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逆转录病毒载体pMSCVneo文献资料
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Pmscv-Ubc9逆转录病毒表达载体的构建及产毒细胞系的建立
目的:构建含Ubc9的逆转录病毒表达载体,筛选建立携带该基因的高滴度产毒细胞系,深入研究SUMO化修饰的作用.方法:聚合酶链反应(PCR)扩增获取目的基因Ubc9,定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVneo,形成重组质粒pMSCV-Ubc9;脂质体法将pMSCV-Ubc9转染逆转录病毒包装细胞PT67;G418筛选产毒细胞克隆,扩大培养产毒细胞克隆,收获病毒感染NIH3T3细胞.结果:限制性酶切和测序鉴定证实Ubc9正确插入逆转录病毒表达载体.G418筛选获得稳定产毒的抗性细胞克隆,收获病毒能有效感染MH3T3细胞.结论:携带Ubc9基因的重组逆转录病毒表达载体pMSCV-Ubc9构建成功,转染PT67细胞后包装出重组逆转录病毒,进而筛选获得了能转录表达Ubc9的产毒细胞系PT67-Ubc9.
关键词： Ubc9基因 逆转录病毒载体pMSCVneo PT67细胞
