背角小胶质细胞激活,减少TNF-α和IL-1β表达,显著改善坐骨神经结扎引起的神经病理性疼痛.
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哮喘大鼠脑内小胶质细胞激活的时程及形态变化研究
为探讨哮喘大鼠在连续激发不同阶段脑内小胶质细胞激活的时程及形态变化,本实验取健康雄性SD大鼠制备哮喘模型并诱发哮喘发作.48只SD大鼠随机分为对照组和实验组.对照组分为正常组和生理盐水组(n=8);实验组根据造模期间连续抗原激发的时间不同,分为连续激发3,7,14,21 d组(n=8).各组大鼠均进行呼吸功能检测、肺组织切片HE染色及脑组织抗OX-42免疫组织化学染色.结果显示:与对照组大鼠比较,实验组中各组大鼠呼吸功能各项指标均明显加重;肺组织病变程度逐渐增加;小胶质细胞由静息状态转变为激活状态,且数量明显增多.以上结果提示:哮喘大鼠脑内小胶质细胞被激活,在一定时间内小胶质细胞激活的程度随呼吸功能的降低及肺组织病变程度的增加而增加.
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模拟失重对成体侧脑室下区OX42阳性细胞表达的影响
为了观察大鼠模拟失重后侧脑室下区(subventricular zonc,SVZ)OX42阳性细胞的表达变化,本研究采用雄性SD大鼠尾部悬吊法建立模拟失重模型,按体重配对原则随机将20只大鼠分为4组:即模拟失重2周组(TS2W),模拟失重4周组(TS4W)和相应的正常对照(CON2W和CON4W)2组.用特异性标记小胶质细胞的OX42抗体行免疫组织化学ABC法染色,观察大鼠模拟失重后OX42阳性细胞在SVZ的形态和数量变化.结果显示:TS2W和TS4W组侧脑室下区OX42阳性小胶质细胞数显著增多,并呈显著活化状态,表现为阿米巴样小胶质细胞.本研究结果提示小胶质细胞可能参与失重的病理生理过程.
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上颌第一磨牙咬合升高对蓝斑Fos、OX42和GFAP表达的影响
目的:探讨脑桥蓝斑内神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞是否参与咬合升高后信息的传递.方法:64只雄性大鼠随机分为正常对照组(n=8)、假操作对照组(n=8)和咬合升高刺激组(n=48).咬合升高刺激组大鼠双侧上颌第一磨牙咬合升高约0.5 mm,以成活时间(1、2、4、8、24、72 h)又分为6个亚组 (每个亚组8只).常规固定、取材、恒冷箱切制含脑桥蓝斑的脑桥吻侧冠状切片(片厚30 μm),进行抗Fos-OX42或抗GFAP免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察.结果:正常对照组和假操作对照组没有差异,合并为对照组.对照组Fos表达很稀疏,实验组Fos表达明显增加,2 h达到高峰,然后下降.对照组OX42和GFAP表达很微弱,不同时间点没有明显变化,但实验组OX42和GFAP在8 h出现明显增强的阳性反应,24 h达到高峰,72 h下降.结论:咬合升高激活蓝斑内神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞,它们可能参与咬合升高后伤害性信息传入中枢的处理.
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脂多糖诱导大鼠延髓神经元FOS和小胶质细胞OX42表达水平的变化
目的:观察腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后,大鼠延髓神经元的Fos和小胶质细胞的OX42表达及时间变化的规律.方法:大鼠经ip LPS后于0.5,1,3,6,12,24,72 h处死、分别行固定、取材、制片.每个时间点的切片,用免疫组织化学ABC法进行抗Fos和抗OX42免疫组织化学染色.结果:① Fos反应在注射后1 h开始出现、3 h达到高峰,阳性产物主要分布在延髓内脏带(MVZ)内;② OX42反应在注射后3 h开始出现,12 h达到高峰,阳性产物主要分布在延髓内脏带、三叉旁核、楔外核.结论:LPS诱导下Fos阳性神经元和OX42小胶质细胞在延髓内脏活动调节中反应明显.且神经元反应高峰的出现先于小胶质细胞.
