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蛋白质互作文献资料
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人类肝脏蛋白质组研究进展与展望
人类肝脏蛋白质组计划作为"后基因组"时代研究项目之一,这个计划对于全面认识人类肝脏有重要意义.由于蛋白质组学研究方法的发展为人类肝脏蛋白质组计划的进行提供了技术支持,生物信息学的快速发展也逐步解决了大量实验数据的收集、整理和分析的问题,同时在很大程度上提高了实验效率.本文重点介绍了人类肝脏蛋白质组中蛋白质相互作用和生物信息学在蛋白质组学中应用情况.
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运用酵母双杂交技术筛选LRRK2相互作用蛋白
目的:使用酵母双杂交来筛选LRRK2基因的相互作用蛋白,以研究其功能.方法:使用的诱饵片段包含MAPKKK和ROC功能域的一部分与COR功能域的全长.诱饵片段由聚合酶链式反应(PCR)扩增后连入酵母表达质粒pGBKT7,pGBKT7-bait质粒经测序验证后转化酵母茵株AH109,用免疫印迹来检验该质粒在酵母中的表达,人类胎脑cDNA文库被转化到能稳定表达诱饵蛋白的酵母菌株中,并铺到含有x-a-gal的四缺(SD/-Trp/-ku/-His/-Ade)的培养皿上.分别使用含有pGBKT7或pGBKT7-bait的AH109酵母菌株进行回交检测,进一步确证从初步筛选中获得的阳性克隆,并用生物信息学来分析其中的文库质粒.结果:获得9个真阳性的克隆,经生物信息学分析其中有3个克隆中的序列不在已知基因的开放阅读框内.其余6个克隆中的序列在以下几个已知基因的开放阅读框中:STRBP,BAGS,PTPN23,L3 MBTL3,RALYL,KIAA1783.结论:经酵母双杂交后成功地获得了真阳性克隆.这些相互作用蛋白将为研究LRRK2的功能、帕金森病发病机制和其他神经性疾病提供一些新的线索.
