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miRNA-194在裸鼠体内对骨肉瘤增殖和转移的影响
目的:通过使用慢病毒技术,建立肺转移裸鼠模型,观察miRNA-194对于骨肉瘤增殖和转移的影响,为研究miRNA-194在骨肉瘤中的作用及进一步的治疗提供理论依据.方法:使用慢病毒技术对骨肉瘤细胞系U2-OS进行转染后分组,然后将转染后的各组细胞注入裸鼠体内建立肺转移模型.5周后将裸鼠处死,观察和比较原位及肺部肿瘤的大小.结果:1)miRNA-194下调组裸鼠的原位肿瘤的体积(3920±860mm3)和重量(2.15±0.32 g)明显的大于其余各组(P＜0.05);2)miRNA-194上调组的肺部情况(36.7± 12.4个)明显的优于其余各组(P＜0.05);3)病理学检测证实其确实为原位骨肉瘤及肺部转移病灶.结论:miR-194可以明显的在裸鼠体内抑制骨肉瘤的增殖及肺部的转移,从而显示miR-194在动物水平在骨肉瘤中呈现明显的抑癌基因的作用,为接下来关于miRNA-194的各项实验奠定了良好的实验基础.
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miRNA-194对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607转移的作用研究
目的:通过建立表达不同高低水平miRNA-194的骨肉瘤细胞系,研究和探测miRNA-194对于骨肉瘤细胞转移特性的影响和作用.为进一步研究miRNA-194作为生物治疗的新靶点提供理论依据.方法:使用慢病毒技术,对骨肉瘤细胞进行转染和筛选,获得表达不同高低水平miRNA-194的骨肉瘤细胞系并进行分组.通过Transwell实验,划痕实验对miRNA-194在骨肉瘤中的作用进行探索.结果:1)慢病毒转染及筛选成功,获得表达不同高低水平miRNA-194的骨肉瘤细胞系;2)transwell迁移及侵袭实验中,miRNA-194过表达组的迁移(28.60±4.36)及侵袭(21.25±6.42)能力都显著的小于其余各组,相应的,miRNA-194沉默表达组(132.60±15.64;115.76±11.38)则高于其余各组.划痕实验结果显示,miRNA能够显著的抑制骨肉瘤细胞SOSP-9607的划痕愈合能力(P＜0.01).结论:miR-194能够对骨肉瘤细胞SOSP-9607的转移起到明确的抑制作用.MiRNA-194有望成为骨肉瘤转移与治疗的新靶点.
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miRNA-194在骨肉瘤中靶基因的预测和验证
目的:对miRNA-194在骨肉瘤中的作用机制进行探索和研究,为研究miRNA-194在骨肉瘤中的作用及可能的生物治疗提供理论依据和研究基础.方法:使用生物信息学软件对miRNA-194在骨肉瘤中可能的靶基因进行预测,并在基因水平和蛋白水平进行相应的验证.此外,利用荧光素酶基因报告实验对其靶基因(CDH2)进行DNA水平的直接验证.结果:使用生物信息学软件预测出了多个可能的潜在靶基因(367个,6014个和212个);荧光素酶基因报告实验显示野生PTEN-3'-UTR在miRNA-194上调组明显的低表达,同时下调组明显的高表达(P＜0.05);同时,western实验显示在蛋白水平miRNA-194直接靶向作用于CDH2(P＜0.05),而在mRNA水平则无明显作用(P＞0.05).结论:经预测和验证,CDH2是miRNA-194在骨肉瘤中的直接靶基因,为接下来关于miRNA-194在骨肉瘤中的各项研究奠定了良好的实验基础.
