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DDR2结构域与人IgG Fc融合载体的构建、表达与蛋白纯化
目的:构建DDR2与人IgG Fc融合的分泌型真核表达载体,验证其表达,纯化具有生物活性的分泌型蛋白.方法:分析DDR2蛋白质结构功能域,设计载体构建策略;扩增DDR2胞外结构域片段,将其克隆至PsecTag2B载体(带有人IgG Fc标签)中,在293T细胞验证其表达;用Protein G纯化柱纯化蛋白.结果:DDR2胞外结构域DS/Fc融合载体测序正确,转染293T细胞中后可成功分泌到细胞上清中,进一步用亲和层析法纯化得到高浓度蛋白.结论:重组载体特异性分泌DDR2胞外区蛋白,引入的Link序列是稳定分泌蛋白构象的基础,融合了人IgG Fc序列,可以作为DDR2配体拮抗剂靶向抑制DDR2与其天然配体的相互作用,对临床研究有重要作用.
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CA199、CA242、DKK1联合检测在胰腺癌中的诊断价值
目的 探讨糖类抗原199(CA199)、糖类抗原CA242(CA242)、分泌型蛋白Dickkopf-1(DKK1)对胰腺癌的诊断价值.方法 应用电化学发光免疫分析法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测112例胰腺癌和58例胰腺良性疾病组及62例体检健康者血清CA199、CA242和DKK1水平,采用Kruskal-Wallis单因素方差分析与Mann-Whitney秩和检验进行统计学比较,Logistic回归模型绘制ROC曲线并计算曲线下面积(AUCROC)以评价各指标的诊断价值.结果 胰腺癌患者血清CA199、CA242和DKK1水平明显高于胰腺良性疾病组及健康对照组,差异有统计学意义(H值分别为76.30、61.2、47.60,P<0.05);CA199、CA242和DKK1对胰腺癌诊断的敏感度分别为76.7%、69.6%、85.7%,特异度分别为95.0%、96.7%、92.5%,准确度分别为86.2%、83.6%、89.2%,3项指标运用回归方程P=1/[1+e-(-4.163+0.21X1+0.156X2+0.342X3)]综合分析诊断胰腺癌,敏感度、特异度和准确度分别为94.4%、90.8%、92.2%;CA199、CA242、DKK1及pre-1的ROC曲线下面积分别为0.736、0.862、0.886、0.949.结论 检测血清CA199、CA242和DKK1水平对胰腺癌的诊断具有重要的价值,3种标志物联合检测能明显提高胰腺癌诊断的敏感度和准确度.
