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高免疫原性区文献资料
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高免疫原性骨桥蛋白的构建、表达及鉴定
目的 重组及表达高免疫原性骨桥蛋白(OPN)的融合蛋白.方法 使用Lasergene软件分析OPN基因,选取出免疫原性高的区域作为目的片段.提取总RNA,应用逆转录、PCR等技术扩增OPN基因目的片段,将其分别与带有His标签的pET-32a及GST标签的pGEX-4T-1载体连接.构建表达载体,诱导表达OPN融合蛋白(分别含有His,GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定.结果 扩增后获得一条351 bp的DNA片段,经测序鉴定为目的片段序列,并实现了可溶性高表达,经Western blotting鉴定为高免疫原性OPN融合蛋白.结论 采用原核表达经纯化后可获得高纯度高免疫原性的OPN融合蛋白,为进一步开发.OPN诊断试剂打下基础.