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半定量聚合酶链反应在PCR-RFLP酶切法测定基因多态性中的应用
目的 探索将半定量聚合酶链反应方法,应用于PCR-RFLP酶切法以提高基因多态性测定精确性和可重复性.方法 PCR扩增81例人维生素D受体基因BsmI位点多态性片段,分别在酶量不同的两种酶切体系中测定基因型;PCR产物经半定量后,再次用上述两种体系酶切.考察4次测定的一致性.结果 经产物半定量后用PCR-RFLP法测定VDR基因BsmI多态性,不同酶切系统测得基因多态性的一致性明显优于未经半定量的结果.结论 应用半定量PCR方法可明显提高PCR-RFLP酶切法的精确性和可重复性.
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干扰素诱导基因 MNDA 表达与系统性红斑狼疮的相关性研究
目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中干扰素（IFN）诱导基因MNDA mRNA 的表达及其与 SLE 疾病活动度的相关性。方法应用半定量聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测30例 SLE 患者与25例健康对照者的 MNDA mRNA 表达水平，并且分析其与尿蛋白、补体 C3、C4、抗 dsDNA抗体及 SLE 疾病活动指数（SLEDAI）积分的相关性。结果SLE 组与对照组相比，MNDA mRNA 表达显著增高（t ＝6．99，P ＜0．01）；SLE 组尿蛋白阳性患者的 MNDA mRNA 表达水平较尿蛋白阴性患者显著增高（t ＝3.08，P ＜0．01），尿蛋白阳性组及阴性组 AIM2 mRNA 表达水平均显著高于对照组（t ＝9．32、4．87，均 P ＜0.01）；SLE 组 MNDA mRNA 表达水平与抗 dsDNA 抗体、SLEDAI 积分呈显著正相关（r ＝0．534、0．508，均 P ＜0．05），与补体 C3、C4不相关（r ＝－0．472、－0．349，均 P ＞0．05）。结论SLE 患者 MNDA mRNA 的表达水平显著增高，并与肾脏损伤、疾病活动度相关，检测该指标对 SLE 患者的诊断和病情评估有较大价值。
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环状RGDfK肽对肌成纤维细胞整合素αVβ3表达调控的实验研究
目的 探讨环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-脯氨酸-赖氨酸短肽(Cyclo-RGDfK)能否提高去细胞瓣对肌成纤维细胞(myofibroblast)的黏附性能,以及RGD肽对Integrin αVβ3基因表达的调控.方法 组织块培养法获取大鼠主动脉壁肌成纤维细胞(myofibroblast),免疫荧光染色检测波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)分子在培养myofibroblast中的表达.将去细胞瓣随机分为3组(每组7个),A组:去细胞瓣未接受任何处理;B组:去细胞瓣与交联剂1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(EDC)反应36h;实验组:去细胞瓣与EDC反应36h后,再与Cyclo-RGDfK反应24h,使RGD肽共价结合于去细胞瓣.将第5代myofibroblast分别接种至各组瓣膜上.HE染色和扫描电子显微镜观察细胞黏附增殖状况,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Integrin αVβ3基因在各组的表达.结果 免疫荧光染色显示原代培养的myofibroblast生长良好,高表达Vimentin和α-SMA分子.HE染色和扫描电子显微镜显示myofibroblast在实验组的生长好于A组和B组,半定量PCR示Integrin αVβ3 mRNA在实验组的表达高于A组和B组,差异有统计学意义(P＜0.05),而A组与B组比较差异无统计学意义(P=0.900).结论 Cyclo-RGDfK促进myofibroblast在去细胞瓣上黏附,此效应可能与RGD肽上调Integrin αVβ3基因表达有关.
