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肿瘤发生中的表遗传学机制研究进展
表遗传学现象广泛地存在于各种生物中,而DNA甲基化作用引起基因转录沉默是表遗传现象形成的重要机制.现发现肿瘤中存在的表遗传改变主要包括普遍性低甲基化、个别基因的低甲基化、区域性CpG岛的高甲基化以及印记丢失.这些改变的直接的原因为DNMR的高表达和甲基化作用下游作用因子的参与.因此,研究肿瘤中DNA甲基化转移酶及其相互作用因子,将为肿瘤表遗传学的研究揭开新的一页.
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骨肉瘤相关抑癌基因表遗传学研究进展
骨肉瘤(osteosarcoma)是一种高侵袭性骨肿瘤,好发于儿童和青少年.骨肉瘤的发生是多基因、多步骤的复杂过程,已证明与抑癌基因异常表达有一定的相关性.
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DNMT1 siRNA 稳定表达载体的构建及其沉默效率的评价
目的构建能在肝癌细胞系SMMC-7721中稳定表达的高效率 DNMT1的RNA干扰载体.方法合成特异性干扰 DNMT1的小分子干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)分子,并与pSUPER-GFP载体连接.脂质体转染SMMC-7721细胞,并以G418筛选稳定表达细胞系.应用逆转录-聚合酶链反应和Western印迹方法对细胞系中 DNMT1的RNA表达水平和蛋白表达水平进行了分析.应用甲基化聚合酶链反应方法分析该细胞系中甲基化的基因E-钙粘着蛋白的甲基化状态.结果转染 DNMT1沉默载体的SMMC-7721细胞中 DNMT1的mRNA表达量为对照载体pSUPER转染SMMC-7721细胞的43%,而前者中DNMT1蛋白表达水平小于后者的10%. DNMT1的siRNA沉默效率大于90%,所构建的 DNMT1的siRNA有较高的沉默效率. DNMT1的表达抑制使E-钙粘着蛋白基因启动子区出现去甲基化.结论成功构建了能稳定表达的高效率 DNMT1的RNA干扰载体, 但目的基因沉默后其RNA表达水平与蛋白质表达水平表现不一致,评价siRNA干扰作用时应以目的基因相应蛋白质的表达水平为准.
